重组蛋白转导域-神经肽Y融合蛋白对体外培养大鼠脂肪细胞的影响

目的 探讨重组蛋白转导域-神经肽Y融合蛋白对体外培养大鼠脂肪细胞的影响.方法 采用剪切消化法分离大鼠前脂肪细胞,培养液中添加重组PTD-NPY融合蛋白,检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的形态学变化、细胞中甘油三酯含量和甘油磷酸脱氢酶(GPDH)活性.结果 重组PTD-NPY融合蛋白处理大鼠前脂肪细胞72 h,细胞体积增大,细胞数量增加,细胞甘油三酯含量和GPDH活性升高;重组PTD-NPY融合蛋白处理成熟脂肪细胞48h后,细胞体积明显增大,细胞内脂肪滴数量增加并融合成较大的脂滴,甘油三酯含量和GPDH活性均显著升高.结论 重组PTD-NPY融合蛋白明显促进前脂肪细胞的分化,促进脂肪细胞中甘油三酯的合成与沉积.为重组PTD-NPY融合蛋白在动物生产及人类疾病治疗中的实际应用奠定理论基础.     

兔的单引物PCR指纹分析

本研究结合ＤＮＡ指纹杂交和随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)技术 ,探索了适用于动物基因组的操作简捷、快速以及敏感性可靠性强的分子标记方法———单引物ＰＣＲ指纹技术。应用单引物ＰＣＲ指纹技术 ,采用的 1条小卫星引物Ｍ13(5′ＧＡＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＴＣＴ3′)和 2条微卫星引物 { (ＧＴＧ) 5、(ＧＡＣＡ) 4}对Ｖｃ Ⅰ系、Ｖｃ Ⅱ系獭兔、日本大耳白兔 (ＺＤＢ)和青紫蓝 (ＱＺＬ)四个品系各8只 ,总计 32个个体的遗传结构进行了分析。根据结构应用ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃＣｏｍｐｕｔｅｒＴｏｏｌｓ软件计算出四个品系间及 32个个…     

兔荧光扩增片段长度多态性分析体系的建立

目的:建立兔荧光扩增片段长度多态性(fluorescent amplification fragment length polymorphism,fAFLP)分析方法并对其在实验动物科学中应用进行探讨。方法:本实验以5个品种(系)兔为实验材料,对DNA提取、预扩增和选择性扩增等步骤进行优化并对结果进行检测。结果:5个品种(系)兔的扩增片段数均在120条以上,各品种(系)特异性条带均能找出,5个品种(系)兔能据此进行区分。结论:fAFLP是一种以PCR为基础的DNA指纹技术,为兔的指纹分析提供了一种快速高效的方法,可用于兔的遗传质量检测。     

15-HETE及其代谢产物对大鼠离体肺动脉环作用的比较

目的通过比较15_羟基二十碳四烯酸(15_HETE)及其两种代谢产物15_酮基二十碳四烯酸(15_KETE)、8(S),15(S)_二羟基二十碳四烯酸[8(S),15(S)_diHETE]对缺氧组与正常组大鼠的肺动脉环张力的影响,以探讨15_HETE的两种代谢产物在缺氧性肺动脉高压形成中的作用。方法16只健康SD大鼠,体重为(220±20)g,随机分为两组(n=8),一组置于正常的培养箱中,其吸入氧(FiO2)浓度为21%,作为正常组;一组置于缺氧的培养箱中,吸入氧(FiO2)浓度为10%,作为缺氧组。9 d后将两组大鼠处死,采用组织浴槽血管环法观察15_HETE、15_KETE、8(S),15(S)_diHETE对正常组和缺氧组大鼠肺动脉环收缩的影响。结果(1)在正常组和缺氧组,15_HETE、15_KETE、8(S),15(S)_diHETE都以浓度依赖方式使大鼠肺动脉环张力增加;(2)15_HETE、15_KETE使缺氧组大鼠肺动脉环张力较正常组显著增高,而8(S),15(S)_diHETE使正常组和缺氧大鼠肺动脉环张力无明显差异;(3)正常组大鼠肺动脉环对15_KETE、8(S),15(S)_diHETE反应力显著高于15_HETE,而缺氧组大鼠肺动脉环对15_KETE反应力显著高于15_HETE、8(S),15(S)_diHETE。结论15_KETE、8(S),15(S)_diHETE可能在缺氧性肺动脉高压形成中起一定的作用。     

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞钾离子通道的作用

目的观察15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetraenoic acid,15-KETE)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)膜电压门控钾离子通道(Kv)的作用,探讨其收缩肺动脉的离子通道机制。方法采用急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)获得健康成年SD大鼠单个PASMC,应用全细胞膜片钳记录方法,研究15-KETE对膜电位(Em)、膜电容(Cm)、电压门控钾电流(Ikv)的影响。结果①高浓度15-KETE(1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)可引起PASMCs去极化,并且在细胞内钙被BAPTA缓冲后,15-KETE仍可引起PASMCs去极化,15-KETE对PASMC的膜电容无影响;②15-KETE(1×10-8~1×10-6mol/L)对Ikv的影响呈浓度依赖性和可逆性;③细胞内钙离子在生理浓度时([Ca2 ]i=75 nmol/L),15-KETE(1×10-6mol/L)对Ikv峰电流的抑制率显著高于细胞内无钙离子时。结论15-KETE可浓度依赖性的抑制Ikv,使常氧大鼠PASMCs去极化;细胞内钙离子加强了15-KETE对Ikv峰电流的抑制作用。     

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

本文系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律 ,卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻 ,结果如下 :①注射hCG后 1 2～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,42～ 48h为 2 -细胞期 ,48～ 6 0h为 4-细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8-细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中 ;②培养液中添加激素 ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育率 ;③在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 -细胞阻断 ,其 2 -细胞胚的发育率达 1 0 0 % ,8-细胞胚的发育率达55%以上 ;牛、羊上皮细胞培养上清也能有效克服 2 -细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞的发育率显著提高 ;④以D -PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D -PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9.3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 .4%。以上研究为建立小鼠胚胎库提供了基础     

熊射出精子体外获能的研究

本文报道了用咖啡因和Ionophore A23187(Ⅰ-A)诱导熊射出精子体外获能的研究。用去透明带仓鼠卵穿透试验评价获能效果,用台盼兰—姬姆萨(TG)染色检测精子的死活及顶体形态。结果发现,咖啡因与Ⅰ-A能诱导熊精子体外获能,经获能处理的精子能穿入卵内,穿透率达70％以上,并能形成发育良好的雄原核。咖啡因与Ⅰ-A能在体外诱导熊精子的顶体反应,相关分析表明,有顶体反应活精子百分率与穿透率呈强正相关(r=0.94,n=6,P<0.01)。TG染色是检测精子顶体反应的有效手段,并能预测获能处理后精子的受精能力。     

日本血吸虫GST、Sj23及GST-Sj23 RNA颗粒抗原的制备及表达研究

目的制备日本血吸虫自杀性RNA颗粒抗原，并研究其在真核细胞内的表达，以期探讨新型抗原的研制方法，为制备抗血吸虫疫苗奠定基础。方法将编码日本血吸虫主要抗原GST、Sj23及编码两种抗原的嵌合基因（GST-S23）分别克隆到自杀性RNA疫苗载体SFV3．spider内，以体外转录法制备编码上述三种抗原的mRNA。同法合成编码SFV病毒表膜蛋白质（S蛋白质和C蛋白质）的mRNA，然后将编码上述三种抗原的mRNA分别与编码病毒膜蛋白质的mRNA混合，以电穿孔法导入BHK21细胞，制备含有日本血吸虫GST、S23抗原及GST-Sj23嵌合体抗原mRNA的假病毒颗粒。最后，对制备出的假病毒颗粒进行真核细胞感染实验，以间接免疫荧光法验证上述抗原的真核表达情况。结果三种RNA颗粒对BHK21细胞均具有很好的感染性，所编码的蛋白质在BHK21细胞内鉴定高效表达。