sp3111RNAi转基因小鼠模型的评价以及sp3111下调表达对受精及早胚发育的影响

目的 评价sp3111 RNAi转基因小鼠模型的应用价值以及探讨SP3111蛋白降低表达对受精及早期胚胎发育的影响.方法 ①采用Real-Time PCR方法分别检测F1代和F4代转基因RNAi小鼠中sp3111 mRNA的表达变化,并比较2代间干扰效率的差异.②将精子分为实验组（F4代小鼠精子组）和对照组（野生小鼠精子组）,进行体外授精实验,观察受精率及碎裂胚胎的发生率.结果 ①F1代和F4代小鼠中干扰效率的差异无统计学意义（P〉0.05）.②实验组的正常胚胎与碎裂胚胎的形成率分别为34.48%和46.21%,与对照组相比均有显著差异（P〈0.05）.结论 ①RNAi转基因小鼠中RNAi诱导的转录沉默可稳定遗传至F4代.②SP3111下调表达对小鼠受精及早期胚胎发育有明显的影响.     

大肠杆菌转化巴豆甜菜碱合成L—卡尼汀

利用大肠杆菌的卡尼汀代谢途径，建立了以巴豆甜菜碱为底物，酶法制备Ｌ－卡尼汀的新方法，催化巴豆甜菜碱转化的酶是可诱导的胞内酶，既催化巴豆甜菜碱水合，又催化卡尼汀的脱水反应，厌氧培养，在培养基中加入Ｌ－卡尼汀成或巴豆甜菜碱都有利于酶的形成，破碎处理后，可同时提高转化速度和转化率。     

结核分枝杆菌RipB基因的克隆、表达及对藤黄微球菌生长的影响

提取肺结核分枝杆菌基因组DNA,PCR扩增RipB基因并将其连接到表达载体pET 21a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,用IPTG诱导表达重组蛋白。SDS PAGE表明：重组RipB表达蛋白量约占菌体总蛋白量的40%,而其在37 ℃表达时主要为包涵体,在15 ℃表达时主要在可溶上清内;Ni柱一步亲和层析获得重组RipB;100 pmol/L重组RipB可显著促进藤黄微球菌生长。     

凋亡素融合蛋白在HeLa细胞中的转导及体外活性分析

研究胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）的肝素结合域（HBD）在HeLa细胞中的转导活性,并证实HBD具有运载药物蛋白（凋亡素 ）进入细胞并诱导肿瘤细胞凋亡的能力。通过克隆表达的HBD-EGFP融合蛋白经Ni2+-NTA纯化后,观察其转导活性;并利用HBD-凋 亡素融合蛋白表达纯化后,用噻唑蓝( MTT法)检测肿瘤细胞的凋亡。结果表明：用荧光显微镜可观察到HeLa细胞内有绿色荧光;MTT 法检测表明凋亡素融合蛋白能诱导HeLa细胞的凋亡;HBD具有转导活性,能携带药物蛋白（凋亡素）进入细胞并能诱导HeLa细胞的凋 亡。     

游离卡尼汀的酶法测定

酶法测定游离卡尼汀的原理是通过卡尼汀乙酰转移酶的酶促反应，以及与５，５′－二硫代双（２－硝基苯甲酸）反应产生在４１２ｎｍ波长具强吸收的黄色产物。本法简便快速、精确，灵敏度与重现性均理想，便于推广。     

杭州市余杭区农村居民艾滋病知识调查

艾滋病的防治需要全社会参与,因此艾滋病防治知识的普及,在艾滋病防治中占有重要地位.为了解我区群众对艾滋病的了解和掌握程度,2002年11月对杭州市余杭区农村居民进行了艾滋病有关知识的知晓率调查,现将结报告如下.     

重组人锰超氧化物歧化酶工程菌高效表达培养工艺的研究

目的　确定重组人锰超氧化物歧化酶 (rhMn SOD)工程菌高效表达的最适培养工艺条件。方法　通过摇瓶培养研究了包括接种量、诱导时机、Mn2 + 浓度、诱导后培养时间、发酵过程中 pH变化以及初始 pH值对发酵的影响。 结果　该工程菌的最佳接种量为 3%,最佳诱导时机为接种后 3h ,确定Mn2 + 浓度为 6 0 0 0 μmol·L-1,诱导后培养 5h ,在培养过程中当pH为6 .83时外源蛋白可获得高效表达 ,初始 pH确定为 8.0。 结论 :诱导和培养基的 pH是影响工程菌发酵的主要因素 ,尤其是Mn2 + 的加入表达有活性的rhMn SOD是必需的。     

重组人SOD2/3杂合酶的制备及其生物活性初探

为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pETSOD2/3,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的SOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;利用肝素柱层析验证SOD2/3的肝素靶向性;将纯化后的融合蛋白加入体外培养的宫颈癌细胞,通过FITC和MTT实验观察杂合酶SOD2/3的转导能力及其在细胞内的活性。成功构建了SOD2/3杂合酶的表达载体,重组SOD2/3表达量占菌体总蛋白30%左右;金属螯合亲和层析一步纯化,回收率在70%以上,纯度达90%左右;重组酶能与肝素亲和层析结合,说明杂合酶SOD2/3有肝素靶向性;细胞实验证实SOD2/3较SOD2能更好地抑制Hela细胞生长。获得了较纯的重组SOD2/3杂合酶,该酶能直接以天然有活性的形式转导人宫颈癌细胞内并抑制其细胞增殖,具有很好的作为肿瘤治疗、抗氧化损伤药物的潜力。     

不相容双质粒共表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB及其辅因子合成酶基因caiE

基因caiB和基因caiE分别编码肉碱脱水酶及其辅因子合成酶，携带这两个基因的重组菌可以共表达两个外源蛋白，得到高活性肉碱脱水酶。分别构建这两个基因的表达质粒pET28caiB和pET22caiE，利用双抗生素筛选法，获得能稳定遗传的双质粒转化子。经IPTG诱导，两个基因共表达，表达量分别占菌体总蛋白的39％和20％，共转化菌的酶活力比pET28caiB单转化菌提高了2．3倍，并由此建立了不相容质粒共表达外源基因的新方法。