HepG2细胞蛋白质组双向电泳条件的优化与图谱的建立

目的：优化双向电泳的样品处理方法,建立HepG2细胞蛋白质双向电泳图谱。方法：用含10%胎牛血清的RPM11640培养液培养HepG2细胞,胰酶消化后收集细胞,加入细胞裂解液使细胞充分裂解,冰浴超声离心后取上清液进行双向凝胶电泳,电泳图谱经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析。结果：通过对HepG2细胞蛋白提取液进行双向电泳,在13 cm pH 3~10（L）IPG胶条上可分离到（297±23）个重复性及分辨率均较好的蛋白质点,蛋白斑点的匹配率为83%。结论：HepG2细胞蛋白质组双向电泳条件的优化及图谱的建立,为进一步研究肝癌蛋白质组学奠定了基础。     

黏细菌总蛋白质组双向电泳条件的建立

目的：建立可以对黏细菌蛋白质组进行阵列分离的双向电泳条件。方法：以黏细菌模式菌株DK1622为材料，不同方法制备DK1622在营养性生长阶段的蛋白质组样品，双向电泳阵列菌体总蛋白。通过不同条件下电泳图谱的比较建立蛋白质组样品的制备方法和双向电泳的技术条件。结果：两性离子去污剂CHAPS及还原剂的浓度是影响双向电泳图谱分辨力的重要因素；蛋白质组样品的处理必须在低温下快速完成，以避免蛋白降解。结论：初步建立了黏细菌总蛋白质组的双向电泳条件，为在细胞水平分析该模式生物发育时期蛋白表达谱奠定了基础。     

肝癌细胞株HepG2蛋白双向电泳条件的优化

目的优化双向电泳条件,以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。方法比较不同的细胞总蛋白质裂解液、不同的蛋白上样量、不同的等电聚焦电泳条件,选择最佳双向电泳条件。结果确定了适合肝癌细胞株HepG2的最佳细胞总蛋白质裂解液5、最佳蛋白上样量650μg和最佳等电聚焦电泳条件为最大电压34kV、30min。结论优化双向电泳方法获得的肝癌细胞株HepG2蛋白质双向电泳图谱高分辨率、重复性好。     

人角质形成细胞蛋白质双向电泳技术的建立和优化

目的 建立和优化人角质形成细胞蛋白质组研究样品制备方法和双向电泳技术条件.方法 体外无血清培养人角质形成细胞,以裂解液成分、上样量的选择和等电聚焦参数为侧重点,通过比较分析不同条件下电泳图谱,建立最佳双向电泳技术条件.结果 成功建立了人角质形成细胞总蛋白制备方法,优化了人角质形成细胞双相电泳技术,获得了重复性和分辫率都较理想的角质细胞总蛋白质双向电泳图谱.结论 优化后的双相电泳条件为人角质形成细胞蛋白质组学分析奠定基础.     

人结肠腺癌Lovo细胞系蛋白质双向凝胶电泳技术的建立及其优化

目的优化人结肠癌Lovo细胞系的蛋白质样品制备方法,建立人结肠癌Lovo细胞系的双向凝胶电泳(2-DE)图谱.方法分别用磷酸盐缓冲液和等渗蔗糖溶液冲洗细胞,胰酶酶解后裂解和皿上直接裂解的方法提取所培养Lovo细胞的总蛋白质,利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析2-DE图谱.结果以等渗蔗糖缓冲液冲洗细胞并经皿上直接裂解的方法所提取Lovo细胞总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人结肠癌Lovo细胞系2-DE图谱.结论以等渗蔗糖溶液冲洗细胞结合皿上直接裂解是一种较好的细胞蛋白质双向电泳样品制备方法,初步建立了分辨率较高且重复性好的人结肠癌Lovo细胞系蛋白质双向凝胶电泳图谱.     

PC12细胞蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立

目的：建立PC12细胞的蛋白质组学研究的技术体系,全面展示PC12细胞的蛋白质表达谱。方法：提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Evolution分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）的鉴定。结果：成功构建出PC12细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出19种PC12细胞的蛋白质,分属于以下6类：分子伴侣及相关功能蛋白、细胞结构/骨架蛋白、代谢相关蛋白、凋亡相关蛋白、激素结合相关蛋白和神经内分泌相关蛋白。结论：PC12细胞样品的蛋白质样品双向电泳图谱重复性良好,初步建立了PC12细胞的蛋白质组学研究技术,证明以PC12细胞为模型的神经系统疾病蛋白质组学研究的可行性。     

HeLa细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立和优化HeLa细胞蛋白质组分析所需的样品处理方法和双向电泳技术.方法:用三种不同配方的裂解液提取HeLa细胞中的蛋白质,进行双向凝胶电泳,用Amersham ImageMaster VDS-CL型凝胶成像系统获取凝胶图像,以PDQuest(7.4.0)软件进行比较分析.结果:联合使用硫脲和尿素有利于蛋白质的提取,增加碱性蛋白点的检出数量;广谱蛋白酶抑制剂的使用可大大增加双向电泳可检出的蛋白点数,同时使可检出的碱性蛋白点明显增加.结论:本文建立了HeLa细胞双向电泳分析方法,提高了2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性,获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱,为其蛋白质组学进一步研究奠定了基础.     

大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术的初步建立

目的：初步建立大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：应用大鼠成年和胚胎18天胰腺组织提取的总蛋白，对以载体两性电解质pH梯度为第一向的双向电泳关键因素与环节，如样品处理、凝胶制备、电泳参数等进行一系列的优化。结果：获得了分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱。结论：通过对各种条件的优化，初步建立了双向电泳技术，为研究胚胎胰腺不同时期特异性蛋白的表达及分子标志打下基础。     

黏细菌总蛋白质组双向电泳条件的建立

目的 :建立可以对黏细菌蛋白质组进行阵列分离的双向电泳条件。方法 :以黏细菌模式菌株DK162 2为材料 ,不同方法制备DK162 2在营养性生长阶段的蛋白质组样品 ,双向电泳阵列菌体总蛋白。通过不同条件下电泳图谱的比较建立蛋白质组样品的制备方法和双向电泳的技术条件。结果 :两性离子去污剂CHAPS及还原剂的浓度是影响双向电泳图谱分辨力的重要因素 ;蛋白质组样品的处理必须在低温下快速完成 ,以避免蛋白降解。结论 :初步建立了黏细菌总蛋白质组的双向电泳条件 ,为在细胞水平分析该模式生物发育时期蛋白表达谱奠定了基础     

损伤与正常脊髓蛋白质组的差异分析

目的从整体水平探究损伤与正常脊髓在蛋白质组表达上的差异，并寻找两者间的差示蛋白。方法以横断损伤和正常大鼠脊髓为研究对象，应用三氯乙酸／丙酮法制备蛋白样品，经双向电泳和银染，分别获取大鼠损伤和正常脊髓的蛋白质组双向电泳银染图谱，通过图像扫描及图像分析，建立损伤与正常脊髓蛋白质组的匹配差示图谱，分析两者在蛋白质组表达上的变化。结果损伤脊髓蛋白质组图谱经图像分析后，可检测到746个蛋白点，正常脊髓蛋白质组图谱可检测到847个蛋白点；蛋白质组匹配差示图谱的分析发现，两者间存在411个差示蛋白，即：损伤脊髓蛋白质组中有155个蛋白点在正常脊髓蛋白质组中未找到相应的匹配蛋白点；同时，正常脊髓蛋白质组中也有256个蛋白点在损伤脊髓蛋白质组中未找到相应的匹配蛋白点。结论损伤与正常脊髓的蛋白质组存在明显差异。     

病理性瘢痕与正常皮肤的蛋白质组学研究

目的：利用蛋白质组学的研究方法,找出增生性瘢痕、瘢痕疙瘩与正常皮肤组织成纤维细胞的差异蛋白质,为防治病理性瘢痕提供新思路.方法：应用2-DE技术建立三种组织细胞的蛋白质图谱,分析后找到差异蛋白点,用质谱分析仪及数据库确定蛋白质的种类.结果：选择增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮肤表达的差异蛋白9个,鉴定出差异蛋白5个,分别为：磷脂酰胆碱结合蛋白、银屑病型脂肪酸结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型前胶原蛋白、Ⅰ型前胶原蛋白.结论：共找出增生性瘢痕、瘢痕疙瘩与正常皮肤间5种差异蛋白,为研究病理性瘢痕的发病机制提供了一种新方法,也为临床用药研究提供了新方向.     

PBMC参与乙肝自愈免疫反应的蛋白质组学分析

目的：通过对比分析乙肝血清标志物全阴者与乙肝自限性痊愈者外周血单个核细胞的蛋白质组表达谱,寻找参与乙肝病毒（HBV）免疫反应的关键蛋白质。方法：采用双向电泳技术结合生物信息学分析方法对乙肝血清标志物全阴者及乙肝自限性痊愈者PBMC进行比较蛋白质组学分析。结果：获得了3个有明显规律性变化的差异表达蛋白点,这三个蛋白点共同表现为在乙肝自限性痊愈者中表达量均高于对照组表达量2倍以上。结论：本研究发现的这三个差异表达蛋白质可能直接或间接参与了HBV免疫应答。     

脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱的建立及分析

目的:建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白质双向电泳图谱,观察脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质差异表达情况。方法:采用反复冻融法抽提血清蛋白质,以优化的双向电泳技术分离血清蛋白质,建立脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质双向电泳图谱,并采用二维电泳图谱专用软件对所得结果进行图谱分析。采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对两组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果:通过双向电泳,建立血清蛋白质双向电泳图谱,选取具有明显差异的蛋白点21个进行质谱鉴定,共鉴定出8种蛋白质。结论:通过蛋白质组技术快速建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白表达图谱及质谱分析,可为进一步研究其发病机制及治疗手段提供实验基础。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的：建立血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术。方法：对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果：建立了稳定的2-DE技术。结论：已建立的血清蛋白质2-DE技术，将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

曲古抑菌素A刺激肝癌细胞株HepG2的蛋白质组学分析

目的：通过对比分析曲古抑菌素A刺激肝癌细胞株HepG2 24h与对照组的蛋白质组表达谱,探讨参与曲古抑菌素A抗肿瘤作用的分子机制提供实验依据。方法：采用双向电泳技术结合生物信息学分析方法对曲古抑菌素A刺激肝癌细胞株HepG2 24h后及对照组的细胞全蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果：获得了7个有明显规律性变化的差异表达蛋白点,其中一个蛋白点表达量有所升高,6个差异蛋白点表现为明显下调趋势。结论：本研究发现的这些差异表达蛋白质可能直接或间接参与了曲古抑菌素A抗肿瘤的分子机制。     

肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳方法的建立和优化

目的建立和优化肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术,获取高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱。方法提取肺癌组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向,在上述过程中分别对蛋白提取、等电聚焦电泳和凝胶染色进行控制和优化,利用ImageMaster 2Dplatinum 6.0分析软件获得二维凝胶图像。结果实验重复3次,共获15幅二维凝胶图像,平均蛋白质点数为1 137±57;随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅图像中蛋白点进行匹配,匹配率为90.4%。结论优化肺癌组织蛋白质组2-DE技术可获得高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱,为开展肺癌组织蛋白质组学研究打下基础。     

酒精性肝损伤大鼠血清蛋白质组学的研究

通过对比分析酒精性肝损伤模型大鼠与正常对照组大鼠的血清蛋白质组表达谱,探讨参与酒精性肝损伤病理生理过程的分子机制。方法：采用双向电泳技术结合生物信息学分析方法对造模成功的酒精性肝损伤模型大鼠及正常对照组大鼠的血清全蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果：获得了11个有明显规律性变化的差异表达蛋白点,其中有7个蛋白点表达升高,4个差异蛋白点表现为明显下调趋势。结论：本研究发现的这些差异表达蛋白质可能直接或间接参与了酒精性肝损伤病理生理过程的分子机制。     

血清双向凝胶电泳体系的建立

目的:建立血清双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)技术体系.方法:用Proteoprep blue albumin depletion kit将血清中高峰度蛋白去除.预冷丙酮沉淀蛋白质后,加入样品溶解液充分溶解,进行等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elecrophoresis,SDS-PAGE),行硝酸银染色后,运用ImageMaster软件行初步分析.结果:通过调整,优化2-DE技术条件,建立了稳定的2-DE技术.结论:建立了相对稳定的人血清蛋白质2-DE技术,其稳定性、重复性好,为开展疾病蛋白质组学的研究奠定了基础.