医学分子生物学中的养生之道

针对医学院校大学生体质下降、心理健康水平低的现象,教师在讲授分子生物学知识的同时,结合中国传统养生文化进行讲解,让学生自己从中体悟健康的重要性。学生反映课堂内容生动而且丰富,在不知不觉中掌握了养生之道,并把它应用于生活和学习中,增进了自我管理健康的能力。     

人乳腺癌组织中Twist表达及意义

目的：探讨Twist在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌发生发展的关系。方法：收集本院2011～2012年确诊的乳腺癌患者切除的乳腺癌组织和癌旁组织,以RT-PCR和免疫组织化学法检测Twist表达水平。结果：Twist在乳腺癌组织中表达明显高于癌旁组织。结论：Twist在乳腺癌组织中的表达明显上调,可能参与了乳腺癌的侵袭转移和多药耐药等生物学行为。     

TSA对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及FHIT表达的影响

目的观察曲古抑菌素A（TSA）的体外抗人肝癌HepG2细胞作用及机制。方法取人肝癌HepG2细胞培养至对数生长期后随机分为TSA组、对照组、空白组,TSA组加入TSA至终浓度分别为125、250、500、1 000、2 000nmol/L,对照组加入等量二甲基亚砜（DMSO）,空白组只加培养基、无细胞,每组设6个复孔,作用24~72 h后MTT比色法测定HepG2细胞增殖抑制率（IR）,倒置显微镜和电镜观察HepG2细胞形态变化,TUNEL法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因表达,Western blot检测FHIT蛋白表达。结果与对照组相比,TSA组IR随TSA浓度增加和作用时间延长而增加（P〈0.05）,透射电镜下TSA组HepG2细胞出现凋亡早期改变;与对照组比较,TSA组细胞凋亡率升高,FHIT mRNA及蛋白表达增强（P均〈0.01）。结论 TSA体外能有效抑制肝癌细胞株HepG2生长并促进其凋亡,机制可能为上调FHIT表达。     

槲皮素对LPS延迟中性粒细胞自发性凋亡效应的抑制作用

目的：研究槲皮素对接受细菌脂多糖(LPS)刺激的中性粒细胞(PMN)自发性凋亡的影响，探讨槲皮素的抗炎作用机制。方法：以人外周血PMN为研究对象，选择光镜和流式细胞术检测细胞凋亡情况，对裂解的片段化DNA进行定量(二苯胺测定法)和定性(琼脂糖凝胶电泳)分析。结果：槲皮素(1～100μmol／L)对PMN的自发性凋亡率并无影响，但却能部分恢复由LFS所延迟的PMN自发性凋亡进程。当槲皮素的浓度为40μmol／L时，其恢复作用达到最大。结论：槲皮素对LPS延迟PMN自发性凋亡的效应产生了抑制作用，减轻了因预激因子活化PMN而加重的炎症反应，部分揭示了槲皮素的抗炎作用机制。     

槲皮素对LPS诱导中性粒细胞活性化效应的抑制作用

目的研究槲皮素(Quercetin，Que)对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的中性粒细胞(Polymorphonuclear，PMN)活化效应的影响。方法运用免疫荧光法和流式细胞术，对接受1h LPS刺激的PMN表面黏附分子(CD62L，CD11b／CD18)的表达进行测定，同时应用MTT法对不同状态下的PMN活性进行测定。结果Que对LPS诱导的中性粒细胞活化效应有明显抑制作用，表现为抑制细胞表面黏附分子CD62L的表达和促进CD11b／CD18的表达，同时Que对LPS增加细胞活性的效应有抑制作用。结论槲皮素通过对抗LPS对PMN黏附分子CD62L，CD11b／CD18的表达的影响，抑制LPS诱导的中性粒细胞活化效应，从而阻止PMN对血管内皮细胞的黏附，减少炎症细胞向炎症局灶的浸润，这可能是槲皮素发挥抗炎作用的一个重要机制。     

CCKB受体诱发的小鼠神经元蛋白质磷酸化的研究

目的：从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度初步勾勒出CCK_B型受体介导的胞内信号转导途径。方法:培养的小鼠大脑皮质神经元分为实验组、对照组和受体拮抗剂组，在无磷培养基加入 ［32P］-NaH₂PO₄标记细胞中的磷蛋白后，刺激组给予CCK₈（10^-7 mol/L），对照组加入等量的无磷培养基，受体拮抗剂组在分别加入CCK_A型、CCK_B型受体拮抗剂L364 718、L365 260以及L364 718＋L365 260，浓度均为10^-8 mol/L，孵育10 min后，再加入10^-7 mol/L CCK₈，37 ℃作用60 min，液氮中终止磷酸化反应。裂解细胞提取蛋白质，双向电泳分离，放射自显影7d后，获得磷酸化蛋白的放射自显影双向电泳图谱。采用PDQuest 2D分析软件对图谱进行差异分析，并在Swiss-Prot蛋白质数据库和自建磷蛋白数据库中查询定性。结果:CCK₈作用60 min后，小鼠神经元CCK₈信号转导相关磷酸化蛋白有：多种蛋白激酶、细胞信号分子、生长因子受体、转录因子等。加入L364 718后，神经元中PKCδ、P55G等的磷酸化水平降低，加入L365 260后， PKCα、PKGβ、OGFR、EGFR等的磷酸化水平呈现不同程度的降低，表明皮质神经元中CCK_B受体介导的信号转导更复杂。结论:CCK_A型、GGK_B型受体均可介导CCK₈在神经元的信号转导，但CCK_B型受体可能发挥了更重要的作用，其介导的信号途径可能包括：肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径、JNK途径、PI3K-PKB途径和cGMP-PKG途径。     

提高医学分子生物学实验课教学质量的体会

随着生命科学迅速发展,医学分子生物学作为一门基础学科,越来越受到教师和学生的普遍重视,在国内许多院校的研究生和本科生课程中均列为必修课或选修课.     

人FHIT基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的：建立检测人脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad,FHIT）基因的荧光定量RT-PCR方法。方法：根据GenBank中人FHIT基因序列,在保守区设计合成一对特异引物,将PCR扩增得到的FHIT基因克隆至PMD18-T载体上,构建的重组质粒标准品倍比稀释后运用SYBR Green I染料法绘制标准曲线,并进行融解曲线分析。结果：FHIT基因的标准品稀释度在1×107～1×103copies/μl范围内具有良好的线性关系,Ct值线性范围为14.28～28.36,相关系数为0.998,融解曲线分析表明,产物为特异的单峰,Tm为92.3±0.1℃。结论：建立了人FHIT基因实时荧光定量RT-PCR方法,为在mRNA水平对人FHIT的定量分析奠定了基础。     

槲皮素抑制人膀胱癌细胞BIU-87生长的作用研究

目的：观察槲皮素对膀胱癌细胞株生长的抑制作用。方法：运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法,对比膀胱癌细胞在加入不同浓度槲皮素作用后的生长情况和细胞活性,探讨槲皮素对膀胱癌细胞生长的作用。结果：加入不同浓度槲皮素作用一定时间后,膀胱癌细胞的生长受到不同程度的抑制,且具有浓度和时间依赖性。结论：实验证明槲皮素有抑制膀胱癌细胞生长的作用,具有浓度和时间的依赖性。