银染色法检测血痕中转铁蛋白和α_1-抗胰蛋白酶亚型

用银染色方法检测血痕中的转铁蛋白(Tf)和α_1-抗胰蛋白酶(Pi)亚型,并与考马斯亮蓝染色法进行对比。用银染色法可以检出室温及4℃保存6个月血痕中的Tf亚型及室温保存4周和4℃保存10周血痕的Pi亚型。与常规的考马斯亮蓝染色法相比,银染色法明显延长了血痕的可检出时限。     

几种可见染色法对特殊蛋白的检测

目的：比较7种可见染色法对特殊蛋白灵敏度的检测差异。方法：采用一向电泳分离5种蛋白,1种为普通蛋白,其他4种为糖蛋白或磷蛋白代表。考察比较传统考马斯亮蓝染色、UPS染色、BYT-银染、YAN-银染、BI0-银染以及UPS1-银染,UPS2-银染7种可见染色方法对特殊蛋白灵敏度检测的差异。结果：7种可见染色法的共同点是对普通蛋白的灵敏度都要高于特殊蛋白。染料染色中UPS染色优于传统考染,5种银染法中UPS1-银染染出的蛋白条带均一性较强且背景清晰,UPS2-银染次之。结论：考察的7种可见染色法对特殊蛋白的染色结果显示,UPS1-银染染色时间较短,灵敏度最高。     

双向电泳分离技术的比较和优化

目的:比较优化人血清蛋白双向电泳(2-DE)分离技术,提高2-DE对血清蛋白的分辨能力.方法:收集健康人群标本,分别进行多次双向电泳,比较高丰度蛋白的去除前后及传统的考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色两种不同的染色方法等因素对双向电泳图谱质量的影响.结果:考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色相比,血清2-DE图谱检测到平均蛋白质点数分别是(324±25)(n=3)和(785±30)(n=3);去除高丰度蛋白前后比较,未做处理的血清、去除蛋白和IgG血清的2-DE图谱检测到平均蛋白点数分别是(501±25)(n=3)和(813±22)(n=3).结论:去除高丰度蛋白并结合SYPRO-ruby荧光染色可以大大提高血清低丰度蛋白的解析能力.此方法优化了血清蛋白质2-DE技术,为进一步开展疾病血清蛋白质组研究奠定了基础.     

用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色改良法检测膜蛋白

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)一般采用考马斯亮蓝染色,这种染色步骤简单但敏感度低,样品中一些微量的蛋白质组分往往不能显示。为了提高检测蛋白质的能力,也有用放射性同位素标记蛋白质,再结合放射自显影;此法检测的灵敏度高但手续繁杂、过程很长。1979年Switzer介绍一种银染色法,其灵敏度虽可与放射自显影媲美;但操作繁杂、较难掌握且硝酸银用量大。为此我们对PAGE银染色法作了改进,使其操作简化、重复性好,并节省80％以上的硝酸银用量;对检测细胞膜蛋白的灵敏度,远高于考马斯亮蓝染色法。     

王不留行及其伪品的蛋白质电泳鉴别

目的对王不留行及伪品进行了电泳鉴州,并考察考马斯亮蓝G-250的染色效果及电泳方法的效果。方法可溶性蛋白质凝胶电泳,结果王不留行及伪品的电泳图谱存在显差异。结论电泳图谱可作为王不留行及伪品的鉴别依据．所用电泳方法简便、怏捷,弩马斯亮蓝G-250可用于中药的电泳鉴别。     

凝胶电泳考马斯亮蓝微波染色

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)后的考马斯亮蓝 R2 5 0染色常用于观察蛋白质分离效果和定量分析 ,染色时间通常为 1～ 4 h,脱色需 8～ 12 h,笔者尝试将微波技术应用于蛋白质凝胶考马斯亮蓝的染色和脱色。1　材　料1.1　微波炉 1台 75 0 W (NN- 5 6 5 2 S,日本松下公司 ) ,分高、中、低火等六档。1.2　洗液 A　甲醇 4 5 m L 和等量双蒸水混合后加冰醋酸10 m L。1.3　洗液 B　无水酒精 75 m L和冰醋酸 2 5 m L混合后加双蒸水至 10 0 0 m L。1.4　考马斯亮蓝染液的配制　考马斯亮蓝 0 .2 5 g溶液于洗液 A10 0 m L。2　方　法2 …     

精子形态学分析中染色方法的比较

目的：评价改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对形态正常精子率和顶体完整率检测结果影响。方法：分别采用改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对55例男性不育症患者精液涂片染色,计算形态正常精子率和顶体完整率。结果：①3种染色方法检测的形态正常精子率两两比较,差异均无显著性(P>0.05),瑞-吉染色法评价颈部和中段缺陷精子率及尾部缺陷精子率显著低于改良巴氏染色法和考马斯亮蓝染色法（P<0.05）。②3种染色方法检测的Ⅰ型、Ⅳ型顶体完整率两两比较,差异均无显著性 (P>0.05),改良巴氏染色法检测的Ⅱ型和Ⅲ型顶体完整率明显高于考马斯亮蓝染色法和瑞-吉染色法（P<0.05）。③3种染色方法检测的形态正常精子率间均呈显著正相关关系(r=0.535、P<0.01, r=0.601、P<0.01,r=0.329、P<0.05)。3种染色方法检测的顶体完整率间均呈显著正相关关系（r=0.604,P<0.01, r=0.682、P<0.01, r=0.446、P<0.01）。结论：3种染色方法均可作为检测人精子形态和顶体完整率实用方法,其中改良巴氏染色法更适于精子形态学分析,瑞-吉染色法更适于顶体完整率判读。     

蛋白质组学技术用于功能性胃肠病研究

目的:探讨将蛋白质组学方法用于功能性胃肠病发病机制研究的可行性。方法:选择发病率较高的肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)亚型患者作为研究对象,运用蛋白质组学方法,双向凝胶电泳后应用不同染色方法进行染色,Image Master 2D Elite分析软件对图像进行分析。结果:考马斯亮蓝法染色用于腹泻型IBS患者,平均得到蛋白质点426个;硝酸银染色法用于便秘型IBS患者,平均得到蛋白点581个。结论:双向凝胶电泳法可得到IBS患者结肠黏膜组织的蛋白质组图谱;硝酸银染色法的分辨率明显高于考马斯亮蓝法。     

结肠癌细胞裸鼠成瘤组织双向凝胶电泳图谱的建立与优化

目的建立吲哚美辛处理与未处理组结肠癌HCT116细胞裸鼠成瘤组织的双向凝胶电泳图谱。方法用双向凝胶电泳技术分离吲哚美辛处理与未处理组的裸鼠瘤组织总蛋白,银染及胶体考马斯亮蓝染色,Image Scanner扫描仪扫描凝胶。结果获得了背景清晰、重复性好的双向凝胶电泳图谱,两种染色凝胶相比,上样量增加的胶体考马斯亮蓝染色凝胶蛋白质点数目及丰度增加。结论双向凝胶电泳图谱的建立与优化为研究吲哚美辛抗结肠癌作用奠定了基础。     

一种快速的蛋白酶活力测定法

根据蛋白质可与染料考马斯亮蓝G-250结合呈蓝色,用其直接显色(A_(680 nm))测定剩余蛋白质量,     

大鼠脑组织蛋白质双向电泳技术的建立

目的：建立大鼠脑组织蛋白质双向电泳技术。方法：利用不同体积的裂解液提取大鼠脑组织中的蛋白质，并通过不同的蛋白质上样量（1mg，2mg，3mg），进行双向电泳，考马斯亮蓝染色，图谱分析。结果：在等电点3～10，分子量6．5～200ku范围内分离得到蛋白质斑点为，1mg蛋白质上样量为546个蛋白质斑点，2mg为780个，3mg为805个斑点。2mg蛋白质上样量的双向电泳图谱更清晰，分离更好。结论：成功建立了大鼠脑组织蛋白质的双向电泳技术。     

大鼠脊神经蛋白质组研究中双向电泳技术的建立

目的探讨双向凝胶电泳技术在大鼠脊神经组织蛋白质组研究中的应用。方法应用高蛋白溶解度裂解液提取正常大鼠脊神经组织蛋白质，以固相pH梯度等电聚焦电泳和垂直板SDS-PAGE电泳结合的方法进行蛋白质的分离，使用银染和考马斯亮蓝两种方法分别对凝胶进行染色。结果正常大鼠脊神经组织样品在18cmpH3～10非线性固相pH梯度干胶条，12．5％的Acr-Bis PAGE的胶上可分离到900个左右蛋白点，不同凝胶间蛋白点平均匹配率为80％。结论实验所采用的高离液剂体系的裂解液，及对第一向和第二向电泳过程中各个因素及环节的把握，是获得大鼠脊神经组织蛋白质双向电泳图谱的关键。     

PAGE一步性低背景CBBR_（250）染色方法的探讨

传统的考马斯亮蓝Ｒ２５０（ＣＢＢＲ２５０）染色方法存在背景深，耗时长，试剂耗用多的缺点，考马斯亮蓝Ｇ２５０（ＣＢＢＧ２５０）虽然需时短，但其灵敏度效低。本文探讨了一步性低背景ＣＢＢＲ２５０染色方法在蛋白质ＰＡＧＥ中的应用，结果表明使用乙醇－乙酸－水染色系统，ＣＢＢＲ２５０的最佳工作浓度为０．００４‰～０．００８‰，染色时间为８～１０ｈ，灵敏度为０．５μｇ／带。一步性ＣＢＢＲ２５０染色方法与传统的ＣＢＢＲ２５０染色方法相比，有需时短，背景浅，试剂用量少的优点，可用于蛋白质的定性和定量研究。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳中一种快速敏感的蛋白质双染色法

本文报道了我们在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中改良了一种考马斯亮兰(Coomassic Brillant Blue,CBB)与铬银染色法相结合的新的蛋白质双染色法。这种方法比单一的CBB染色或单一的银染色敏感,比CBB与氨银双染法简便,一般实验室也能采用本法。     

吡虫啉对生菜中蛋白质和GSH含量的影响

目的研究在吡虫啉作用下,生菜中蛋白质和谷胱甘肽（GSH）含量的变化。方法采用考马斯亮蓝G-250染色法和Ellman法分别测定蛋白质和GSH的含量。结果在吡虫啉胁迫下,高浓度组和低浓度组中的蛋白质和GSH的合成受到明显抑制,二者含量达到最低值后又慢慢增加,最终基本与对照组一致。结论在生菜遭受吡虫啉胁迫初期蛋白质和GSH含量即变化显著,可作为吡虫啉迫胁生菜比较敏感的生物指标。     

杜氏盐藻高盐诱导蛋白的分离和鉴定

目的:对高盐和低盐培养条件下杜氏盐藻蛋白质组的双向电泳(2-DE)图谱进行比较分析,筛选高盐诱导蛋白并鉴定.方法:提取高盐(3.5 mol/L NaCl)和低盐(1.5 mol/L NaCl)培养条件下杜氏盐藻的总蛋白并进行2-DE,考马斯亮蓝染色后用Image-Scanner扫描仪扫描,ImageMaster 5.0...     

3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较

目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法.方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1 mg蛋白,以17 cm pI 3～10 固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱.结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均＜0.05).结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础.     

用双向电泳及蛋白质印迹技术筛选乳腺癌相关抗原

目的：应用双向电泳及免疫印迹技术分析乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,寻找乳腺癌相关抗原。方法：提取乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,双向电泳技术（2-DE）对总蛋白进行分离后转膜,将健康人血清（对照组）和乳腺癌患者血清（实验组）作为一抗进行蛋白质印迹（Western blotting）分析,寻找杂交蛋白点的差异。结果：MCF-7总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱共检测到248个蛋白质斑点,Western blotting显示实验组抗原抗体反应点23个,对照组为13个,找到10个差异蛋白点。结论：乳腺癌患者血清中的抗体表达水平有改变,这10个差异蛋白点有可能是乳腺癌相关抗原。     

双向凝胶电泳分析脾脏蛋白组学的方法研究

目的优化双向凝胶电泳的实验步骤,总结一套适用脾脏组织的双向凝胶电泳技术。方法对双向电泳实验中的关键环节：蛋白沉淀方法;胶条PH的选择;聚焦条件等进行研究与优化,考马斯亮蓝染色后进行凝胶图像比较。结果Cleaningup沉淀蛋白,聚焦电压达到11000伏小时（110kvhs）,可以得到多达1000个蛋白点的2Dgel（two—dimensionalpolyacrylamidegel）。结论建立了脾脏双向电泳的具体方法,得到分辨率高重复性好的2Dgel,为脾脏的蛋白质组学研究奠定了基础。     

HepG2细胞蛋白质组双向电泳条件的优化与图谱的建立

目的：优化双向电泳的样品处理方法,建立HepG2细胞蛋白质双向电泳图谱。方法：用含10%胎牛血清的RPM11640培养液培养HepG2细胞,胰酶消化后收集细胞,加入细胞裂解液使细胞充分裂解,冰浴超声离心后取上清液进行双向凝胶电泳,电泳图谱经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析。结果：通过对HepG2细胞蛋白提取液进行双向电泳,在13 cm pH 3~10（L）IPG胶条上可分离到（297±23）个重复性及分辨率均较好的蛋白质点,蛋白斑点的匹配率为83%。结论：HepG2细胞蛋白质组双向电泳条件的优化及图谱的建立,为进一步研究肝癌蛋白质组学奠定了基础。