关于卵巢癌遗传学研究技术新进展

人类肿瘤的发生和发展常与染色体异常有关,这种非随机性的异常主要包括了染色体的丢失、获得、扩增和重排等。随着遗传学研究技术不断地深入,人们在荧光原位杂交技术(FISH)上建立了比较基因组杂交技术(CGH)、微阵列比较基因组杂交技术(arrayCGH),并广泛应用于细胞遗传学、肿瘤生物学上,本文就卵巢癌遗传学技术的最新进展作一综述。     

比较基因组杂交抄术在实验应用中的体会

比较基因组杂交（Comparative genomic hybridization，CGH）技术是1992年Kalioniemi在荧光原位杂交基础上，结合消减技术发展起来的一种能够快速、全面分析染色体基因组，甚至分析整条染色体获得和缺失的一种较新的细胞遗传学方法。与其他肿瘤细胞遗传学方法相比，主要的优点是不需要制备肿瘤细胞的中期分裂象，对肿瘤标本没有限制，仅需要微量基因组DNA即可进行全基因组检测，不仅可用于肿瘤细胞系、新鲜组织和冰冻肿瘤组织，     

分子病理学技术应用原理和适用范围

1Southern杂交：Southern杂交是1975年由Southem提出，并以其名字命名的一种DNA特定序列定位技术。由于此方法具有特异性强、灵敏度高、应用广泛等优点，已成为DNA分析特别是基因组DNA分析中的最常用手段之一。Southern杂交的基本方法是，从组织或培养细胞中获得全部的基因组DNA。以一种或多种限制性核酸内切酶进行消化，通过琼脂糖凝胶电泳按分子量大小分离酶切所得到的片段，然后使这些DNA片段在原位发生变性，     

微阵列比较基因组杂交技术在出生缺陷新生儿中的应用研究

目的:探讨微阵列比较基因组杂交技术在出生缺陷新生儿中的应用价值。方法:选取不明原因的出生缺陷新生儿20例为研究对象,采用微阵列比较基因组杂交技术评估出生缺陷发生的遗传病因。结果:20例患儿经常规染色体检测存在2例(10%)染色体拷贝数变异,但无法明确病因。另经微阵列比较基因组杂交技术检测后,有5例患儿(25%)存在染色体拷贝数变异,4例患儿明确病因,与常规染色体检测结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,1号患儿在chr22q13.31q13.33区域发生3.8 Mb片段缺失,为Phelan-McDermid综合征;2号患儿在chr15q11.2q13.1区域发生约6.2 Mb片段缺失,与Prader-Willi综合征相关;3号患儿在chr11q24.2q25区域发生10.3 Mb片段缺失,为Jacobsen综合征;4号患儿在chr5q32处存在约311 Kb缺失片段,该片段缺失可致Treacher Collins综合征;5号患儿多条染色体发生了大片段纯合子(>3Mb)现象,片段长度总和大约为171.0 Mb,占常染色体基因组片段总长度的6.0%,无明确临床意义。其余患儿染色体拷贝数为正常多态性改变。结论:在常规染色体检测无法确诊的情况下,采用微阵列比较基因组杂交技术进行全基因组的快速扫描可明确部分患儿病因,具有重要的临床意义。     

比较基因组杂交技术在实验应用中的体会

比较基因组杂交(Comparative genomic hybridization,CGH)技术是1992年Kalioniemi在荧光原位杂交基础上,结合消减技术发展起来的一种能够快速、全面分析染色体基因组,甚至分析整条染色体获得和缺失的一种较新的细胞遗传学方法[1～2].与其他肿瘤细胞遗传学方法相比,主要的优点是不需要制备肿瘤细胞的中期分裂象,对肿瘤标本没有限制,仅需要微量基因组DNA即可进行全基因组检测,不仅可用于肿瘤细胞系、新鲜组织和冰冻肿瘤组织,还可用于石腊包埋的存档组织,因此已成为当今对整个染色体扫描分析最常用的技术.     

比较基因组杂交芯片筛选头颈部鳞状细胞癌患者转移相关的差异表达基因

目的 检测头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）标本,寻找与HNSCC转移有高度相关性的基因。方法采用比较基因组杂交芯片技术,分别检测80例临床HNSCC标本,包括舌癌17例,口腔癌13例,口咽癌14例,下咽癌36例。结果比较基因组杂交CGH检测结果示...     

微阵列芯片技术在儿童畸形中的应用

微阵列芯片技术是生命科学和信息工程相结合的高科技结晶,是高效率的核酸杂交分析技术,以其连续化、微型化、自动化等优势在基因组结构和功能的研究上起着重要作用。目前该技术主要应用于基因组功能研究、临床诊断及预后判断、新药开发及药物筛选等方面,在生命科学的许多领域得到广泛应用,并且扮演着重要角色。本文将对该技术     

豫医无毛小鼠无毛基因DNA原位PCR检测

目的：探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法：应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片，并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加Taq DNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果：豫医无毛小鼠皮肤和脾石蜡组织切片中检测到清晰的杂交信号，而且杂交信号位于细胞核内；4组对照均未出现杂交信号。结论：原位PCR在基因组变异检测方面实用、有效。     

单纯疱疹病毒I型(HSV-I)病毒基因组的重克隆

单纯疱疹病毒I型(HSV-I)急性感染后往往在宿主体内呈终身潜伏感染状态。用两步法核酸分子杂交技术检测潜伏感染状态下细胞内的病毒基因组,要求所有HSV-I基因组的内切酶片段克隆在同一种质粒载体内。本文报导将HSV-I KOS株EcoRI酶切片段的不同克隆,以pEcoA和pEcoB为例,重新克隆(单一的)pBR322质粒内,最后在pER322中得到一套能覆盖全部基因组的克隆。     

ras基因改变与肺癌的关系(综述)

<正> 自本世纪初在鸡肉瘤中发现具有RNA基因组的逆转录病毒—Rous肉瘤病毒以来,相继又证实病毒感染可使正常细胞转变为癌细胞。并在Rous肉瘤病毒基因组内发现可诱导肿瘤发生的基因—病毒癌基因。随着基因转染和基因杂交技术的发展和应用,在正常哺乳动物细胞基因组中也发现了与逆转录病毒癌基因有同     

应用比较基因组杂交技术鉴定标记染色体的来源

目的:确定额外标记染色体来源,对染色体异常患者进行明确的遗传学诊断.方法:应用比较基因组杂交(comparative genomic hybridization, CGH)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术对1例小标记染色体患者进行分子细胞遗传学检测.结果:显示13号染色体近着丝粒q11-q12区有一明显扩增,提示该额外小标记染色体来源于13号染色体pter→q12.结论: CGH结合FISH技术是鉴别标记染色体来源的又一快速便捷的方法.     

比较基因组杂交技术的改进及其在产前诊断中的应用

目的改进比较基因组杂交（CGH）技术,为产前诊断胎儿染色体异常提供有益手段。方法选取唐氏综合征筛查结果为高风险、细胞遗传学结果异常的孕妇5例,因胎儿畸形、死胎引产的孕妇11例。缺口平移法标记待测DNA和对照DNA,同时将待测DNA和对照DNA的荧光颜色互换,即进行荧光互换CGH,根据绿红两种信号的比值制作CGH拷贝数核型模式图,以1.0表示平衡比例,荧光强度比（FR）阈值定为1.25和0.75。以细胞遗传学检查检验CGH分析的敏感性和可靠性。结果16例孕妇胎儿样本均成功利用CGH方法进行了分析、确认,结果与细胞遗传学分析一致;1例细胞遗传学诊断为4号染色体的长臂远端部分缺失病例,CGH为4号染色体q32 qter缺失。CGH分析在荧光互换前后FR曲线并不完全互补。结论CGH技术经荧光互换等改进能最大程度的排除在实验过程中可能产生的误差,可作为产前诊断中传统核型分析的有益和必要补充。     

Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis

Cytogenetic aberrations may escape detection or recognition in traditional karyotyping. The past decade has seen an explosion of methodological advances in molecular cytogenetics technology. These cytogenetics techniques add color to the black and white world of conventional banding. Fluorescence in-situ hybridization (FISH) study has emerged as an indispensable tool for both basic and clinical research, as well as diagnostics, in leukemia and cancers. FISH can be used to identify chromosomal abnormalities through fluorescent labeled DNA probes that target specific DNA sequences. Subsequently, FISH-based tests such as multicolor karyotyping, comparative genomic hybridization (CGH) and array CGH have been used in emerging clinical applications as they enable resolution of complex karyotypic aberrations and whole global scanning of genomic imbalances. More recently, crossspecies array CGH analysis has also been employed in cancer gene identification. The clinical impact of FISH is pivotal, especially in the diagnosis, prognosis and treatment decisions for hematological diseases, all of which facilitate the practice of personalized medicine. This review summarizes the methodology and current utilization of these FISH techniques in unraveling chromosomal changes and highlights how the field is moving away from conventional methods towards molecular cytogenetics approaches. In addition, the potential of the more recently developed FISH tests in contributing information to genetic abnormalities is illustrated.     

宫颈癌多阶段多途径演进的树模型构建

目的基于宫颈癌比较基因组杂交资料构建宫颈癌的树模型,探讨宫颈癌发展演进的多途径模式。方法根据收集的58例宫颈癌完整比较基因组杂交资料,利用Desper等建立的肿瘤树模型软件平台,构建宫颈癌的树模型。结果宫颈癌树模型提示,有6个非随机的染色体扩增或者缺失事件发生在宫颈癌变过程中: 1q, 3q, 5p, 17q, 20q和 20p,其中 3q和 1q可能是宫颈癌癌变中的重要早期事件; 3q要先于 17q发生,并且两者之间可能存在先后依存关系;而且, 1q可能是一个相对独立发生的事件;这些扩增染色体上可能存在与宫颈癌发生、发展演进密切相关的瘤基因。结论基于比较基因组杂交资料构建的宫颈癌树模型,提示宫颈癌多阶段、多途径的发展演进模式,也为后续宫颈癌相关基因的探索指明了方向。     

单细胞退变寡核苷酸引物PCR-比较基因组杂交研究

目的 探索单细胞退变寡核甘酸引物PCR（DOP-PCR）-比较基因组杂交（CGH）技术应用于单细胞全基因组分析及着床前胚胎遗传学研究的可能性。方法 建立单个淋巴细胞的DOP-PCR技术，分别以正常男性的组织DNA和单细胞DOP-PCR产物为参照，进行正常男，女性和X单体，X、13和21三体单细胞DOP-PCR产物的CGH。结果 X染色体在以组织DNA为参照的CGH中呈假性过度表达，13、21三体未能显示阳性结果，以单细胞DOP-PCR产物为参照的CGH不仅能正确反映X和Y拷贝数。而且能显示13和21三体相应染色体的过度表达。结论 单细胞DOP-PCR存在非随机的不均匀扩增，其对CGH的影响，能通过应用单细胞DOP-PCR产物为参照而得以纠正，单细胞DOP-PCR-CGH及其用于着床前胚胎遗传学研究具有可能性。     

基于微阵列芯片的比较基因组杂交技术在临床实验室产前诊断中的应用

Array-based comparative genomic hybridization (array CGH), a method used to detect gains or losses of genetic material, has recently been applied to prenatal diagnosis of genomic imbalance in the clinical laboratory setting. This new and exciting diagnostic tool represents a major technological step forward in cytogenetic testing and addresses many of the limitations of current cytogenetic methods.Conventional chromosome analysis, the current gold standard in prenatal diagnosis, focuses primarily on the detection of common aneuploidies and is limited by its capacity to detect only those copy number changes that are large enough to be microscopically visible (typically 5-6 Mb in size at the 500 band level). In contrast, array CGH analysis simultaneously evaluates regions across the entire genome and al-lows for detection of unbalanced structural and numerical chromosome abnormalities of less than one hun-dred kb. Array CGH analysis also overcomes some of the limitations of chromosome analysis, such as the requirement for cell culture and longer reporting time, by using direct uncultured fetal specimens. With many diagnostic laboratories now embracing this technology, the past year has seen tremendous growth in the use of array CGH analysis for prenatal diagnosis. This review aims to summarize array CGH methodology and its current applications in prenatal diagnosis.     

广泛标记系统在石蜡包埋膀胱癌组织比较基因组杂交中的应用

目的 探讨广泛标记系统（ULS）在石蜡包埋组织比较基因组杂交（CGH）中的应用价值,研究膀胱癌石蜡包埋组织中染色体基因组非平衡性情况.方法 对比实验：正常膀胱黏膜组织基因组DNA,用DNA酶进行酶切至适当大小的片段作为探针,用广泛标记系统直接标记DNA探针,并按1：1的量与经缺口平移标记的同一个组织的DNA探针进行CGH.提取膀胱移行细胞癌石蜡包埋组织中基因组DNA,经测定浓度、纯度,并经琼脂糖电泳筛选出20例适合于CGH的标本.同法进行ULS标记,并与缺口平移法标记的正常参照DNA进行CGH.结果 对比实验中,同一个正常膀胱黏膜组织应用2种标记方法进行CGH后,荧光强度相同,不需要调整探针的量.在所有膀胱癌组织中均检测到基因组DNA的畸变,其中发生频率较高的染色体增益区段或位点位于1q、3q、5p、8q、17q;缺失区段或位点位于8p、9q、11q、11p、17p.结论 膀胱癌中存在染色体基因组的不平衡.应用石蜡包埋的组织进行间接法CGH时,ULS标记系统是一种非常有价值的标记方法.这为充分利用石蜡档案进行CGH的研究提供了良好的方法.     

河南林州市居民贲门癌组织的比较基因组杂交分析

目的：探讨贲门癌高发区河南林州市贲门癌组织中的基因组变化，寻找相关未知基因。方法：采用比较基因组杂交的方法（comparative genomic hybridization,CGH)分析10例原发性贲门癌组织基因组变化。结果；CGH分析显示1q(4/10),11q(3/10),3q(2/10),8q(3/10),8p(2/10)为出现频率较高的扩增区，9q(3/10)的缺失可能是贲门癌的特征性变化。结论：1q,11q,3q,8q,8p,9q可能存在与贲门癌相关的未知基因。