含有中肾旁管的小鼠胚胎组织石蜡切片制备

目的基于雌性小鼠胚胎连续石蜡切片进行中肾旁管定位,探讨制备高质量的含中肾旁管的小鼠胚胎组织切片的方法。方法正常孕15.5 d、17.5 d、19.5 d小鼠的胚胎,聚合酶链式反应(PCR)鉴定性别,取雌性鼠胚石蜡包埋,连续横断切片,每4张取1张行HE染色后获取连续切片图像。根据雌性小鼠胚胎生殖管道解剖走形,识别并定位中肾旁管。结果获取含不同发育天数中肾旁管的小鼠胚胎切片。结论利用石蜡包埋连续切片对中肾旁管进行解剖定位,是有效获得含中肾旁管的小鼠胚胎石蜡切片的方法。     

小鼠整体胚胎和新生鼠石蜡切片技术的改进

目的探讨小鼠整体胚胎和新生鼠石蜡切片技术的改进。方法收集不同胚龄和日龄的小鼠整体胚胎及新生鼠14.5、15.5及16.5 d的胚胎,清洗后直接置于4%中性甲醛中固定24 h以上;胚龄17.5、18.5 d及日龄0、1、2 d的小鼠,先用注射器往胸腹部及脑部缓慢注入固定液,再整体固定于标本瓶中24 h以上。经全自动密闭式组织脱水机编程脱水,石蜡包埋技术制备小鼠整体胚胎和新生鼠切片。应用HE染色方法对切片进行染色检验,光学显微镜下观察小鼠整体胚胎和新生鼠的不同组织结构。结果使用全自动密闭式组织脱水机处理小鼠整体胚胎和新生鼠,经过特定的脱水程序处理,镜下观察不同胚龄及日龄的不同组织器官,结构完整,层次清晰,一致性好。结论本实验室利用全自动密闭式组织脱水机对小鼠胚胎和新生鼠进行处理,通过设置合理程序,能够同时处理不同胎龄和日龄的小鼠整体胚胎及新生鼠;脱水后制备的石蜡切片结果稳定,一致性好,为小鼠遗传学和发育学研究提供了良好的技术支持。     

初级纤毛相关基因Pitchfork在小鼠腭部发育中的表达模式及作用机制

[目的]研究初级纤毛相关基因Pitchfork在小鼠腭部发育中的表达模式及作用机制.[方法]取小鼠腭部发育不同时期的胚胎,采用石蜡切片和冰冻切片方法制作标本,使用免疫组织化学方法及原味杂交法检测Pitchfork在小鼠腭部发育中的表达.[结果]在小鼠腭部发育过程中,Pitchfork高表达于两侧腭突特定部位.[结论]Pitchfork在小鼠正常腭部发育中可能通过调节上皮细胞和间充质细胞及其相互调控发挥重要作用.     

火棉胶增强技术在胆囊结石石蜡薄切片中的应用

目的：评估火棉胶增强技术在胆囊结石切片中的应用。方法：收集不同类型的胆囊胆固醇结石20枚，固定后制成石蜡块，采用火棉胶增强技术制作切片。结果：采用此方法制作各类胆囊结石切片100余张(4μm厚)，均获得完整无损的切片。结论：火棉胶增强技术是制作胆囊结石切片一种较好的方法。     

胚胎中胚层间充质细胞参与小鼠胚胎原始心管的形成

目的 探讨小鼠胚胎早期原始心管发育. 方法 对胎龄7.5-9 d小鼠胚胎心脏进行石蜡连续切片,连续切片进行HE染色,并用抗转录因子GATA4和抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体进行免疫组织化学染色. 结果 头端中胚层间充质细胞与小鼠胚胎原始心管及心包腔脏壁中胚层相延续;心肌早期分化标志蛋白转录因子GATA4和α-SMA在原始心管部位高表达. 结论 位于神经沟和原肠之间的胚胎中胚层间充质细胞参与原始心管和心包腔脏壁中胚层的形成;原始心管和心包腔脏壁中胚层细胞的迁移和分化机制不同.     

小鼠早期胚胎细胞超薄切片制备法

目的 探讨小鼠早期胚胎细胞超薄切片的制备方法，观察不同时期小鼠早期胚胎细胞的超微结构变化。方法 在体视显微镜下固定，清洗小鼠早期胚胎细胞，3％－4％琼脂预包埋，常规脱水，渗透，包埋，超薄切片后，透射电镜下观察。结果 准确性高，只需几个胚胎细胞即能做出超薄切片。结论 电镜下胚胎细胞超微结构保存良好。     

小鼠胚卵石蜡切片及免疫组织化学染色方法

石蜡切片法是科研与教学工作中的一种常用实验技术,在细胞生物学、组织胚胎学及病理学中应用甚广[1].对于一般肉眼可见的较大组织标本来说,此项技术操作简便 ,标本能够长期保存.胚卵标本是研究人与动物胚胎发生发育过程中必须观察的标本,尤其是植入前的早期胚卵,对研究胚体早期发育的影响因素至关重要.本文对原有的胚卵切片技术进行了改进,为进一步研究人与动物的早期胚卵发育及其影响等诸因素提供了新的技术方法.已有研究表明层粘连蛋白(laminin,LN)在胚胎粘附、着床过程中发挥重要作用[2,3].本实验利用植入前各阶段的早期胚卵,以单个胚卵石蜡包埋切片技术为手段 ,通过免疫组化染色研究LN在小鼠早期胚卵中的分布,摸索出一套特异性强的针对单个胚卵进行免疫组化染色的方法,为进一步研究LN在小鼠早期胚卵中的免疫定位及分布奠定了基础.     

磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎组织表达的免疫细胞化学研究

目的 研究磷脂酶C-γ1在小鼠胚胎各组织的表达及规律。方法 制备小鼠胚胎标本，进行石蜡包埋并切片，采用免疫细胞化学方法检测磷脂酶C-γ1的表达。结果 各种胚胎组织中软骨、骨骼肌、心肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑等均有不同程度的表达。结论 磷脂酶C-γ1相关的信号通路对于小鼠胚胎细胞（软骨、骨骼肌、肾脏集合小管、结缔组织、脑神经元等）的发育可能具有重要的生物学意义。     

激光捕获显微切割技术诊断石蜡切片中早期胚胎成分与亲权关系的研究

目的通过激光捕获显微切割技术捕获石蜡切片中胚胎绒毛细胞,进行低体积扩增,实现胚胎个体分型,证实亲子关系。方法通过激光捕获显微技术捕获石蜡切片上胚胎绒毛细胞,设置20、30、40个细胞数目组,分别捕获不同数目绒毛细胞,利用低体积扩增仪进行1.5μl体系PCR扩增,采用3130遗传分析仪得出胚胎个体分型图谱,并比较各细胞数目组胚胎个体识别的检出率、等位基因丢失率和非特异性扩增情况。最后进行实际案例应用。结果捕获20个胚胎绒毛细胞即可获得胚胎个体分型,40个细胞数目组的胚胎分型检出率最高,等位基因丢失率和非特异性扩增率最低。20个细胞数目反之。结论激光捕获显微切割技术结合低体积扩增技术可应用于石蜡切片,实现胚胎与母体成分的精确分离并确证亲权关系。     

两种脱钙法植被鼠尾病理切片的比较

目的 探讨制作大鼠尾巴标本石蜡切片的方法.方法 采用盐酸脱钙液运用两种脱钙方法制作大鼠尾巴标本石蜡切片.结果 两种方法制作的石蜡切片完整、无破碎,HE染色观察组织结构细胞形态完整,核浆分明,红蓝适度.结论 两种方法都能制作理想大鼠尾巴标本石蜡切片,可保证病理诊断质量.     

胚胎因素对冷冻胚胎移植周期结局的影响

目的:探讨影响冷冻胚胎复苏率和移植成功率的胚胎因素。方法:回顾性分析149个冷冻胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)周期的临床资料,按胚胎发育时间、冷冻前胚胎质量、复苏后胚胎损伤情况分别进行分组,比较不同分类各组间的胚胎复苏情况和(或)临床妊娠率的差异。结果:受精第二天冷冻组与第三天冷冻组的胚胎复苏存活率和临床妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。冷冻胚胎中有优质胚胎者的种植率和临床妊娠率均显著高于无优质胚胎者(P<0.05)。全部移植完整存活胚胎和混合移植组的临床妊娠率和种植率均显著高于全部移植受损胚胎者(P<0.05)。结论:冷冻前胚胎质量和复苏后胚胎卵裂球损伤程度是影响临床妊娠率的重要因素。     

sp3111RNAi转基因小鼠模型的评价以及sp3111下调表达对受精及早胚发育的影响

目的 评价sp3111 RNAi转基因小鼠模型的应用价值以及探讨SP3111蛋白降低表达对受精及早期胚胎发育的影响.方法 ①采用Real-Time PCR方法分别检测F1代和F4代转基因RNAi小鼠中sp3111 mRNA的表达变化,并比较2代间干扰效率的差异.②将精子分为实验组（F4代小鼠精子组）和对照组（野生小鼠精子组）,进行体外授精实验,观察受精率及碎裂胚胎的发生率.结果 ①F1代和F4代小鼠中干扰效率的差异无统计学意义（P〉0.05）.②实验组的正常胚胎与碎裂胚胎的形成率分别为34.48%和46.21%,与对照组相比均有显著差异（P〈0.05）.结论 ①RNAi转基因小鼠中RNAi诱导的转录沉默可稳定遗传至F4代.②SP3111下调表达对小鼠受精及早期胚胎发育有明显的影响.     

玻璃化冷冻方法三种冷冻载体冻存卵裂期胚胎效果的比较

目的应用冷冻环、冷冻膜和自制麦管片三种冷冻载体,采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠卵裂期胚胎,比较三种载体的冻存效果。方法采集通过体外受精在体外培养第2天得到的4-8细胞期的昆明小鼠胚胎247个,对其中177个按载体不同随机分为冷冻环组59个,冷冻膜组59个,自制麦管片组59个;剩余的新鲜胚胎70个作为对照组,比较冻融后鼠胚的复苏率和囊胚形成率。结果冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的胚胎复苏率分别为98.3%、98.3%和94.9%,三组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的囊胚形成率分别是84.5%、86.2%和82.1%,三组比较无统计学差异（P〉0.05）;新鲜对照组囊胚形成率为94.3%,与冷冻环组、冷冻膜组分别比较无统计学差异（P均〉0.05）,与自制麦管片组有统计学差异（P〈0.05）。结论采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵裂期胚胎,使用冷冻环和冷冻膜作为冷冻载体具有复苏率高、囊胚形成率高的优点,更适合应用于临床。     

受精早期观察第二极体对胚胎发育及IVF-ET结局的影响

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中早期观察第二极体判断受精的方法对胚胎发育及IVF-ET结局的影响。方法:回顾性研究郑州大学人民医院2010年全年行IVF长方案治疗的患者606例,根据病史判断受精障碍风险将其分为两组。A组:受精后4 h拆除颗粒细胞判断早期受精。B组:受精后17～18 h观察受精。分别比较两组年龄、获卵数、卵子成熟率、正常受精率、可利用胚胎率(可利用胚胎数/2PN卵裂数)、胚胎种植率、临床妊娠率及早期流产率。结果:两组可利用胚胎率差异具有统计学意义(P<0.05),其它各项统计指标均未见明显差异(P>0.05)。结论:受精障碍高风险患者在4 h拆除颗粒细胞观察第二极体有降低可利用胚胎率的风险,不建议所有IVF患者使用。     

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

目的　为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法　运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果　 (1)注射hCG后 12～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2～ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8～ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～ 92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论　研究为将生物技术应用于小鼠 ,扩大卵子和胚胎来源     

吉非替尼对斑马鱼胚胎发育及肿瘤耐药基因表达的影响

目的 研究吉非替尼对斑马鱼早期胚胎发育及abcb4肿瘤耐药基因表达的影响.方法 实验动物采用斑马鱼,实验分为吉非替尼组、阿霉素和吉非替尼的混合液组、空白对照组.将吉非替尼稀释成不同浓度梯度的药液,分别处理受精后0.5～1.5 h(0.5～1.5 hpf)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率及畸形率变化.统计各浓度不同时间点的胚胎死亡率,计算出IC50的数值;统计48 hpf和72 hpf的胚胎孵化率及120 hpf的畸形率;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量.结果 计算出吉非替尼在斑马鱼胚胎中的IC50为16.18 μmol/L.与对照组比较,高剂量吉非替尼(≥20 μmol/L)显著抑制胚胎的孵化,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应;吉非替尼组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平变化不显著,而阿霉素和吉非替尼的混合液组的abcb4基因的mRNA水平有明显变化(P＜0.05).结论 吉非替尼对斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平无明显影响(P＞0.05),但是吉非替尼能逆转易耐药药物阿霉素的耐药作用,提示使用斑马鱼可以构建肿瘤耐药模型.     

小鼠胚胎胰腺组织分离及内分泌功能鉴定

目的探索小鼠胚胎胰腺组织分离技术,并对其形态学及内分泌功能进行鉴定。方法胚胎期（embryonic,E）11．5～16．5dC57BL／6小鼠胚胎胰腺组织体视显微镜下进行分离。利用常规HE染色、免疫组织化学及免疫荧光实验对分离的E12．5d、E14．5d及E16．5d胚胎胰腺组织进行组织学鉴定;糖刺激实验观察胚胎胰腺组织的内分泌功能。结果〉E12．5d小鼠胚胎胰腺组织可较易完整分离。≤E12．5d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨,需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别。分离的早期胚胎胰腺组织已有胰岛素表达,随着胚胎发育,胚胎胰腺组织胰岛素表达强度逐渐增加。结论小鼠胚胎发育和解剖学知识掌握,可提高胚胎胰腺组织分离技术,保证分离获得完整的胚胎胰腺组织,为胚胎胰腺组织移植研究奠定基础。     

胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分在胚胎选择中的应用

目的 探讨胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分对于体外授精/卵母细胞单精子显微注射(IVF/ICSI)周期中胚胎选择的意义.方法 IVF/ICSI 610周期,随机分为A、B两组.A组(269周期)单以授精后72 h(D3)胚胎发育速度及形态评分选择胚胎;B组(341周期)在此基础上联合胚胎早裂情况进行胚胎选择.比较两组的临床妊娠率和单胚着床率;比较B组移植胚胎中有早裂胚胎和无早裂胚胎者的妊娠结局.结果 B组临床妊娠率和单胚着床率均高于A组(P<0.05);B组移植胚胎中有早裂胚胎者的临床妊娠率和单胚着床率均高于无早裂胚胎者(P<0.01).结论 与单纯的胚胎发育速度及形态评分比较,胚胎早裂联合胚胎发育速度及形态评分进行胚胎评价可显著改善IVF/ICSI的临床结局.     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。