血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对慢性肾衰竭大鼠血管新生的影响

目的：探讨血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor , VEGF）基因转染骨髓间充质干细胞（ mesenchy-mal stem cells,MSCs）对慢性肾衰竭（chronic renal failure, CRF）大鼠肾小球内皮细胞修复和血管新生的影响。方法体外分离、培养大鼠MSCs,Ad5-hVEGF-EGFP转染MSCs并观察转染对细胞增殖,分泌VEGF的影响。50只雄性SD大鼠按数字表法随机分为假手术组、慢性肾衰竭组、MSCs移植组、Ad-VEGF注射组和VEGF基因转染的MSCs移植组,每组10只。采用分阶段5／6肾切除术制备大鼠慢性肾衰竭动物模型。假手术组与慢性肾衰竭组于切除右肾之前从该侧肾动脉注射不含血清的改良杜氏伊格尔（DMEM）培养液,其余3组分别给予MSCs,Ad-VEGF和VEGF基因转染的MSCs。8周后检测各组大鼠肾功能,并用免疫组化检测肾小球CD31表达情况。结果 Ad5-hVEGF-EGFP转染后对MSCs细胞增殖无影响,转染后分泌VEGF蛋白较空质粒转染组明显增加（P＜0.05）。 MSCs移植组和VEGF基因转染的MSCs移植组血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）均较慢性肾衰竭组降低（P＜0．05）;与MSCs移植组比较,VEGF基因转染的MSCs移植组Scr和BUN降低更显著（P＜0．05）。慢性肾衰竭组肾小球中CD31表达较假手术组显著降低（P＜0．05）,应用MSCs和VEGF165基因转染的MSCs干预后肾小球中CD31表达有所增加,VEGF基因转染的MSCs组增加更明显（P＜0．05）。结论慢性肾衰竭大鼠给予转染VEGF基因的MSCs移植后毛细血管内皮细胞数量增多,肾脏功能改善;其作用可能与基因转染增加VEGF表达及有利于肾小球毛细血管内皮修复、血管新生有关。     

VEGF基因转染乳鼠心肌细胞移植治疗心梗的研究

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子165基因(AdVEGF165)转染乳鼠心肌细胞后血管内皮生长因子(VEGF)的表达及移植于大鼠慢性心梗(MI)模型后对心功能的影响。方法体外培养新生大鼠心室肌细胞、标记BrdU、转染AdVEGF165基因;收集培养液上清,ELISA法检测转染细胞VEGF的表达。结扎同种大鼠前降支建立心梗模型,4周后将心梗大鼠随机分为3组,分别注射移植转染心肌细胞(组Ⅰ)、AdVEGF165(组Ⅱ)、和DMEM培养基(组Ⅲ)。超声心动图检测移植前及移植4周后的心功能。处死大鼠,留取心脏标本作HE病理染色及免疫组化检测,并计数血管密度。结果AdVEGF165基因转染的心肌细胞表达VEGF升高,较对照组有显著性差异(P<0.01);超声检测心功提示转染细胞组(组Ⅰ)心功能较其他两组显著改善(P<0.01);免疫组化检测显示,移植细胞在移植区存活;HE染色血管计数显示转染组(组Ⅰ)有更多的新生血管形成(P<0.05)。结论AdVEGF165基因转染心肌细胞后表达分泌VEGF增加,可促进梗死区新生血管形成,改善心肌血供,有利于移植细胞的存活,能更好的改善心功能。     

VEGF基因转染骨髓间充质干细胞对大鼠心梗区血管新生的影响

目的：探讨转染血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）基因的骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）心肌移植及其对大鼠心梗区血管新生的影响。方法：以Wistar近交系大鼠建立心肌缺血模型，实验动物随机分为4组（n=12）。冠脉结扎2周后，联合组（A组）于心梗区移植转染VEGF基因的MSC，细胞组（B组）移植等量的MSC，基因组（c组）注射脂质体-pcDNA3.1-VEGF165DNA复合物，对照组（D组）注射等容积培养液，移植4周后通过Ⅷ因子染色检测血管新生，RT-PCR检测VEGF基因的体内表达。结果：Ⅷ因子染色示A组动物心梗区毛细血管密度明显高于B组和D组，较C组亦有一定程度的升高；RT—PCR显示VEGF基因的体内表达从高到低依次为A组、C组、B组、D组。结论：BMMSC有利于VEGF基因的稳定表达，可作为VEGF基因的良好细胞载体。     

hVEGF165/Ang-1联合转染对兔缺血心肌血管再生的影响

目的 探讨VEGF/Ang-1基因联合转染对缺血心肌区域血管再生及血管成熟的影响.方法 建立兔心肌缺血模型,实验动物随机分为5组(每组5只):hVEGF165/Ang-1双基因联合转染组(A组),hVEGF165单基因转染组(B组),Ang-1单基因转染组(C组),单纯梗死组(D组),正常对照组(E组).冠状动脉左前降支(LAD)结扎后在缺血心肌区域直接注射的方法转染 rAAV-9HRE-hVEGF165和(或)rAAV-TRE-Tight-Ang-1;Fitc-lectin和α-SMA免疫荧光染色,观察缺血心肌区域血管新生及成熟情况.结果 与B、C、D组相比,A组Fitc-lectin和α-SMA阳性血管数量显著增多(P<0.05).结论 与单一促血管生成基因转染比较,hVEGF165/Ang-1双基因联合转染可改善兔心肌梗死区域血管再生.     

反义VEGF 165基因关节腔注射抑制大鼠胶原性关节炎形成的病理观察

目的:观察反义血管内皮生长因子(VEGF)165基因体内转染对大鼠类风湿关节炎形成的影响.方法:Wistard大鼠30只,关节炎诱导2周后随机等分为3组,并分别给予相应处理:A组(关节腔注射100 μl生理盐水)、B组(关节腔注射100 μl空病毒载体)和C组(关节腔注射100 μl反义VEGF165重组腺病毒); 4周后处死大鼠,对关节炎的发病情况、病理评分、X线放射学评分结果进行对比研究.结果:给药4周后,C组大鼠的关节肿胀程度明显轻于A、B组; C组的病理评分低于A、B组;藏红花红染色显示C组关节软骨多糖破坏轻于A、B组.结论:腺病毒介导的反义VEGF基因转染可以有效地减轻胶原性关节炎的症状,减轻滑膜血管翳对关节软骨的破坏和病理改变.     

VEGF和Ang-1联合转染对兔心肌梗死再生血管分支和管径的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-1(Ang-1)基因联合转染对兔心肌梗死部位再生血管分支数量和毛细血管管径大小的影响.方法 将75只日本大耳白兔随机分为5组(每组n=15),采用冠状动脉左前降支结扎法建立兔心肌梗死模型.单纯梗死组,仅行冠状动脉左前降支结扎术;VEGF组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的VEGF165基因; Ang-1组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的Ang-1基因;VEGF+Ang-1组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的VEGF165基因和2型重组腺相关病毒携带的Ang-1基因混合液(混合比例为1:1);载体组,向心肌梗死边缘部位注射不携带VEGF165和Ang-1基因的2型重组腺相关病毒载体溶液.8周后取材,植物凝集素B4(Lectin B4)灌注染色检测心肌梗死边缘再生血管分支数量,CD31免疫组化检测毛细血管直径.结果 与单纯梗死组、Ang-1组和载体组相比,VEGF组和VEGF+Ang-1组再生血管分支增多(P<0.01);与其他各组相比,Ang-1组再生血管分支显著减少(P<0.01).与单纯梗死组、VEGF组和载体组相比,Ang-1组和VEGF+Ang-1组梗死边缘区毛细血管直径显著增加(P<0.01);与其他各组相比,VEGF组梗死边缘区毛细血管直径减小(P<0.01).结论 VEGF和Ang-1联合转染可以促进心肌梗死边缘部位再生血管分支增多和毛细血管管径增大.     

VEGF165基因转染EPCs移植对大鼠阿霉素肾病组织学的影响

目的 构建含血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒(Ad-VEGF165),转染血管内皮祖细胞(EPCs)后,观察其对阿霉素肾病大鼠肾脏组织学的影响.方法 用细菌内同源重组法构建含VEGF165基因的重组腺病毒Ad-VEGF165,通过PCR和Western blot鉴定所构建的腺病毒.贴壁法体外培养获得大鼠骨髓来源的EPCs,Ad-VEGF165体外转染EPCs,检测转染后目的基因的蛋白表达.大鼠阿霉素肾病模型形成过程中,尾静脉注射转染Ad-VEGF165的EPCs,在第16周时观察肾脏组织学变化.结果 PCR和Western blot证实构建的重组腺病毒含有目的基因,滴度为1.4×1010PFU/ml;培养第6天的EPCs用于Ad-VEGF165转染,转染后24 h,培养上清中VEGF蛋白表达较对照组和转染前增加.转染了VEGF165基因的EPCs移植后第12周(切肾术后16周),转染组的肾小球硬化和肾小管间质纤维化的程度明显较肾病组轻.结论 转染了VEGF165基因的EPCs可以减轻阿霉素肾病的肾小球和肾小管的损伤程度,为VEGF在慢性肾脏病治疗提供了实验基础.     

腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染对大鼠移植肾存活的影响

目的　探讨CTLA 4Ig基因重组腺病毒 (AdvCTLA 4Ig)有效转染大鼠肾脏的方法并初步观察该基因转染对移植肾存活的影响。方法　AdvCTLA 4Ig对大鼠肾脏分别转染 3h ,包括 :4℃下转染 (A组 )、经肾动脉注射在体转染 (B组 )、阻断肝脏血流以及肾血管以下躯体血流后经肾动脉注射在体转染 (C组 )以及对照 ;以免疫荧光法检测基因转染效率 ;以转染效率最高组肾脏行同种移植 ,未转染组为对照 ,观察移植肾存活时间。结果　A组、B组以及对照组肾脏内未见荧光显示 ,C组肾小管显示阳性荧光 ,肾小球内未见荧光显示 ;各组肾脏光镜下结构正常 ;转染组移植肾存活时间较对照组明显延长 ( 2 6 6± 6 9)dvs ( 8 1± 1 60 )d ,P <0 0 1。结论　高滴度CTLA 4Ig基因重组腺病毒可使在体肾脏中肾小管获得有效转染 ;该基因转染的肾脏移植后存活时间明显延长     

VEGF基因沉默抑制HCT116裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6 27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6 27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P＜0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P＜0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P＜0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.     

噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建

目的:观察和评价转染血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的自体骨髓基质细胞移植于猪的慢性缺血模型后对心功能的保护和促血管新生作用.方法:置Ameriod环建立慢性心肌缺血猪模型,随机分为4组:转染VEGF基因的自体骨髓基质细胞组(组Ⅰ,n=9),单纯细胞移植组(组Ⅱ,n=8),单纯基因治疗组(组Ⅲ,n=7),以注射空腺病毒载体的实验动物为对照组(组Ⅳ,n=8).体外培养自体骨髓基质细胞,Ad.VEGF转染细胞,以CM-DiI为标记,移植于该模型猪心脏的缺血区域.观察和分析各实验组Rentrop分数、心脏射血分数(EF)、梗死区的面积百分比、移植细胞成活性、血管密度及VEGF的表达和分泌.结果:模型建成后,所有动物的冠脉造影左旋支(LCx)完全闭塞或闭塞程度大于95%,说明模型构建成功.与其他各组比较,组Ⅰ的Rentrop分数的升高值及心脏射血分数的升高值均有显著性提高(P＜0.01),梗死区面积明显减少(P＜0.01),具有维持心脏正常功能的几何构型及室壁厚度,且荧光显微镜下可见大量CM-DiI标记的移植成活细胞.组Ⅰ、组Ⅲ缺血区血管计数和VEGF在心肌中的蛋白表达高于组Ⅱ、组Ⅳ,组Ⅰ和组Ⅲ组间并无明显差异.结论:携带VEGF基因的自体骨髓基质细胞移植治疗缺血性心脏病具有明显的优越性,移植细胞成活率高,局部血液循环和心功能改善明显.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

浅谈影响放疗摆位精度的相关因素

本文旨以经验交流的方式,阐述影响放疗摆位精度的各种相关因素,以最大努力去消除或减少放疗摆位误差,提高放疗摆位的精度,同时达到与放疗界其他同行的共勉的愿望。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。