重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体的构建及表达

目的 构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能.方法 利用试剂盒对MLCK ATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达:利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体在细胞中的分布:运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度.结果 重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带.结论 重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带.     

建平县鼠疫自然疫源地啮齿动物和媒介动物分布

建平县鼠疫自然疫源地系松辽平原察哈尔丘陵达乌尔黄鼠鼠疫自然疫源地,通过近30年对鼠疫自然疫源地内的啮齿动物及媒介动物的调查,基本掌握了啮齿动物的栖息和存在以及体外媒介动物的种类。 在固定沙丘的坨甸草原景相中栖息着达乌尔黄鼠、草原鼢鼠、小毛足鼠等。     

奥林巴斯BX51系统显微镜使用中常见故障排除与日常维护

显微镜是观察物质微观结构的重要工具，是现代科学尤其是医药科研方面的重要仪器之一。工作中对显微镜精心维护和保养，可保证显微镜清晰度高，选择任意图像拍照。如果日常维护和保养不到位，就会导致显微镜不能处于最佳状态，影响图像拍照，就不能获得清晰显微镜照片。     

顺铂和长春瑞滨联合放疗对大鼠脊髓损伤的实验研究

[目的]探讨顺铂(cisplatin,DDP)和长春瑞滨(vinorelbine)联合放射治疗对大鼠脊髓损伤的影响。[方法]24只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组;单纯放疗组;单纯化疗组;化疗联合放疗组。腹腔分别注射顺铂和长春瑞滨。直线加速器6 MeV电子线照射大鼠胸段脊髓,5 Gy/次,总剂量40 Gy。照射结束后5个月,光镜和电镜下观察脊髓的形态学改变。[结果]光镜下,单纯化疗组脊髓白质、灰质有轻微变化;单纯放疗组脊髓白质出现损伤;化疗联合放疗组脊髓白质、灰质均见明显损伤。电镜下,单纯放疗组髓鞘有轻微变化;单纯化疗组髓鞘有明显损伤;化疗联合放疗组髓鞘损伤严重。[结论]顺铂和长春瑞滨均可引起大鼠脊髓损伤,且顺铂和长春瑞滨联合放射治疗加重大鼠脊髓损伤。     

染砷小鼠脑突触结构变化及相关基因差异表达

目的 观察染砷小鼠大脑神经突触结构变化及相关基因表达.方法 30只昆明种小鼠,按体重分为3组,即对照组、1和4 mg/L染砷组,染毒60 d.应用电镜和基因芯片技术观察砷对小鼠大脑神经突触结构及相关基因表达的影响.结果 对照组小鼠大脑突触结构清晰,突触前膜、间隙和后膜特化带清晰,前突触中可见较多的突触小泡.染砷组小鼠大脑突触前膜、间隙及后膜轮廓清晰,突触前膜的突触小泡数量明显减少.基因芯片结果 显示,染砷组小鼠大脑突触相关基因差异表达共有10条.上调基因为依赖于钙-钙调蛋白的蛋白激酶Ⅳ(Camk4)、速激肽1(Tac1)、多巴胺受体D1A(Drd1a)和多巴胺受体D2(Drd2);表达下调的基因共有6条,分别为complexin蛋白2(Cplχ2)、钙通道α1A亚单位(Cacna1a)、谷氨酸受体互变异构NMDA2B(Grin2b)、亲代谢性谷氨酸受体7(Grm7)、肌萎缩性(脊髓)侧素硬化2(Als2)和亲代谢性谷氨酸受体2(Grm2).结论 亚慢性砷暴露对小鼠大脑突触结构及相关基因表达造成损伤性影响,提示大脑神经元突触可能是砷神经毒性作用靶部位.     

615系小鼠乳腺癌的超微结构研究

本文综合报道了615系小鼠乳腺癌自发瘤Ca841、Ca842和乳腺瘤株Ca759、Ca761、Ca763移植瘤的透射电镜观察。Ca841、Ca842、Ca761、Ca763的原代瘤光镜诊断符合Duun氏小鼠乳腺癌分类的A型,而Ca759则为B型。在超微结构方面,它们之间相似之处主要表现在瘤细胞均呈现不同程度的多形性,核质此高,核仁明显,可见核分裂相,表面有微绒毛,细胞间有细胞连接,胞质中均可见A型病毒样颗粒,核糖体特别丰富而其它细胞器较少。综上符合一般癌细胞的特征。它们之间不同之处,在Ca841、Ca842,其瘤细胞与肌上皮样细胞形成腺泡样结构,含有A型和B型两种病毒样颗粒,瘤细胞可分明、暗二型;Ca759瘤细胞多紧排列成癌巢,也有明、暗二型瘤细胞;Ca761、Ca763瘤细胞排列较分散,不能区分明、暗细胞,其细胞器较丰富除含大量多聚核蛋白体外,尚可见高尔基复合体和微丝。除Ca761外,均可见基膜。在Ca761有时可见从中心粒直接发出伸向细胞表面的纤毛。就我们所见,进行了讨论。其中特别值得提出的是:原代A型乳腺癌在移植过程中有的可转变成B型;存在于原代癌中的A型及B型病毒颗粒在移植中B型颗粒多丧失而A型颗粒可持续存在;明细胞与暗细胞似乎是处于不同功能状态的同一细胞,暗细胞可能处于功能活跃状态;某些瘤细胞中所见的微纤维与瘤细胞的活动与侵袭可能存在一定关系。另外,令人感兴趣的是Ca763的某些瘤细胞中,可见有从中心粒发出的纤毛,这点在其它文献中尚未见报道。     

615系小鼠自发性乳腺癌Ca841、Ca842原代瘤的超微结构

615系小鼠原代乳腺癌Ca841、Ca842的组织学所见主要为大小不一的腺泡样结构。腺泡由排列紧密、大小较为一致的瘤细胞和肌上皮细胞组成,间质极少,符合小鼠A型乳腺癌诊断。癌细胞分明、暗两种,外形不规则,表面多微绒毛,核质比高,核大多呈卵圆形,偶见畸形。核仁增大、增多,可见边集。细胞器简单,除大量多聚核蛋白体外,有少量粗面内质网。胞质内可见70nm左右的A型病毒样颗粒,腺泡腔面微绒毛上可见正在出芽的B型病毒样颗粒,腺腔中有大量100nm大小的成熟B型病毒样颗粒。     

小鼠早期胚胎细胞超薄切片制备法

目的 探讨小鼠早期胚胎细胞超薄切片的制备方法，观察不同时期小鼠早期胚胎细胞的超微结构变化。方法 在体视显微镜下固定，清洗小鼠早期胚胎细胞，3％－4％琼脂预包埋，常规脱水，渗透，包埋，超薄切片后，透射电镜下观察。结果 准确性高，只需几个胚胎细胞即能做出超薄切片。结论 电镜下胚胎细胞超微结构保存良好。     

透射电镜超薄切片污染产生的原因及对策

目的 分析电镜超薄切片污染产生的原因及消除污染的对策。方法 对样品制备及观察的每个环节逐一分析，对可能引起污染的各种因素采取有针对性的解决方法，严格按照透射电镜生物样品的制备要点进行操作。结果 消除了污染，保证了超薄切片的质量，电镜下拍出高质量的照片。结论 污染的原因是多方面、多因素的，只要工作中精益求精，基本上可以避免切片污染。     

介绍一种血小板整体黏附电镜样品制备方法

本文介绍制备黏附聚集的整体血小板电镜样品。将抗凝血直接铺在覆有Formvar（聚乙烯醇缩甲醛）的铜网上，然后依次对样品进行温育、冲洗、固定、再冲洗、空气自然干燥后电镜观察。这种方法制作简单而且省时，在电镜下可见各种形态完好的血小板，圆形、树突形、扩展形度聚集形。