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1.
目的:研究钙敏感受体(CASR)基因启动子区甲基化状态与食管鳞状细胞癌(ESCC)发生之间的关系,探讨CASR甲基化作为潜在的ESCC早期诊断标志物的可能性。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法分析6株食管癌细胞系、8例正常食管黏膜组织以及68例原发ESCC组织中CASR启动子区的甲基化状态。采用半定量RT-PCR方法分析甲基化酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza)处理前后食管癌细胞系中CASRmRNA的表达情况。结果:5株食管癌细胞系(KYSE30、KYSE70、KYSE140、TE8、BIC1)CASR启动子区发生甲基化,而KYSE510未发生甲基化。KYSE30、KYSE140细胞系CASR基因表达缺失,5-Aza处理96h后恢复表达;而KYSE510处理前后均有表达。在68例原发ESCC组织中,CASR启动子区甲基化率为71%(48/68),而在8例正常食管黏膜组织中CASR启动子区均未甲基化(0/8)。CASR启动子区甲基化与ESCC患者的年龄构成(χ2=1.114,P=0.291)、性别(χ2=0.342,P=0.558)、肿瘤位置(χ2=1.209,P=0.546)、临床TNM分期(χ2=0.181,P=0.670)及淋巴结转移(χ2=1.169,P=0.280)无关。结论:CASR基因在ESCC组织中的表达受启动子区甲基化的调控;CASR启动子区甲基化在ESCC组织中频繁发生,可能作为食管癌早期诊断的潜在标志物和治疗靶点并在其发生发展中起重要作用。 相似文献
2.
目的:克隆杜氏盐藻糖原合成酶激酶3(GSK3)基因序列并探讨它在鞭毛再生中的作用。方法:根据杜氏盐藻转录组测序得到的GSK3的2个片段设计上下游引物,提取盐藻总RNA进行RT-PCR,以此为模板扩增2个片段之间的序列。采用3’RACE方法扩增杜氏盐藻GSK3基因3’端序列,通过杜氏盐藻消减杂交模板扩增得到5’端序列。采用pH休克法去除杜氏盐藻鞭毛,通过实时荧光定量PCR观察鞭毛再生过程中GSK3基因在转录水平上的变化。结果:获得一段长为2116bp的GSK3 cDNA片段,其中包含737bp的3’UTR和1158bp的开放阅读框。实时荧光定量PCR结果表明,GSK3的mRNA转录水平在鞭毛再生过程中明显升高。结论:杜氏盐藻GSK3基因与鞭毛再生密切相关。 相似文献
3.
目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH,并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用。方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHHcDNA,测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接,构建诱饵载体pGBKT7-SAHH。用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用。结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中,表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性。在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2,但是激活了报告基因MEL1。结论:诱饵载体pGBKT7-SAHH可用酵母双杂交方法筛选与SAHH相互作用的蛋白。 相似文献
4.
5.
目的:用酵母双杂交的方法筛选与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基(FLA8)C端相互作用的蛋白。方法:设计特异性引物(上下游分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点),扩增FLA8C端(433个氨基酸)cDNA,与穿梭载体pGBKT7连接以构建诱饵表达载体,然后转化酵母菌株Y187和AH109,Westernblot法检测诱饵蛋白在转化酵母菌株内的表达。通过自激活实验和毒性实验检测诱饵表达载体是否适合利用酵母双杂交的方法筛选相互作用蛋白。转化诱饵质粒的酵母菌株Y187与AH109(文库菌)杂交,待三叶形合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。结果:成功构建了pGBKT7-FLA8-C双杂交诱饵载体;经检测该载体的表达产物对Y187和AH109均无自激活和毒性作用,可用于酵母双杂交实验;杂交后筛选得到2个阳性克隆,测序结果显示为鞭毛结合蛋白107(FAP107)和含蛋白结合结构域的预测蛋白。结论:成功筛选得到了与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的蛋白,分别为FAP107和预测蛋白。 相似文献
6.
本研究目的是观察饮食中添加钙和维生素D对小鼠前列腺上皮细胞增生的影响。将四周龄小鼠随机分成三组,分别给予对照AIN—76A饲料、高脂低钙低维生素D饲料(试验饲料Ⅰ)和高脂加钙和维生素D饲料(试验饲料Ⅱ)。饲养9周后终止试验,小鼠植入渗透泵,灌注溴脱氧尿苷(BrdU)72小时。结果显示,试验饲料Ⅰ组小鼠前列腺背叶上皮细胞BrdU标记指数与对照组比较明显升高(P<0.05),而试验饲料Ⅱ组的BrdU标记指数与对照组相似(P>0.05)。本实验研究发现证明,高脂低钙低维生素D饮食能诱发小鼠前列腺背叶上皮细胞增生,同时提示饮食中添加钙和维生素D有助于预防高脂低钙低维生素D饮食的这种不良作用。 相似文献
7.
目的:观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA(mTOR-siRNA)干扰mTOR表达后,食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法:mTOR-siRNA转染EC9706细胞, RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理,Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达;流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡,CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果:mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达(P<0.05),并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后此作用更明显(P<0.05)。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后这些作用更强(P<0.05)。结论:mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达,提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。 相似文献
8.
目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断宫颈癌细胞HeLa229中核因子(NF)-kB信号通路,观察其单独或与顺铂(DDP)联合对HeLa229增殖、耐药性和侵袭力的影响.方法 利用RNAi技术,将HeLa229分为未转染组(A组)和转染p65小干扰RNA(siRNA)组(B组),用MTT法检测转染p65 siRNA 24、48、72 h时HeLa229的增殖情况;加入不同浓度DDP,观察其对HeLa229细胞增殖的影响.用Boyden chamber体外侵袭实验检测A、B组及p65siRNA与DDP(8.6 mg/L)联合组(C组)细胞侵袭力的变化.结果 B组细胞存活率较A组明显下降;加入DDP后,A、B组细胞的存活率均随DDP浓度的增加而下降.siRNA与DDP联合应用可明显提高HeLa229对DDP的敏感性.与A组相比,B、C组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P<0.05).结论 应用RNAi技术可有效阻断HeLz229内NF-KB信号通路,抑制其增殖和体外侵袭力,增强其对DDP的敏感性. 相似文献
9.
T的抗血清.ELISA检测抗血清效价达到1:51 200,Western blot检测证实抗血清能与目的蛋白特异性结合.结论:以纯化的bar基因表达蛋白PAT作为抗原,制备了特异性较高的抗PAT抗体. 相似文献
10.