塞来昔布对人甲状腺髓样癌TT细胞中VEGF和MMP-9表达的抑制作用及其机制

目的：探讨环氧化酶2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人甲状腺髓样癌TT细胞中血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA表达的影响,探讨塞来昔布抗肿瘤的作用机制。方法：人甲状腺髓样癌TT细胞株分为不同浓度塞来昔布组和对照组,各塞来昔布组分别给予不同浓度的塞来昔布（20、40和80 μmol?L-1）,对照组给予F12K培养液,作用72 h后,采用RT-PCR方法检测不同浓度塞来昔布作用于TT细胞后VEGF mRNA和MMP-9 mRNA表达的变化。结果： 20、40和80 μmol?L-1的塞来昔布对甲状腺癌TT细胞VEGF mRNA和MMP-9 mRNA的表达均有抑制作用。40和80 μmol?L-1塞来昔布组TT细胞中VEGF/GAPDH及MMP-9/GAPDH值与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,结论： 塞来昔布浓度高于40 μmol?L-1时可明显降低VEGF mRNA和MMP-9 mRNA的分泌,可能对肿瘤生长有一定抑制作用。     

唾液基质金属蛋白酶2、9与儿童龋病相关性的初步研究

目的：比较健康儿童和不同龋损程度儿童唾液中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9含量差异以及重度龋儿童治疗前后唾液中MMP 2、MMP-9的蛋白水平变化,探讨其与儿童龋病发生、发展的相关性。方法：纳入368名3~5岁儿童,根据牙齿龋坏程度分为重度龋组112人、轻度龋组98人和无龋组158人,重度龋组患儿中完成全面的龋齿治疗并随访取样的83人纳入治疗组,测定唾液中MMP-2,MMP-9水平。使用SPSS 13.0软件分析数据,重度龋组、轻度龋组与无龋组之间的比较采用SNK-q法,重度龋组与治疗组之间的比较采用配对t检验。结果：重度龋组、轻度龋组、无龋组和治疗组的年龄及性别构成差异无统计学意义。重度龋组唾液中的MMP-2含量［(141.3±32.5) μg/L］高于轻度龋组［(107.5±21.3)μg/L］和无龋组［(102.8±18.5)μg/L］（P均＜0.05）,轻度龋组与无龋组间差异无统计学意义（P＞0.05）。对纳入治疗组的83人进行分析,唾液中MMP 2含量［(120.1±24.8)μg/L］低于治疗前［(144.6±30.3)μg/L］（P＜0.05）,但仍高于无龋组（P＜0.05）。重度龋组［(445.8±68.1)μg/L］和轻度龋组［(428.6±59.2)μg/L］唾液MMP 9含量高于无龋组［(385.4±60.6)μg/L］（P均＜0.05）,重度龋组与轻度龋组间差异无统计学意义（P＞0.05）。对纳入治疗组的83人进行分析,唾液中MMP 9含量［(432.2±64.7)μg/L］与治疗前［(440.1±75.5)μg/L］没有明显变化（P＞0.05）。结论：重度龋患儿唾液中MMP-2、MMP-9含量显著高于无龋儿童,即使经过治疗仍高于健康儿童,提示唾液中的MMP-2、MMP-9可能是儿童患龋的相关影响因素。     

塞来昔布抑制人胃癌细胞MGC803细胞增殖及其分子机制

目的：研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞MGC803生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法：体外培养人胃癌细胞MGC803,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算IC50值;RT-PCR法检COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响;结果：MTT结果显示：相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为：（98.67±11.755）μmol/L、（67.506±6.646）μmol/L、（57.662±15.809）μmol/L;RT-PCR结果显示：人胃癌细胞MGC803正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为：0.918±0.031,0.301±0.002（t=16.037,P=0.000）;MMP-9mRNA灰度值分别为：0.928±0.041,0.360±0.012（t=10.487,P=0.003）;结论：塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

冠心病患者血清sCD40L和MMP-9的变化及相关性

目的：观察不同类型冠心病患者中可溶性CD40配体（sCD40L）水平的变化及其与金属蛋白酶-9(MMP-9)之间的关系, 进一步探讨急性冠脉综合征临床识别和预测的炎症指标。方法：采用酶联免疫吸附法测定79例冠心病患者血清sCD40L,MMP-9的浓度。结果：急性冠脉综合征患者sCD40L水平［在不稳定心绞痛(UAP)和急性心肌梗死组(AMI)分别为(1.96± 0.84) ng/ml，(2.23 ±0.99 )ng/ml］显著高于稳定性冠心病组(1.20±0.76)ng/ml (P<0.05)，而在UAP和AMI组间比较差异无显著性（P>0.05），sCD40L水平与MMP-9呈显著正相关(r=0.401, P<0.01)。sCD40L水平与甘油三酯呈正相关(r=0.254, P=0.039)，与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关(r=-0.234, P=0.031)。结论：急性冠脉综合征患者外周血清sCD40L和MMP-9水平升高，可能与急性冠脉综合征的发生有关，可能是动脉粥样硬化不稳定的标志，CD40L可能通过促使MMP-9的表达而促发急性冠脉综合征。     

荧光探针包被法测定血浆硫化氢浓度

目的：在荧光探针的基础上建立一种简易的方法来检测血液中的硫化氢（hydrogen sulfide, H2S）。方法：将荧光探针包被到96孔板上,冷藏待用。用饱和硫酸铵沉淀血浆或血清中的蛋白,离心后所得的上清液分别加到含包被探针和不含包被探针的微孔中, 37 ℃避光孵育2 h,然后使用分光光度计（波长λEx/λEm 340/445 nm）读取微孔的荧光值,计算包被有探针和相应无探针微孔的荧光差值,根据标准曲线浓度计算出血液中H2S的浓度。结果：灵敏度和特异性测试表明,此方法检测灵敏度下限可以达到0.3 μmol/L,血液中其他成分甚至其他含硫活性成分和含硫氨基酸等对此方法影响甚微。应用此方法检测188名健康成年志愿者的血清H2S浓度［（12.1±3.5） μmol/L,95%CI: 4.6~19.8 μmol/L］,所得结果呈正态分布（单样本K-S检验, P>0.1）。对30名高血压患者和22名相匹配的健康志愿者血清H2S浓度检测表明,前者H2S浓度低于后者［(3.52±1.49) μmol/L vs. (10.23±2.76) μmol/L］,差异具有统计学意义(配对样本t检验, t=9.937,P<0.001)。检测雄性Wistar大鼠血清［（19.66±2.32） μmol/L］和血浆［（18.67±2.07） μmol/L］以及动脉血［（19.34±0.51） μmol/L］和静脉血［（18.99±0.50） μmol/L］中的H2S浓度,结果表明雄性Wistar大鼠血清和血浆以及动脉血和静脉血两者差异都没有统计学意义(重复测量的方差分析,P=0.38)。样品的重复性检测稳定性较好(两因素方差分析,P>0.05)。结论：此方法对检测血液中的H2S具有简单、高灵敏度、特异性和可重复性等优点,出结果快,可适用于大样本的高通量检测,满足实验室基础研究及临床一次性大样本H2S浓度检测的需求。     

白介素7在结直肠癌患者外周血和癌组织中的表达及其临床意义

目的: 探讨白介素7（IL-7）在结直肠癌患者外周血及癌组织中的表达及其临床意义。方法: 采用ELISA法检测20例溃疡性结肠炎患者和27例结直肠癌患者外周血IL-7含量,并用13例健康体检者血样作为对照;应用免疫组化法分别检测20例溃疡性结肠炎患者活检肠黏膜标本、27例结直肠癌患者癌组织及相应癌旁组织IL-7的表达。结果： 结直肠癌患者外周血IL-7浓度为（2.98±0.93）ng/L,明显低于结肠炎患者［（4.72±0.69）ng/L,P＜0.01］和健康体检组［（5.64±0.24）ng/L,P＜0.01］;结直肠癌患者14例（51.85%）癌组织IL-7表达呈强阳性,相应癌旁组织只有5例（18.52%）呈弱阳性;而结肠炎组肠黏膜组织中亦只有5例（25.00%）呈弱阳性。结直肠癌组织中IL-7的表达率明显高于癌旁组织（χ2=8.333,P<0.05）和结肠炎黏膜组织（χ2=4.454,P<0.05）。结论： 外周血及肠道组织中IL-7的检测可以作为临床肠道疾病性质的辅助诊断指标。     

塞来昔布对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的增殖抑制作用

目的： 通过研究选择性环氯化酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合阿霉素(ADM)对乳腺癌MCF-7/ADM细胞株生长的作用,探讨塞来昔布的抗肿瘤作用。方法：MCF-7/ADM细胞加入不同浓度等倍稀释的ADM（0.05、0.10、0.20、0.40、0.80和1.60 mg/L）为对照组,MCF-7/ADM细胞加入无细胞的完全培养基为阴性对照组,在对照组的基础上联合应用10、20 μmol/L塞来昔布为实验组,各组细胞于24、48、72 h后采用CCK-8检测细胞生长抑制率。MCF-7/ADM细胞单加0.05 mg?L-1ADM及联合塞来昔布(10、20 μmol/L)处理后3 h收集细胞,采用流式细胞术检测细胞内ADM水平。结果：不同浓度ADM单药及联合塞来昔布（10和20 μmol/L）　作用于MCF-7/ADM 24、48和72 h后细胞生长受到抑制,实验组不同时间细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且20 μmol/L塞来昔布实验组细胞生长抑制率高于10 μmol?L-1塞来昔布实验组,差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组24、48和72 h的细胞未见明显变化,但实验组细胞作用48和72 h后出现细胞改变及死亡,呈塞来昔布剂量依赖性。与对照组比较,塞来昔布实验组（10和20 μmol/L）细胞内ADM浓度升高（P<0.05）;20 μmol/L塞来昔布实验组细胞内ADM浓度高于 10 μmol/L塞来昔布实验组(P<0.05)。结论：选择性COX-2抑制剂塞来昔布联合ADM可有效逆转乳腺癌ADM细胞株耐药。
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冠状动脉粥样硬化斑块形态及介入治疗与MMP-9的关系

目的探讨急性冠脉综合征（ACS）及稳定型心绞痛（SA）患者外周血基质金属蛋白酶-9(MMP-9）、巨噬细胞集落刺激因子(M-SCF)、C 反应蛋白（CRP)的水平与斑块形态特征的关系以及介入治疗后的变化。方法62例患者分为ACS组35例,SA组27例。分别采用速率散射光比浊法和酶联免疫吸附法检测所有患者介入治疗前后外周血MMP-9、M-SCF、CRP的浓度。根据冠脉造影斑块形态特征将冠脉斑块分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。根据超声特点将颈动脉斑块分为易损型和稳定型,比较ACS、SA患者斑块的型别及介入治疗前后MMP-9、M-SCF、CRP水平的变化。结果① 介入治疗前ACS组患者MMP-9、M-SCF、CRP水平高于SA组（P＜0.05);②ACS和SA患者介入治疗前后MMP-9、M-SCF、CRP水平差异有统计学意义（P＜0.05);③ACS组患者冠脉斑块主要为Ⅱ型,颈动脉斑块主要为易损斑块,SA患者则冠脉斑块主要为Ⅰ、Ⅲ型,颈动脉斑块主要为稳定斑块;④不同斑块类型MMP-9、M-SCF、CRP浓度不同,冠脉斑块Ⅱ型较Ⅰ、Ⅲ型显著升高（P＜0.05),颈动脉斑块中易损斑块较稳定斑块显著升高（P＜0.05)。结论外周血MMP-9、M-SCF、CRP的水平和斑块特征与斑块的稳定性有关,对于冠脉事件有一定的预示作用。     

COX-2抑制剂对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的 :探讨环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其作用机制。方法:不同浓度的塞来昔布处理HEL细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞迁移率;RT-PCR检测COX-2及JAK2 mRNA水平;Western blot检测COX-2及p-JAK2蛋白表达。结果:塞来昔布能够时间和剂量依赖性抑制HEL细胞增殖,不同浓度(25、75、125μmol/L)的塞来昔布在48 h时对细胞生长抑制率分别为(9.96±0.82)%、(18.46±2.01)%、(21.36±2.48)%(P<0.05);Hoechst33342凋亡细胞染色显示125μmol/L塞来昔布处理HEL细胞后,凋亡细胞明显增多;细胞迁移实验结果显示75μmol/L塞来昔布处理细胞24 h后漏出细胞为(22.13±7.51)个,明显低于对照组(77.89±6.94)个,P<0.05;RT-PCR结果显示不同浓度塞来昔布处理HEL细胞48 h后COX-2 mRNA呈剂量依赖性减低,而对JAK2 m RNA无明显影响;Western blot结果显示塞来昔布处理HEL细胞COX-2蛋白表达明显减低(P<0.05),而对p-JAK2无明显影响。结论:塞来昔布能够抑制HEL细胞增殖,可能与抑制COX-2表达有关,而对JAK2信号通路无明显影响。     

急性冠脉综合症患者LP-PLA2与MMP-9血浆水平及临床意义

摘要：目的 探索脂蛋白相关磷脂酶A2（LP-PLA2）与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的血浆水平在预测急性冠脉综合征高危人群的临床价值,以及冠状动脉支架术对其血浆水平的影响。方法 研究对象包括对照组：即经冠脉造影证实无冠脉狭窄者28例、急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome ,ACS) 患者27例、稳定型心绞痛(stable angina pectoris,SAP) 患者28例。所有研究对象入院时抽取血液标本,肝素抗凝后离心分离血浆,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血浆中的LP-PLA2和MMP-9的表达水平,ACS患者除入院时采集血液标本外,还于冠脉介入治疗术后1月再采集血液标本,肝素抗凝后离心分离血浆,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血浆中的LP-PLA2和MMP-9的表达水平。结果 1、急性冠脉综合征组患者LP-PLA2血浆水平高于稳定性心绞痛组（706.00±149.91ng/ml vs 427.75±44.58ng/ml,P<0.001）和健康对照组（706.00±149.91ng/ml vs 267.69±92.67ng/ml,P<0.001）,同样急性冠脉综合征组患者MMP-9血浆水平高于稳定性心绞痛组（7.06±6.22ng/ml vs 2.45±1.23ng/ml,P<0.001）和健康对照组（7.06±6.22ng/ml vs 1.84±0.46ng/ml,P<0.001）;2、在ACS组中,冠脉支架术后1月患者LP-PLA2和MMP-9血浆水平较术前明显降低（706.00±149.91ng/ml vs 520.00±30.36 ng/ml;7.06±6.22ng/ml vs 2.52±1.54 ng/ml,均P<0.001）;3、ACS患者组中血浆LP-PLA2与MMP-9水平呈正相关性（r=0.018,F=6.032,P<0.05）。结论 （1）冠心病患者尤其是急性冠脉综合征患者血浆LP-PLA2和MMP-9水平升高,提示LP-PLA2和MMP-9作为炎症因子与冠心病的发生发展相关;（2）急性冠脉综合征患者血浆中的LP-PLA2和MMP-9水平有显著相关,提示二者可以联合作为ACS的生物标记物;（3）ACS患者PCI术后LP-PLA2和MMP-9下降,提示ACS患者经积极冠脉PCI治疗后,冠脉病变趋于稳定。     

IL-10对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞LOX-1表达的影响

目的:检测急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者外周血单核细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(1ectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)的表达水平,以及抗炎因子白介素-10(intedeuidn.10,IL-10)对其表达的影响.方法:收集28例健康体检者和28例ACS患者,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)检测血清中IL-10和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α水平.分离外周血单核细胞进行培养,加或不加IL-10(20μg/L)进行体外干预,检测单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达的变化.结果:与健康对照组相比,ACS患者血清中IL-10和TNF-水平明显升高(P＜0.01).ACS患者外周血单核细胞LOX-1蛋白和mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01),IL-10(20G/L,3 h)可明显下调单核细胞LOX-1的蛋白和mRNA表达(P＜0.01).结论:抗炎因子IL-10可能通过抑制ACS患者外周血单核细胞LOX-1的表达而起到稳定斑块的作用,这可能是IL-10抗动脉粥样硬化的又一新机制.     

sEHi对急性冠脉综合征患者单个核细胞脂肪酸合酶表达及炎症反应的影响

目的 探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi)对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单个核细胞脂肪酸合酶(FASN)表达的影响.方法 入选ACS患者35例为ACS组,体检健康者30名为对照组.于入院后24h内分别测定血脂谱、空腹血糖、心肌酶谱和超敏C反应蛋白(hs-CRP).同时分离培养外周血单个核细胞,以不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(t-AUCB)干预,用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法分别测定FASN及IL-6的mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)ACS组血清hs-CRP浓度为(5.6±4.1)mg/L,与对照组(1.3±0.9 )mg/L比较显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,ACS组单个核细胞内FASN、IL-6 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(相对表达量:FASN mRNA:1比1.709±0.272,FASN蛋白:0.407±0.065比1.298±0.087;IL-6mRNA:1比2.302±0.200,IL-6蛋白:0.715±0.058比1.146±0.083,P＜0.05),且FASN、IL-6 mRNA表达量分别与血清hs-CRP浓度呈正相关(r=0.714,P＜0.01;r=0.685,P＜0.01).(2) t-AUCB可呈剂量依赖性抑制ACS组单个核细胞的FASN和IL-6 mRNA与蛋白表达,t-AUCB干预组与空白对照组(t-AUCB)比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05)(其中t-AUCB 0、10、50、100 μmol/L组中,FASNmRNA相对表达量分别为:1,0.813±0.038,0.564±0.100,0.293±0.043;FASN分别为:0.957±0.280,0.935±0.275,0.855±0.253,0.685±0.206.结论 ACS患者体内有较高的炎症水平,其外周血单个核细胞中FASN的表达水平与体内炎症反应密切相关,t-AUCB抑制单个核细胞内的FASN表达及炎症反应,可能起到稳定斑块的作用.     

心房肌基质金属蛋白酶-9和组织金属蛋白酶抑制因子-1表达改变对房颤心房重构机制的研究

目的　探讨心房肌基质金属蛋白酶- 9 (MMP -9)和组织金属蛋白酶抑制因子- 1 (TIMP1)表达水平的改变与慢性房颤心房结构重构的相关关系。方法　选取进行人工瓣膜置换术的风湿性心脏病房颤24例为研究组,风湿性心脏病窦性心律12例为对照组。上述患者术前均进行经胸超声心动图检查,留取相关资料。于手术时取左心耳心肌标本,采用RT -PCR方法检测心房肌中本研究检测慢性房颤患者心房肌中MMP- 9和TIMP- 1的mRNA水平,采用免疫组织化学方法对MMP- 9和TIMP- 1蛋白质表达半定量分析。结果　与对照组比较,风心房颤组左心房内径和右心房内径均显著扩大(P<0 .05~0 .001),心肌中MMP 9mRNA表达水平较对照组升高30 .9% (P<0 .05 );TIMP 1mRNA水平较对照组下调33 .3% (P<0 .05);左心耳心肌组织中MMP 9蛋白质水平增高100% (P<0. 001),TIMP -1蛋白质水平减少36% (P<0 .01)。左心耳心肌组织MMP- 9mRNA水平与房颤持续时间、左心房内径呈显著正相关(P<0. 05~0 .001)。结论　房颤时心房肌组织MMP 9 /TIMP- 1系统相互间的作用失衡对心房壁变薄、心房扩大和几何形状改变具有重要作用,其机制是细胞外基质过度降解。     

异丙肾上腺素对高血压患者单核细胞分泌白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的影响

目的:观察异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)对高血压患者单核细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha ,TNF-α)及白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)的影响.方法:选取17例健康志愿者和6例原发性高血压病患者(Ⅰ期)的静脉血样,分离得到单核细胞,用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞后,检测在有或无ISO存在条件下细胞上清液中TNF-α和IL-6含量.结果:(1)在LPS刺激下,高血压组单核细胞分泌TNF-α量较健康对照组显著增加[(1 897±393) ng/L vs. (975±473) ng/L, P＜0.01],但IL-6的分泌在两组间的差异无统计学意义[(5 532±796) ng/L vs. (6 092±2 249) ng/L];(2)在健康对照组和高血压组中,ISO能剂量依赖性抑制LPS引起的单核细胞TNF-α分泌,但对IL-6的分泌则无显著影响;(3)在Ⅰ期高血压患者的单核细胞中,ISO对TNF-α产生的抑制作用与健康对照组相比,差异无统计学意义(P》0.05),给予β肾上腺素受体拮抗剂普萘洛尔可拮抗这种效应.结论:β肾上腺素受体激动可抑制LPS引起单核细胞分泌TNF-α,而对IL-6的分泌无影响,这种抑制效应在Ⅰ期高血压病患者与健康志愿者之间差异无统计学意义.     

缺氧状态下人颞下颌关节滑膜成纤维细胞环氧合酶2的表达及意义

目的研究缺氧对人颞下颌关节滑膜成纤维细胞环氧合酶2(COX2)表达的影响,并探讨其在颞下颌关节紊乱病(TMD)中的生物学作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和Western印迹检测缺氧不同时间段滑膜成纤维细胞COX2基因与蛋白质表达水平。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)以及明胶酶谱法分别测定缺氧组、缺氧与COX2特异性抑制剂塞来昔布二者联合作用组前列腺素E2(PGE2),金属基质蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)分泌量的变化,以常氧组为对照。结果(1)RTPCR测定细胞缺氧4、8hCOX2mRNA分别为1.51±0.34和1.39±0.57,与常氧组0.65±0.24和0.71±0.15比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。(2)Western印迹测定细胞COX2蛋白表达,缺氧6h为0.29±0.06,12h为0.51±0.09,24h为0.68±0.11,而常氧组检测不出COX2蛋白(均P<0.01),表明缺氧条件下,细胞COX2蛋白表达呈时间依赖性增加。(3)ELISA测定细胞缺氧12h,释放的PGE2(7.6ng/ml±0.8ng/ml)显著高于常氧组(2.5ng/ml±0.4ng/ml,P<0.01);联合药物处理组(4.3ng/ml±0.4ng/ml)也显著低于缺氧组(P<0.05),表明细胞PGE2释放受抑制。(4)明胶酶谱法测定细胞缺氧12h,分泌的MMP2、MMP9高于常氧组,但在药物联合作用下,分泌能力减弱。结论组织缺氧是导致TMD的一个重要因素;缺氧状况下,人滑膜成纤维细胞可能通过增加COX2的表达来影响缺氧所致颞下颌关节病变进程。     

基质金属蛋白酶9在粒细胞集落刺激因子诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导的造血干/祖细胞(HSPC)动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法测定了健康供者稳态及G-CSF动员第5天骨髓、外周血MMP-9蛋白及mRNA水平的变化,比较富含MMP-9的细胞系HT1080无血清培养上清孵育前后CD34+细胞表面CXCR4表达及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)的迁移能力的变化,将rhMMP-9与rhSDF-1孵育后应用Western印迹检测MMP-9对SDF-1的降解作用,观察注射MMP-9化学抑制剂(MPI)ο-邻二氮杂菲对G-CSF动员BALB/c小鼠外周血成熟白细胞计数(WBC)和干/祖细胞的数量的影响。结果G-CSF动员第5天,骨髓上清MMP-9浓度增加了6.6倍(P<0.01),骨髓组织表达MMP-9的中性粒细胞明显增多。动员后骨髓单个核细胞MMP-9mRNA表达水平上调(P<0.05)。rhSDF-1与rhMMP-9短期孵育后可被后者降解。HT1080无血清培养上清液能够上调脐血和动员外周血富集的CD34+细胞的CXCR4表达水平(均P<0.05)及增强CD34+细胞向SDF-1浓度梯度迁移能力(均P<0.05),该效应可被MPI阻断(P<0.05)。与G-CSF共注射MPI后BALB/c小鼠外周血成熟WBC(12.3×106/L±1.2×106/L)和造血祖细胞集落形成单位(69U/2×105MNC±3U/2×105MNC)数量显著低于对照组(P<0.05)。结论MMP-9可能通过裂解SDF-1、上调CD34+细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4的表达及增强CD34+细胞迁移能力在G-CSF介导的HSPC动员中发挥重要作用。     

冠心病患者外周血中EMMPRIN 表达量与斑块 特征、基质金属蛋白酶含量的关系研究

目的 研究冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者外周血中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 （EMMPRIN）表达量与斑块特征、基质金属蛋白酶（MMP）含量的关系。方法 选取2013 年6 月-2015 年 10 月诊断为稳定型心绞痛（SAP）的69 例患者和急性冠状动脉综合征（ACS）的47 例患者分别纳入SAP 组 和ACS 组,选择同期体检的57 例健康志愿者纳入对照组,采用冠状动脉成像检查判断冠状动脉粥样斑块的 性质,采集外周血并测定EMMPRIN 的表达量以及MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14 的含 量。结果 SAP 组和ACS 组外周血单个核细胞表面EMMPRIN 的荧光强度以及血清中MMP-1、MMP-2、 MMP-3、MMP-9、MMP-14 的含量高于对照组,SAP 组外周血单个核细胞表面EMMPRIN 的荧光强度以 及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14 的含量高于ACS 组;SAP 组和ACS 组患者斑 块性质越不稳定,外周血单个核细胞表面EMMPRIN 的荧光强度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、 MMP-9、MMP-14 的含量越高;外周血单个核细胞表面EMMPRIN 的荧光强度与血清中MMP-1、MMP- 2、MMP-3、MMP-9、MMP-14 的含量呈正相关。结论 冠心病患者外周血中EMMPRIN 表达量上调与粥 样斑块性质不稳定、MMPs 含量增加有关。     

β内啡肽对脑出血患者免疫系统功能的影响

目的　探讨脑出血患者免疫系统功能的变化及内源性 β内啡肽与疾病的关系。 方法　应用放射免疫分析法检测 2 8例脑出血患者及 5 6例对照组 (脑缺血患者及正常人群 )外周血 β内啡肽含量 ,用RT PCR半定量分析方法检测了外周血单个核细胞白细胞介素 (IL) 1β、IL 2、IL 8和一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达 ;β内啡肽对体外培养的脑出血患者外周血单个核细胞的IL 1β、IL 2、IL 8和iNOS表达的影响。结果　脑出血急性期 β内啡肽含量为 115ng/L± 6 8ng/L ,正常对照组为 32 1ng/L± 6 2ng/L (P <0 0 1) ,脑缺血对照组为 2 6 4ng/L± 16 3ng/L(P <0 .0 5 )。β内啡肽可增强体外培养的脑出血患者外周血单个核细胞IL 1β、IL 2、IL 8和iNOS的表达 ,β内啡肽作用峰值的浓度为 10 -8～ 10 -11g/L ;β内啡肽的增强作用可被受体拮抗剂纳络酮阻断。 结论　脑出血患者内源性 β内啡肽水平呈持续低下状态 ;免疫系统功能变化为先升后降 ,功能低下呈持续状态 ;外源性 β内啡肽可增强脑出血患者外周血单个核细胞IL 1β、IL 2、IL 8和iNOS的表达 ,β内啡肽受体拮抗剂纳络酮可阻断 β内啡肽的正向免疫调节作用。     

Biochemical pathways in the antiatherosclerotic effect of berberine

Background This study investigated the inhibitory effect of berberine （BBR） on lipopolysaccharide （LPS） induced cyclooxygenase-2 （COX-2） expression via the mitogen activated protein kinase （MAPK） signalling cascade pathways in human peripheral blood monocytes （PBMC）.
Methods PBMC from whole blood were isolated and cultured for up to 24 hours after division into 5 groups treated with LPS, LPS＋BBR 25 μmol/L, LPS＋BBR 50 μmol/L or LPS＋BBR 100 μmol/L and untreated. Monocytes were extracted for RT-PCR and Western blot analyses to examine COX-2 mRNA and protein activated expression of p38 mitogen activated protein kinase （p38MAPK）, Jun N-terminal kinase （JNK） and extracellular regulated kinases 1/2 （ERK1/2） signalling pathways.
Results COX-2 mRNA and protein expression decreased to a minimum at 12 hours after BBR treatment （P 〈0.05）. With the increasing concentration of BBR treatment, the COX-2 expression decreased progressively （P 〈0.01）. With BBR treatment for 6, 12 or 24 hours at three doses, ERK1/2 protein expression was significantly inhibited. For the JNK pathway, only with the treatment of BBR at the concentration of 100 μmol/L was JNK protein expression inhibited compared with the LPS stimulation group （P 〈0.01）. Irrespective of the BBR concentration, no difference was shown between the BBR group and the LPS group for p38MAPK protein expression. Human monocytes COX-2 mRNA, by RT-PCR, and protein expression, by Western blot analysis, were inhibited when incubated with PD98059, SP600125 and SB203580 （P 〈0.05）.
Conclusions Berberine inhibits COX-2 expression via the ERK1/2 signalling pathway and, possibly, at a high dosage via the JNK pathway. P38MAPK may have no relationship with the effect of BBR in PBMC. Berberine inhibited COX-2 mRNA and protein expression in a dose dependent manner and suppressed COX-2 expression to a minimal level after 12 hours of berberine treatment.     

RIP1-RIP3-MLKL信号通路在急性冠状动脉综合征病人外周血单核细胞中的表达

目的研究急性冠状动脉综合征(ACS)病人外周血单核细胞(PBMCs)上刺激受体相互作用蛋白1(RIP1)-RIP3-混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL)信号通路的表达变化，并分析其可能机制。方法选取初诊为ACS病人60例，其中不稳定型心绞痛(UAP)病人31例，急性心肌梗死(AMI)病人20例，对照组选取同期健康体检者19名。采集所有受试者外周静脉血，分别提取血浆和外周血单核细胞(PBMCs)，酶联免疫吸附实验(ELISA)和比浊法分别检测血浆中白细胞介素(IL)-1和IL-18、MLKL的水平，运用Real Time- PCR检测MLKL的mRNA表达，免疫印迹法检测PBMCs中RIP1、RIP3和MLKL的蛋白表达。结果3组受试者血浆IL-1、IL-18含量和MLKL含量差异均有统计学意义(P < 0.01)，PBMCs中RIP1和RIP3蛋白表达增加(P < 0.05)，MLKL的mRNA和蛋白表达亦增加(P < 0.05)。与UAP组比较，AMI组病人外周血浆中IL-1、IL-18和MLKL进一步升高，RIP1和RIP3的蛋白表达的进一步增加(P < 0.05)，MLKL的mRNA和蛋白表达增高。结论UAP和AMI病人体内存在不同程度的炎症活化，RIP1-RIP3-MLKL信号通路在PBMCs中的表达量随病情的严重程度逐渐增加，提示RIP1-RIP3-MLKL信号通路可能在ACS的不同类型发病中起重要作用。