血管生成素-1在体外对人胃癌细胞生物学作用的研究

目的：探讨人血管生成素-1（Ang1）及其与血管内皮生长因子165（VEGF165）共同作用对人胃癌细胞的生物学作用，研究其在肿瘤发生中的作用机制。方法：应用复制缺陷型腺病毒（Ad）．绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-Ang1、Ad-VEGF165和Ad-Ang1＋Ad-VEGF165／2转染人胃癌细胞株MGC-803，使用MTT比色法分析它们对胃癌细胞增殖的影响；通过流式细胞仪分析血浆饥饿时其对凋亡的影响；使用免疫细胞化学法检测Ki-67的表达；应用RT-PCR方法半定量检测bcl-2mRNA、bax mRNA的表达情况。结果：MTT结果显示24、48和72h Ad-Ang1转染组、Ad-VEGF165转染组和Ad-Ang1＋Ad-VEGF165／2转染组吸光度均明显高于Ad-GFP组及对照组（P〈0．05）：Ad-GFP组与对照组相比无显著差异（P〉0．05）；Ad-Ang1＋Ad-VEGF165／2转染组吸光度明显高于Ad-Ang1转染组和Ad-VEGF165转染组（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果显示Ad-Ang1、Ad-VEGF165及Ad-Ang1＋Ad-VEGF165／2处理组与对照组及空转染组相比均能够显著抑制细胞凋亡（P〈0．01）。免疫细胞化学法显示各转染组Ki-67表达强度均显著高于对照组和Ad-GFP组（P〈0．01）。RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA在各转染组中的表达要明显高于对照组（P〈0．05）；bax mRNA在各转染组中的表达要明显低于对照组（P〈0．05）。结论：Ang1、VEGF165和Ang1＋VEGF165／2能够明显促进人胃癌细胞MGC-803增殖，抑制血浆饥饿时的凋亡，Ang1＋VEGF165／2组的作用要显著强于Ang1组和VEGF165组。     

VEGF165转染内皮祖细胞移植对大鼠肾脏缺血再灌注的保护作用

目的：评估VEGF165基因转染的内源性内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）移植治疗肾脏缺血再灌注损伤（ischemia?reperfusion injury,IRI）的作用,进一步阐明EPCs对肾脏IRI产生保护作用的旁分泌机制。方法：40只成年雄性SD大鼠被随机分成4组,其中包括假手术组、缺血再灌注组、EPC移植组、携带VEGF165基因转染组。利用重组腺病毒载体Ad?VEGF165感染EPCs,并进行转染效率鉴定。并进一步移植治疗大鼠肾脏IRI,术后24 h和72 h分别评估血清肌酐及尿素氮水平;组织病理学检查评估各组大鼠术后肾损伤程度;免疫组化染色评估CD31表达情况;Western blot检测大鼠肾脏IRI中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管生成素?1（Ang?1）及血管生成素?2（Ang?2）表达情况。结果：研究发现利用重组腺病毒载体Ad?VEGF165转染的EPCs移植治疗后,大鼠肾脏血清肌酐、尿素氮水平和肾脏组织病理学明显改善,术后72 h检测大鼠患肾,其CD31、VEGF、Ang?1以及Ang?2表达水平均明显提升。结论：VEGF165基因转染的EPCs移植治疗可以有效治疗大鼠肾脏IRI,其作用机制可能与EPCs归巢后旁分泌过量VEGF并进一步促进Ang?1、Ang?2等血管新生因子表达,从而促使肾脏血管新生有关。     

腺病毒介导的血管内皮生长因子165对兔外周血管生成作用的研究

目的：检验以腺病毒为载体的 血管内皮生长因子165（Ad-VEGF165)基因的表达规律及能否促进缺血骨骼肌血管生成。方法：将兔右股动脉离断后,在缺血肌肉组织中直接注入Ad-VEGF165或磷酸盐缓冲液（PBS）,5周后,以血管造影、免疫组化检查及单光子发射计算机断层（SPECT）显像检测局部缺血组织血管新生情况。用酶联免疫分析法（ELISA）检测血浆和肌肉组织中Ad-VEGF165的表达。结果：Ad-VEGF165注入缺血肌肉组织后24h达到表达高峰,1周时降至基线水平,血浆及对侧健康的肌肉组织中无目的基因表达,治疗缺血肢体侧枝血管（P＜0．01）、血管密度（P＜0．05）及相对血流（P＜0．01）均明显高于对照组。结论：缺血肌肉组织中直接注入Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进缺血部位的血管生成,增加血流量。     

VEGF165基因转染EPCs移植对大鼠阿霉素肾病组织学的影响

目的 构建含血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒(Ad-VEGF165),转染血管内皮祖细胞(EPCs)后,观察其对阿霉素肾病大鼠肾脏组织学的影响.方法 用细菌内同源重组法构建含VEGF165基因的重组腺病毒Ad-VEGF165,通过PCR和Western blot鉴定所构建的腺病毒.贴壁法体外培养获得大鼠骨髓来源的EPCs,Ad-VEGF165体外转染EPCs,检测转染后目的基因的蛋白表达.大鼠阿霉素肾病模型形成过程中,尾静脉注射转染Ad-VEGF165的EPCs,在第16周时观察肾脏组织学变化.结果 PCR和Western blot证实构建的重组腺病毒含有目的基因,滴度为1.4×1010PFU/ml;培养第6天的EPCs用于Ad-VEGF165转染,转染后24 h,培养上清中VEGF蛋白表达较对照组和转染前增加.转染了VEGF165基因的EPCs移植后第12周(切肾术后16周),转染组的肾小球硬化和肾小管间质纤维化的程度明显较肾病组轻.结论 转染了VEGF165基因的EPCs可以减轻阿霉素肾病的肾小球和肾小管的损伤程度,为VEGF在慢性肾脏病治疗提供了实验基础.     

MSCSHH心肌移植对大鼠心肌梗死后血管新生的作用机制研究

目的 探讨Sonic hedgehog（SHH）基因转染骨髓间充质干细胞并移植大鼠心梗区后,血管新生的变化及作用机制.方法 以结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型,并按随机数字表法分为5组（每组40只）.分别在梗死周边部位移植BMMSCSHH（转染组）、等量的BMMSC（细胞组）、BMMSC和pcDNA3.1-Shh DNA的混合物（混合组）、单纯pcDNA3.1-Shh DNA质粒（基因组）、等容积的低糖DMEM培养基（对照组）.移植后第1、2、4、8周每组分别取10只为标本,qPCR检测移植后各组间移植部位Ptc1、Gli-2、COUP-TFⅡ等SHH信号传导通路下游基因以及血管内皮生长因子（VEGF）、Ang-1促血管再生因子的表达差异.结果 移植后第7天,转染组移植部位SHH下游基因Ptc1、Gli-2、COUP-TFⅡ表达分别较对照组、细胞组、基因组、混合组上调（Ptc1：P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05; COUP-TF Ⅱ：P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05;Gli-2：P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05）;转染组VEGF、Ang-1等促血管再生因子分别较对照组、细胞组、基因组表达上调（VEGF：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05;Ang-1：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05）,而与混合组比较差异无统计学意义,但有表达上升的趋势（VEGF：P＝0.147,Ang-1：P＝0.15）.而在后续第2、4、8周检测上述因子表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 转染SHH基因后的骨髓间充质干细胞移植大鼠心梗区后通过上调其下游基因表达促进血管新生,其作用随时间的推移逐渐减弱.     

HMGB1联合MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心脏血管生成影响

目的 通过高迁移率组蛋白1（High Mobility Group Box-1,HMGB1）预处理骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）,观察HMGB1能否增强MSCs旁分泌效应;在大鼠急性心肌梗死的模型上,HMGB1同时联合移植MSCs,观察HMGB1联合MSCs移植是否能进一步增加梗死区域局部新生血管数量.方法 贴壁离心法培养大鼠MSCs,HMGB1的受体TLR4和RAGE检测;不同浓度梯度HMGB1分别干预MSCs后,ELISA法检测VEGF的表达情况;SD雄性大鼠分为4组：模型组、MSCs移植组、HMGB1注射组、HMGB1注射＋MSCs移植组（n=24只）,制备大鼠急性心肌梗死模型;术后3、7、28 dELISA法检测血清VEGF浓度水平;术后28d免疫组化测定梗死区新生血管密度.结果 ①MSCs有TLR4和RAGE的表达;②浓度为12.5、25、50、100和200ng/mL HMGB1干预MSCs后,VEGF的分泌较对照组显著增加,当浓度为400和800ng/mL时,VEGF的分泌量较对照组减少（P＜0.05）;③术后3、7d时间点血清VEGF测定：HMGB1注射＋MSCs移植组＞MSCs移植组＞HMGB1注射组＞模型组（P＜0.05）;④HMGB1注射＋MSCs移植组的CD31染色新生血管数明显增多.结论 HMGB1联合MSCs移植对急性心肌梗死大鼠心梗区及交界区新生血管生成有益.     

血管内皮生长因子对小型猪心肌血管生成作用的研究

目的：检测血管内皮生长因子165（VEGF16）能否促进冠状动脉侧枝血管形成并改善心肌局部灌注与功能。方法：小型猪做成慢性心肌缺血模型后,将以腺病毒为载体的重组人VEGF165互补脱氧核糖核酸[(cD-NA)Ad-VEGF165]或β-半乳糖酶cDNA直接注入冠状动脉回旋支分布的心肌内,以心电图门控单光子发射计算机断层摄影术（SPECT）和离体心脏冠状动脉造影（CAG）检测冠状动脉侧枝生成、心肌灌注及功能变化。结果：与对照组和自身用药前SPECT检查相比。Ad-VEGF165治疗后心肌缺血面积（P＜0．01）和最大缺血程度（P＜0．01）明显减小左心室射血分数（P＜0．01）和LCX区局部室壁运动（P＜0．05）明显改善,离体心脏CAG采用Rentrop分级示治疗组侧枝血管生成明显多于对照组（P＜0．05）。结论：Av-VEGF165能诱导心肌侧枝血管形成并改善心肌灌注与运动功能。     

针刺任督脉对脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和CD34表达的影响

目的 探讨任督脉经穴针刺对脑缺血再灌注大鼠脑内血管内皮生长因子（VEGF）和CD34蛋白表达的影响.方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺任督脉组,每组又随机分为7、14 d和28 d各三个亚组.线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型.假手术组切开后不插线直接缝合.利用免疫组化法检测7、14 d和28 d大鼠脑内VEGF和CD34蛋白的表达情况.结果 大鼠MCAO后模型组和针刺任督脉组VEGF和CD34蛋白表达均增加,其中,模型组VEGF表达在7d为最低（169.97±2.42,P＜0.01）,后逐渐增多,CD34表达在14 d为高峰期（164.17±2.86,P＜ 0.01）,后逐渐减少.针刺任督脉组跟模型组的7、14 d和28 d相比,VEGF表达均增加（14.47±0.32） （P＜ 0.01）、（10.16±0.25）（P＜0.01）、（9.17±0.21）（P＜0.01）,且CD34表达均增加（16.00±0.20） （P＜ 0.01）、（19.34±0.38） （P＜ 0.01）、（16.50±0.27） （P＜ 0.01）.结论 针刺任督脉经穴可能通过上调脑内VEGF和CD34蛋白表达,促进微血管新生,这可能为其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一.     

高表达促血管生成素1间充质干细胞的构建及其在肺损伤中的应用

目的将间充质干细胞（MSCs）作为基因载体，利用基因转染技术构建高表达促血管生成素1（Ang1）基因的MSCs，回输体内治疗炎症性肺损伤模型，观察其肺内定位和修复作用。方法分离、培养和扩增MSCs至第四代，经流式细胞仪鉴定，得到纯度较高的MSCs。同时以三质粒共转染法在293T细胞中制备病毒颗粒Lenti-GFP-Ang1，并转染MSCs，通过实验确定转染的最佳MOI和最佳时间，通过RT-PCR检测转染后MSCs中Ang1的基因表达，确定转染成功。以脂多糖雾化吸入的方式诱导小鼠炎症性肺损伤模型，设未处理组为对照，设三组干预组，包括携带Ang1的MSCs组（MSC—Ang1组）、单纯Ang1组（Ang1组）和单纯MSCs组（MSCs组）。观察并记录各组生存天数，计算生存率并进行生存分析；免疫组化确定外源MSCs源性细胞在肺部的表现。结果经多重纯化后，流式细胞仪鉴定获得的干细胞为CD44（＋）、Sca-1（＋）、CD31（-）和CD45（-）的MSCs，并具有分化潜能。病毒载体构建亦通过鉴定成功。MSCs株经转染后高表达Ang1基因，当MOI=20时，MSCs的细胞活性及转染达到最佳效果，经荧光检测在第5d达表达高峰。生存率分析显示MSC-Ang1组生存率稍高于对照组，但差异无统计学意义（P=0．066）。移植后受损肺组织内可见表达绿色荧光蛋白的肺泡上皮样细胞和肺血管内皮样细胞。结论高表达目的基因Ang1的MSCs可通过基因技术有效构建，移植体内后，可在肺内检测到MSCs的转化修复。MSCs可作为治疗肺部疾病的基因运载工具。     

腺病毒介导血管内皮细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞

【目的】探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子（VEGF165）基因转染大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）后目的基因表达情况及对MSCs增殖分化的影响。【方法】构建含VEGF基因的腺病毒表达载体，利用贴壁法分离培养MSCs后，用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效果和转染率，用免疫组化、Western—Blot和ELISA方法分别检测VEGF基因转染MSCs后VEGF的表达情况。【结果】腺病毒介导的VEGF基因对于MSCs具有很高的转染效率，转染效率与病毒感染复制数（multipcyties of infection，MOI）具有量效关系。MOI为150倍时，转染效率〉95％，转染VEGF后，MSCs可有效表达VEGF，9d时达到表达高峰（1125pg／mL），13d后仍可检测到VEGF的表达。转染VEGF对MSCs的增殖分化没有明显影响。【结论】腺病毒介导的VEGF基因可以有效的转染MSCs，MSCs是一种理想的基因载体细胞，其携带的VEGF基因可获得较高的表达水平。     

Transplantation of VEGF165-gene-transfected endothelial progenitor cells in the treatment of chronic venous thrombosis in rats

Background The organization and recanalization of thrombi is a dynamic and complex process. The aim of this research was to study the cotherapeutic effect of stem cell transplantation and gene transfection on chronic venous thrombosis. Methods We constructed a recombinant adenoviral vector carrying the vascular endothelial growth factor 165 （VEGF165） gene by using the pAdEasy system, which was subsequently identified and amplified. Simultaneously, endothelial progenitor cells （EPCs） were isolated from rat bone marrow using Ficoll, cultured in EBM-2MV medium, and identified. Then, the cells were transfected with the recombinant Ad-VEGF165. The EPCs were labeled with 1 ,1＇-dioctadecyl-3,3,3＇,3＇-tetramethylindocarbocyanine （Dil） before transplantation. A rat model of chronic vein thrombosis was developed by partial ligation of the inferior vena cava. The rats were randomly divided into 4 groups （n=25, each）： A, Ad-VEGF165/EPC-transplantation group received 1 ml （10^6） of Ad-VEGF165/EPCs; B, EPC-transplantation group received 1 ml （10^6） of EPCs; C, Ad/EPC-transplantation group received 1 ml （10^6） of Ad/EPCs; D, control group received 1 ml of the transplantation medium. The thrombi and adjacent caval walls were harvested 28 days after transplantation; real-time quantitative polymerase chain reaction was used to detect the expression level of vascular endothelial growth factor （VEGF） mRNA; and western blotting was used to measure changes in VEGF protein expression. Hematoxylin-eosin staining and immunohistochemical staining were performed to detect recanalization. Neovascularization was detected by immunohistochemical staining using the antibody for von Willebrand factor （vWF）, which is a component of endothelial cells.The capillary density was quantitatively determined by counting the capillaries under a high-power microscope. Results The Ad-VEGF165 was constructed, and bone-marrow-derived EPCs were cultivated and successfully identified. We determined the optimum transfection ratio that promoted the growth of EPCs. After transfection, the EPCs secreted the VEGF protein. After transplantation, the in vivo survival of EPCs and their differentiation into endothelial cells were determined by detecting the fluorescence associated with the Dil stain. VEGF mRNA was expressed in groups A, B, C and D after transplantation, and the VEGF mRNA level in group A was significantly higher than those in groups B, C and D （P〈0.05）; the VEGF mRNA levels in groups B and C were significantly higher than those in group D （P〈0.05）, and there was no statistical significance between the VEGF mRNA levels in groups B and C. The recanalization capillary density in group A was significantly higher than those in groups B, C （P 〈0.05） and D （P 〈0.01）; the recanalization capillary densities in groups B and C were significantly higher than that in group D （P 〈0.05）. Moreover, there was no statistical significant difference between the values for groups B and C. Conclusions The EPCs were successfully transfected by Ad-VEGF165. A suitable transfection ratio can improve the efficiency of EPCs and the possibility of promotion of angiogenesis after transplantation. Transfected EPCs caused accelerated organization and recanalization of vein thrombi.     

PPARγ基因修饰对兔骨髓间充质干细胞成脂分化及ADRP、LPL表达的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因转染对免骨髓间充质干细胞（MSCs）向脂肪细胞分化的影响,探讨PPARγ在脂肪细胞早期分化中可能的调控机制。方法原代培养新西兰大白兔MSCs,应用脂质体介导法将pEGFP-N1-PPARγ表达载体转入MSCs中,G418筛选。分成不诱导组、空转染诱导组及转染诱导组以成脂诱导剂诱导分化,每日观察细胞形态学变化,镜下计数并计算脂肪细胞分化率,采用RT-PCR方法检测脂肪分化相关蛋白（ADRP）、脂蛋白脂酶（LPL）mRNA表达,Western blot检测ADRP、LPL蛋白表达。结果不诱导组细胞内没有脂滴出现,空转染诱导组和转染诱导组部分细胞成功分化为脂肪细胞,转染诱导组分化率明显高于空转染诱导组（P〈0.05）;不诱导组ADRP、LPLmRNA及蛋白均不表达,转染诱导组ADRP、LPLmR-NA及蛋白表达水平显著高于空转染诱导组（P〈0.05）。结论PPAR-γ基因转染MSCs可促进其向脂肪细胞分化,增强其分化能力,可能与促进ADRP、LPL基因和蛋白的表达有关。     

IL-23基因转染对荷瘤小鼠肿瘤组织血管生成的影响

目的将小鼠IL-23（mIL-23）基因转染小鼠乳腺癌细胞（MA-891）,检测转染后小鼠乳腺癌组织内VEGF的表达及微血管密度,了解VEGF的表达是否受IL-23基因转染的影响。方法应用逆转录病毒载体（LXSN）将含IL-23的基因质粒经φ2（ecotropic）和PA317（amphotropic）两种细胞包装,G418筛选获得携带IL-23基因的病毒后,转染MA．891细胞,经G418筛选后获得IL-23／MA-891阳性克隆。用ELISA法检测IL-23／MA-891细胞分泌IL-23的能力;用MTT比色法检测细胞体外增殖能力;分别取接种IL-23／MA-891、LXSN／MA-891、MA-891细胞30天时的小鼠肿瘤组织,采用RT-PCR法以及免疫组化法检测三组小鼠肿瘤组织中VEGF的表达。结果1）免疫组化法检测显示,接种IL-23／MA-891细胞组小鼠肿瘤组织中VEGF的表达水平明显低于接种LXSN／MA-891和MA．891细胞组小鼠的肿瘤组织（P〈0．01）;CD34阳性的微血管计数（MVD）为18．23±6．92,明显低于接种LXSN／MA-891（36．13±10．40）和MA-891细胞组（38．16±12．30）小鼠的肿瘤组织（P〈0．01）。2）RT-PCR法检测显示,接种IL-23／MA-891细胞组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA表达水平明显低于接种LxSN／MA．891细胞和MA-891细胞组小鼠的瘤组织（P〈0．01）。结论转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞在荷瘤小鼠体内通过分泌IL-23,可能降低细胞VEGF的表达,抑制肿瘤微血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。     

VEGF-165基因修饰的MSCs诱导分化后治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究

目的：探讨VEGF-165基因联合单纯骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stemcells,MSCs）治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法：1）体外分离、培养兔MSCs,纯化并鉴定兔MSCs;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPeDNA3．1-hVEGF165：3μl阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。2）测定在正常条件培养和成骨备件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。3）实验动物连续三天大剂量（40mg／kg）臀部肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠,通过MRI和组织病理学检查,建立动物模型。4）随机分成4组,每组14只。经皮穿刺于右侧股骨头,（1）生理盐水组,（2）单纯MSCs组,（3）hVEGF165基因转染MSCs组,（4）诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组。8周后,组织病理学检查成骨和细胞成活情况。结果：1）hVEGF165基因转染的MSCs能成功分泌VEGF蛋白。2）成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组（P〈0．05）;而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。3）成功建立ANFH模型。4）组织学评分：生理盐水组1．8±0．72;单纯MSCs组8．54±0．37;hVEGF165基因转染MSCs组11．96±0．26;诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组13．7±0．43,各组间差异有显著性（P〈0．05）。诱导分化转基因干细胞组与单纯干细胞组和生理盐水组之间差异非常显著（P〈0．01）。结论：诱导分化后的hVEGF165基因转染MSCs组成骨能力更好,修复股骨头缺血性坏死的能力也是最强。     

自杀基因修饰内皮祖细胞对肝细胞癌体外作用的效应

目的：研究自杀基因胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转染的小鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）联合酶前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）对小鼠肝癌细胞株H22的体外抗增殖作用。方法：分离普通小鼠骨髓源性EPCs,培养鉴定,Polybrene技术转染含CD基因的慢病毒载体重组体plenti6．3-EGFP-CD至EPCs,Western blotting检测目的蛋白的表达。利用Transwell小室共培养体系,用转染CD基因的EPCs处理H22细胞。 CCK-8法检测H22细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果：成功转染CD基因至EPCs;CCK-8法检测显示随着5-FC浓度增加,细胞增殖逐渐下降,5-FC浓度达100 mg· L-1时,肿瘤细胞增殖抑制率达到（54．74±5．38）％（P＜0．05）,细胞平均凋亡率为（48．71±4．62）％（P＜0．05）。结论：CD基因修饰的EPCs 联合5-FC体外可明显抑制肝癌H22细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

健脾益肾方合肾病治疗仪治疗慢性肾功能衰竭临床疗效观察

目的观察健脾益肾方联合肾病治疗仪对慢性肾功能衰竭（CRF）的治疗效果。方法选取慢性肾脏病3-4期患者66例,随机分为2组。对照组30例,单纯使用健脾益肾方治疗;治疗组36例,在对照组的基础上加用肾病治疗仪治疗。治疗2周,观察临床症状以及血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化情况。结果治疗后2组症状均较治疗前明显减轻,差异有显著性（P〈0.01）,治疗组较对照组症状减轻明显（P〈0.05）,2组总有效率分别为86.1%、70%,但无统计学差异;2组治疗后Scr、BUN均显著降低（P〈0.01）,且治疗组Scr降低较对照组明显（P〈0.01）。结论健脾益肾方可以有效治疗慢性肾功能衰竭,降低Scr和BUN,联合使用肾病治疗仪可提高疗效。     

血管紧张素转化酶2基因转染对动脉硬化血管内皮细胞的保护作用

目的通过观察血管紧张素转化酶2（ACE2）基因转染对动脉粥样硬化模型兔血管内皮细胞的作用,阐明ACE2基因转染对内皮细胞的保护作用及机制。方法采用球囊损伤内皮细胞及高脂饲养建立兔动脉粥样硬化模型,16只新西兰大白兔随机分为Ad-ACE2组（转染携带ACE2基因的重组腺病毒）和Ad-EGFP组（转染空载重组腺病毒）,每组8只。Ad-ACE2组和Ad-EGFP组分别经腹主动脉注射ACE2腺病毒（2．5X10。pfu／mL）和Ad—EGFP。1个月后处死动物取腹主动脉制备标本,Westernblotting法检测动脉粥样硬化斑块中ACE2蛋白表达,免疫组织化学法检测细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和P选择素（P-selectin）蛋白的表达,油红O染色进行脂质半定量分析。结果Ad-ACE2组斑块中ACE2蛋白表达显著高于Ad．ACE2组（P〈0．05）。Ad-ACE2组斑块内ICAM-1和P-selectin的阳性表达率均明显低于Ad．EGFP组[（16．95-i-3．09）％和（24．81±4．78）％;（16．22±2．45）％和（23．46±3．28）％],组间比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。Ad-ACE2组斑块内脂质含量为（41．77±3．17）％,明显低于Ad-EGFP组的（59．55±1．55）％,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ACE2基因转染通过下调ICAM．1和P-selectin蛋白的表达,保护兔动脉内皮细胞,抑制动脉粥样硬化的进展。