p53+/-基因敲除小鼠尿烷致癌性初步验证试验

目的：观察自主建立的p53^+/-敲除小鼠（命名为B6-Trp53tm1/NIFDC）模型,在给予尿烷后的体重、脏器重量、血液学及血生化指标变化,为该模型将来用于临床前药物短期致癌性试验的替代试验提供背景数据。方法：共设计3个组：阴性对照组（野生型小鼠,给予生理盐水）、尿烷组1（B6-Trp53tm1/NIFDC小鼠,给予1000 mg·kg^-1尿烷）、尿烷组2（野生型小鼠,给予1000 mg·kg^-1尿烷）,各组动物数量均为20只,雌雄各半。试验期间及试验结束测定各组动物的体重、脏器重量和相对脏器重量、血液学及血生化指标,并进行统计分析。结果与结论：与阴性对照组相比,尿烷给药第2、3、11及21周尿烷组1和尿烷组2动物的体重显著下降;尿烷组1动物肺脏和脾脏绝对重量显著升高;尿烷组1和尿烷组2动物肺脏相对重量显著升高;尿烷组1动物NEU、RDW%、CHDW%以及尿烷组2动物LYM%、BASO%显著升高;尿烷组1及尿烷组2动物的血生化指标无明显改变。     

模式小鼠总DNA三种提取方法比较

目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。     

不同周龄C57-ras转基因小鼠模型杂交1代CB6F1小鼠的脏器及血液学参数测定

目的 测定4周龄和8周龄不同性别CB6F1小鼠的脏器及血液生理生化指标正常值, 并比较周龄、性别对各项指标的影响。方法 分别取20只雌雄各半的4周龄和8周龄的CB6F1小鼠, 活体称重, 解剖称取主要脏器重量,采血测定血液生理指标和血清生化指标。结果 4周龄和8周龄CB6F1在体重、心、肝、脾、右卵巢、左睾丸、右睾丸、白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、血小板压积(PCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、淋巴细胞(LYM)、总蛋白(TP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、磷(P)、甘油三酯(TG)这22项指标上差异存在显著性(P<0.01), 在左肾、右肾、右肾上腺、胸腺、左卵巢、红细胞分布宽度(RDW)、单核细胞百分比(MON%)、尿素(BUN)这8项指标上差异有统计学意义(P<0.05)。从性别上比较, 4周龄CB6F1在体重、心、肝、脾、肺、左肾、右肾、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、LYM、ALT、ALP、葡萄糖(GLU)、P、总胆固醇(CHO)这14项指标上都有雌雄间的显著差异(P<0.01), 在右肾上腺、WBC、PCT、平均血小板体积(MPV)、总蛋白(TP)、BUN这6项指标上存在雌雄间的统计学差异(P<0.05);8周龄CB6F1在体重、心、肝、肺、左肾、右肾、MCV、PCT、LYM、淋巴细胞百分比(LYM%)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、ALT、GLU、P、CHO这15项指标上都有雌雄间的显著差异(P<0.01), 在WBC、RBC、MPV、中性粒细胞(NEUT)、TP这5项指标上存在雌雄间的统计学差异(P<0.05)。结论 本文测定了不同周龄不同性别CB6F1小鼠的脏器及血液生理生化指标, 为其建立正常检测指标和应用提供参考。     

C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究

目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78％,移植产仔率是21.31％,后代的阳性率是23.08％;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33％,移植产仔率是15.78％,后代的阳性率是33.33％.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.     

模式小鼠总DNA三种提取方法比较研究

目的: 建立简便、快捷、经济的模式小鼠基因型鉴定中总DNA提取方法,达到快速鉴定大批量模式小鼠的实验目的。方法：采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度和得率并通过PCR方法比较其鉴定结果。结果：DNA得率方面苯酚抽提法最好,异丙醇沉淀法最差;纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序呈现依次递减的趋势。三种总DNA均可作为PCR反应模板,进行基因型鉴定。鼠耳煮沸法实验时间明显低于另两种方法,且所得总DNA常规-20℃保存7天、30天后依然可作为PCR反应模板使用。结论：鼠耳煮沸法操作简单且成本最低,是一种切实可行的模式小鼠基因型鉴定中总DNA提取方法。     

不同小鼠品系囊胚受体对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响

目的 为了考察不同品系的小鼠囊胚对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响，进而提高通过在C57BL/6胚胎干细胞中同源重组制作基因打靶小鼠的效率。 方法 本研究除了选取近交系B6(Cg)-Tyrc-2J和BALB/c品系，还选了封闭群ICR作为囊胚供体鼠，通过在TLX3、Ai3K和SL三个不同基因修饰ES细胞的种系嵌合实验中，平行比较三者的囊胚利用率、嵌合鼠获得效率以及种系遗传效率等三个方面，并进一步针对囊胚来源这一因素对效率的影响进行统计学分析。 结果 本研究中三种ES细胞均未能通过B6(Cg)-Tyrc-2J品系囊胚的注射获得种系遗传。而BALB/c品系与ICR品系相比，囊胚利用率明显低于ICR品系（P< 0.05）；嵌合鼠获得效率方面，BALB/c与ICR相当（P= 0.115）；而种系遗传效率方面，BALB/c品系显著高于其他品系（P< 0.01）。 结论 BALB/c品系在C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率方面确实具有优势，然而，由于BALB/c囊胚较难获得，并且存在发育延迟和透明带脆性高等问题，而ICR品系在囊胚获得和利用方面的效率明显高于BABL/c，并且也可以支持C57BL/6胚胎干细胞的种系遗传，因此也是C57BL/6胚胎干细胞囊胚注射中较好的选择。     

C57-ras转基因小鼠模型杂交1代CB6F1的生长发育特性

目的 测定自主建立的转基因致癌性模型C57-ras小鼠与BALB/c 小鼠杂交1 代的生长发育特性参数, 为该模型的商业化供应提供基础数据。方法 将雄性转基因阳性C57-ras小鼠与野生型雌性BALB/c 小鼠交配, 获得杂交1 代(CB6F1 c-Ha-ras^+/-)并测定平均产仔数、离乳率、阳性鼠生长发育情况、转基因阳性率等参数。结果 在生长发育方面, 雌鼠平均每窝产子数为8只, 离乳率为90%, 雄雌性别比符合预期。CB6F1的平均出生重为(1.73±0.05)g, 10周龄时阳性鼠平均体重雌性(24.38±1.74)g, 雄性(29.42±1.72)g。雄性鼠体重明显高于雌性, 差异存在极显著性(P<0.01);基因型检测阳性率为46.9%, 符合遗传规律。结论 转基因致癌性模型C57-ras小鼠与BALB/c 小鼠杂交1 代的生长发育特性正常, 可实现规模化商业供应。     

我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展

目的：综述我国临床前药物致癌试验转基因动物模型研究进展。方法：介绍致癌试验常用转基因动物模型的构建、利用转基因动物模型开展致癌试验的优势、国际认可及国际监管机构新药申报中的应用、国内外致癌试验相关指导原则、我国开展基于转基因动物致癌试验面临的困境以及转基因动物模型构建的最新进展。结果与结论：基于转基因动物模型的致癌试验具有诸多优势也是目前国际趋势,在我国建立临床前药物致癌试验转基因动物模型非常必要。