单纯性肥胖儿童脂肪细胞载脂蛋白E基因的表达

以RT PCR法分析脂肪细胞载脂蛋白E(apoE)基因的表达,发现肥胖儿童脂肪细胞apoE基因表达水平显著下调,重度及中心性肥胖尤甚,提示apoE基因可能与肥胖密切相关。     

人周围血单核细胞载脂蛋白E基因表达的竞争性逆转录-聚合酶链反应定量分析

为建立人周围血单核细胞载脂蛋白E基因表达检测方法,研究载脂蛋白E基因与儿童健康的关系,我们抽取26例健康儿童外周静脉血,分离血单核细胞,抽提RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应检测载脂蛋白E基因表达,并以正常人cDNA作定量标准物,待测样品与定量标准物共扩增,计算出待测样本的个体的mRNA量.研究发现载脂蛋白E基因能在健康儿童周围血单核细胞表达,健康儿童载脂蛋白E基因表达量为0.37±0.15 mol/mol mRNA.表明采用竞争性逆转录-聚合酶链反应方法来检测人周围血单核细胞载脂蛋白E基因表达的分析方法快速、简便、灵敏、实用、可靠,且能准确定量,值得推广应用.     

辛醇/乙醇混合液处理的牛颈静脉的遗传毒理学评价

【目的】对辛醇／乙醇混合液处理的牛颈静脉的遗传毒性进行评价。【方法】采用微核试验、染色体畸变试验及AMES试验进行遗传毒性评价。【结果】试验组股骨骨髓细胞微核率及染色体畸变率与阴性对照组之间X^2检验差异无显著性（P〉0．05）；与阳性对照环磷酰胺组差异有显著性（P〈0．05）；AMES试验中试验组菌落数均未超过阴性对照组菌落数的2倍．试验结果为阴性。【结论】辛醇／乙醇混合液处理的牛颈静脉无明显遗传毒性作用。     

组织型纤溶酶原激活因子构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达活性

背景：组织型纤溶酶原激活因子被认为是血管系统内初期血栓清除的关键酶。目的：构建pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞，观察外源性组织型纤溶酶原激活因子的表达情况。设计：随机对照实验。单位：中南大学湘雅二医院及中国医学遗传学国家重点实验室。材料：实验于2002-09／2003-06在中国医学遗传学国家重点实验室完成。脐静脉内皮细胞取自中南大学湘雅二医院健康产妇分娩后胎盘脐带，pcDNA3．1为Smith Kline Beecham公司赠送。方法：构建真核表达载体pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子，并将pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子转入人脐静脉内皮细胞，用酶联免疫吸附法定量检测转基因后组织型纤溶酶原激活因子蛋白表达情况、发色底物法检测外源性组织型纤溶酶原激活因子活性。以转pcD-NA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子基因人脐静脉内皮细胞为观察对象，未转pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子基因人脐静脉内皮细胞作为对照。主要观察指标：组织型纤溶酶原激活因子蛋白定量及活性测定结果。结果：①组织型纤溶酶原激活因子蛋白定量表达结果为568．6ng／10。细胞／24h，未转pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子的人脐静脉内皮细胞测得为17．8ng／10。细胞／24h。②组织型纤溶酶原激活因子活性为108．8IU／10。细胞／24h，未转pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子的人脐静脉内皮细胞测得为5．6IU／105细胞／24h。结论：pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子转染人脐静脉内皮细胞后，外源性组织型纤溶酶原激活因子基因获有效表达。为pcDNA3．1（＋）组织型纤溶酶原激活因子转入人体细胞确立了有效依据。     

SHH基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的 探讨SHH基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的可行性.方法 利用电转法将SHH基因转染人大鼠骨髓间充质干细胞,在荧光显微镜下观察转染效率;分别绘制未转染及转染SHH基因后细胞生长曲线,观察转染对细胞的影响;采用PCR、RT-PCR、Western-blot检测转染后骨髓间充质干细胞中外源性SHH基因的表达情况.结果 生长曲线显示转染后骨髓间充质干细胞生长曲线指数生长期及平台期延后,在转染后第12天与未转染达到一致.转染后48 h(即将用于移植前),经荧光倒置显微镜观察转染效率为30％,PCR检测转染后骨髓间充质干细胞中SHH表达较未转染细胞明显升高,实时定量PCR检测其升高约7倍左右,通过Western-blot检测转染后SHH蛋白产物表达明显升高.结论 电转法能够有效将外源性SHH基因转染人大鼠MSC并能获得有效表达,为进一步大鼠缺血性心脏病模型的在体基因治疗提供了前提基础.     

人工腱索加瓣环成形在二尖瓣前瓣脱垂修复中的应用

目的:评价人工腱索加瓣环行二尖瓣成形治疗二尖瓣前瓣脱垂的效果。方法:2009年3月至2011年12月间对32例二尖瓣前瓣脱垂的患者采用人工腱索加二尖瓣成形行二尖瓣修复,其中单纯前瓣成形27例,前、后瓣同期成形5例。结果:所有患者均存活。术后超声心动图显示,28例患者二尖瓣无或仅有微量反流,4例有轻度反流。左房内径、左室内径、左室收缩末期容积和舒张末期容积均较术前明显缩小(P<0.01)。随访3个月至3年患者心功能较前均有不同程度改善。结论:人工腱索加瓣环成形治疗二尖瓣前瓣脱垂是一种简便、可靠和有效的方法,早中期效果良好。     

冠脉结扎法制做大鼠心肌缺血模型

目的探讨大鼠心肌缺血动物模型的构建。方法缝扎大鼠冠脉左前降支,于左室前外侧壁形成缺血区域,约占左室壁面积的20%～50%。结果完成85例动物模型制作,存活74只,其中60只据术中所见、心电图、及病理检查证实有明确的心肌缺血,心功能下降。结论该方法制作简单可行,动物存活率满意;但模型欠稳定,需标本量较大以充分筛选。     

异种移植供体猪α-1,3GT基因打靶引导序列获得及其染色体定位

目的 :为阻止异种抗原靶分子的生成 ,抑制或减轻HAR发生 ,试图对异种抗原的合成酶α - 1,3GT基因进行打靶灭活 ,以产生α - 1,3GT表型缺乏且具有抗HAR反应能力的异种供体 (猪 )。方法 :以α - 1,3GT基因的cDNA片段为探针 ,采用噬菌斑原位杂交结合PCR技术筛选猪gDNA文库 ,经酶切、Southern杂交、测序鉴定所得片段 ,并采用荧光原位杂交定位。结果 :获 7个片段 ,均在 8kb以上 ,且包含第三内含子 ,其中 3个片段测序证实包括第三、第四外显子 ;荧光原位杂交证实该基因位于猪染色体 1q2 .10～q2 .11。结论 :研究表明所得片段可作为该基因打靶引导序列 ,染色体定位明确了基因打靶位点 ,PCR技术可以用于快速筛选 gDNA文库     

医学七年制教育方法浅析

随着人类社会的不断发展和生活水平的不断提高,人们对医学人才的知识技能和医德素质方面有了更高、更新的要求,医学教育的重点由原来的五年制教育转变成为七年制教育,以培养合适现代高技术信息化社会的医学人才,并初步形成了具有七年制特色的教学方法,现简单介绍如下.