白三烯D4体外诱导小胶质细胞激活的作用

目的:观察白三烯D4(LTD4)激活小胶质细胞株BV2细胞的作用,探讨介导BV2细胞激活的半胱氨酰白三烯受体(CysLT受体)亚型。方法:以Western blotting和免疫组化鉴定BV2细胞上CysLT受体的表达;以LTD4及CysLT受体拮抗剂处理BV2细胞后,采用MTT还原法检测细胞活性,微珠示踪法(以流式细胞仪检测)观察细胞吞噬的变化,RT-PCR检测炎症因子IL-6 mRNA的表达变化。结果:LTD4不影响BV2细胞增殖,但随着LTD4浓度增高可增强细胞吞噬、增加IL-6mRNA的表达,100 nmol/L LTD4使细胞吞噬增高为对照的1.4倍(P<0.001),IL-6 mRNA的表达增高为对照的2倍(P<0.01);LTD4诱导BV2细胞上调表达IL-6 mRNA可被CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT1/CysLT2非选择性拮抗剂BAY u9773抑制,而CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379对此无明显影响;HAMI 3379和BAY u9773(100 nmol/L)能进一步增强LTD4诱导的BV2细胞吞噬。结论:体外LTD4可激活BV2细胞,LTD4诱导细胞IL-6 mRNA上调表达由CysLT1受体介导,LTD4诱导的细胞吞噬增强受CysLT2受体负性调节。     

紫铆因抑制脂多糖诱导小胶质细胞炎性反应的作用机制研究

目的 探讨紫铆因抑制脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎性反应的作用机制.方法 以LPS诱导BV2小胶质细胞活化建立体外神经炎症细胞模型.MTT法检测紫铆因对BV2细胞存活率的影响;qPCR法检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组细胞内核因子-κB(NF-κB) p65和ERK信号通路相关蛋白的表达变化;免疫荧光染色观察各组细胞内NF-κcB p65的核转录活性变化.结果 紫铆因干预BV2细胞24 h后,对细胞活力无明显影响;紫铆因能显著下调LPS诱导BV2细胞活化后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平;紫铆因能明显降低LPS诱导BV2细胞活化后,ERK信号通路相关蛋白的磷酸化水平,并且能有效抑制NF-κB p65的核转录活性,阻止其向核内转移.结论 紫铆因可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,降低BV2小胶质细胞的炎性反应.     

大麻素1型受体拮抗剂对激活态小胶质细胞的免疫调节功能研究

目的 观察大麻素1型受体拮抗剂SR141716A(SR1)对BV2小胶质细胞免疫调节功能的影响.方法 使用致炎因子干扰素-γ(IFN-γ)刺激激活BV2小胶质细胞,建立模拟EAE炎性环境的细胞模型,比较静息态BV2细胞组、激活态BV2细胞组和SR1干预组CB1R mRNA和蛋白的表达情况,用ELISA方法检测细胞因子和趋化因子的浓度,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)浓度,MTT法检测细胞增殖率.结果 激活态的BV2小胶质细胞CB1R mRNA和蛋白的表达均高于静息态BV2细胞组(P＜0.05);大麻素1型受体拮抗剂SR1可降低激活态的BV2细胞CB1R mRNA和蛋白的表达(P ＜0.05);SR1可显著上调IFN-γ、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,增加BV2小胶质细胞NO的释放(P＜0.05),而显著下调IL-4、IL-17和MCP-1的浓度,对IL-10、IL-1β和CX3CL1无调节作用.SR1对IFN-γ活化的BV2小胶质细胞增殖无影响(P＞0.05).结论 CB1R参与了小胶质细胞介导的炎症反应,CB1R在调节细胞因子网络平衡和NO分泌中发挥了一定的作用.     

敲减NLRP3抑制LPS诱导BV2小胶质细胞的炎症反应

目的 评价NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活化的影响及意义。方法 设计shRNA质粒转染BV2小胶质细胞敲减NLRP3表达,应用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹实验挑选转染效率最高序列。运用蛋白免疫印迹法检测细胞系中NLRP3表达情况;光镜下观察NLRP3-shRNA(shNLRP3)转染对细胞系形态学的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α水平,免疫荧光染色观察小胶质细胞活化标志蛋白iNOS、Arg-1、Iba1表达。结果 NLRP3在LPS诱导的BV2细胞中高表达。NLRP3-mus-727组mRNA表达最低,沉默效果最好,蛋白免疫印迹结果显示细胞转染成功。光镜观察显示转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后呈圆形、短梭形,与空白对照组静息态细胞相似。ELISA检测到转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后促炎性介质IL-18、IL-1β、TNF-α和NO含量较阴性对照组(转染NC shRNA后给予LPS刺激)下降(均P<0.05);免疫荧光染色观察到转染...     

氯硝柳胺抑制小胶质细胞炎症作用研究

目的:探讨氯硝柳胺对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎症作用的影响。方法:建立脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞系BV2炎症反应模型;采用Griess法检测细胞上清中NO释放量,MTT法检测细胞活性;实时定量PCR(qPCR)检测促炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的表达量。分析氯硝柳胺对小胶质细胞炎症的影响。结果:氯硝柳胺能够显著抑制LPS激活的BV2细胞中NO释放量;qPCR结果显示,与正常细胞组相比,LPS组BV2中促炎因子的表达水平明显升高;氯硝柳胺显著降低LPS诱导的BV2细胞中促炎因子表达。结论:氯硝柳胺对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有明显抑制作用。     

大麻素2型受体拮抗剂对激活态BV2小胶质细胞的免疫调节作用

目的观察大麻素2型受体(cannabinoid 2 receptor, CB2R)拮抗剂对BV2小胶质细胞免疫调节功能的影响。方法 使用适量浓度的IFN-γ刺激激活BV2小胶质细胞,建立模拟EAE炎性环境的细胞模型,比较静息态BV2细胞组、激活态BV2细胞组和大麻素2型受体拮抗剂SR144528A(SR2)干预组CB2R mRNA和蛋白的表达情况,用ELISA方法检测细胞因子和趋化因子的浓度,MTT法检测细胞增殖率。结果 IFN-γ激活的BV2小胶质细胞CB2R mRNA和蛋白的表达均高于静息组(P<0.05);使用SR2干预激活的BV2小胶质细胞,可降低其CB2R mRNA和蛋白的表达(P<0.05);SR2可显著上调激活态BV2细胞致炎因子IFN-γ、IL-17、IL-6和TNF-α的水平,促进BV2小胶质细胞增殖和NO的释放(P<0.05),同时显著下调IL-4和MCP-1的浓度,对IL-1β、IL-10、CX3CL1无调节作用。结论CB2R参与了小胶质细胞介导的炎症反应,CB2R在调节Th1/Th17/Th2细胞因子网络平衡中发挥了一定的作用。     

米诺环素对大鼠神经病理性疼痛模型中小胶质细胞IL-1分泌的影响

目的 评价米诺环素(MI)对慢性压迫性损伤(CCI)诱导大鼠神经病理性疼痛及分离小胶质细胞中IL-1浓度的影响。方法 雄性SD大鼠被随机分为三组:Sham+vehicle、CCI+vehicle和CCI+MI。采用机械刺激反应和冷刺激反应评估大鼠的机械性和冷痛觉增敏。在CCI手术前及CCI手术后1、3、5、7、10和14 d进行行为学检测。CCI手术后14 d处死大鼠,从脊髓腰膨大分离小胶质细胞并进行培养。检测细胞培养24 h后上清液中白细胞介素-1(IL-1)浓度。结果 与CCI+vehicle组比较,MI缓解CCI诱导的神经病理性疼痛,并且降低培养细胞的IL-1浓度。结论 MI缓解CCI诱导的神经病理性疼痛并降低小胶质细胞中IL-1浓度。     

黄芩苷栀子苷配伍对脂多糖致BV2小胶质细胞激活损伤的影响

目的观察黄芩苷、栀子苷配伍组分(BG)对脂多糖(LPS)诱导小鼠小胶质细胞激活损伤的影响。方法体外培养BV2小鼠小胶质细胞株,取生长良好的细胞分别加入LPS(终浓度500ng/m L)和不同浓度黄芩苷、栀子苷配伍组分(终浓度12.5、25、50μg/m L)进行干预,并设置正常对照组;采用MTT法检测脂多糖对BV2细胞存活率的影响;取培养24 h细胞上清液,用Griess法检测NO生成量。结果 (1)MTT检测结果显示,与对照组相比,LPS单独刺激的BV2小胶质细胞活性明显降低,有统计学差异;与LPS单独处理的模型组细胞相比,给药组(LPS+BG)有效的提高了LPS处理后的BV2小胶质细胞活性,有统计学意义。(2)Griess法检测结果显示:与对照组相比,LPS可明显促进BV2细胞NO的生成,有统计学意义;加入黄芩苷栀子苷配伍组分可抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞NO的生成,与LPS组差异有统计学意义。结论黄芩苷、栀子苷配伍组分可显著提高脂多糖诱导的BV2小胶质细胞的存活率,同时显著降低脂多糖诱导BV2细胞NO的表达,初步判断黄芩苷、栀子苷配伍组分可抑制脂多糖所致BV2小胶质细胞的激活与损伤,具有一定的神经保护作用。     

中药乌头去毒指数的测定

采用萃取法分离-离子对萃取-比色法和异羟肟酸反应-三氯化铁显色-比色法分别测定了乌头中毒性生物碱乌头碱类(A)和酯型生物碱的含量。根据以上测得结果求得了苯甲酰乌头原碱类(B)的含量,进而求得去毒指数(DI,DI=B/(A B))。采用上下法和醋酸诱导扭体法分别测定乌头对小鼠的LD_(50)和半数镇痛效量(AD_(50)),进而求得了治疗指数(TI,TI=LD_(50)/AD_(50))。DI生品为3.83%,炮制品为51.9～70.3%;TI分别为3.2,4.0～7.6。结果表明DI可用来评估乌头的有效性和毒性。     

乌头碱诱发心律失常后心脏M3受体含量的变化

目的检测乌头碱诱发心律失常后心肌M3受体mRNA表达量的变化。方法静脉注射乌头碱(12.5μg/kg)制备大鼠心律失常模型,RT-PCR法检测心肌中M3受体mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组心肌M3受体mRNA的表达增加,差别有统计学意义(P<0.05)。结论乌头碱诱发心律失常后心肌M3受体mRNA的表达增强。     

正交设计法优选乌头炮制工艺

用正交设计法 ,以乌头炮制品收率、含水量、总生物碱和酯型生物碱含量变化为指标 ,探讨乌头炮制工艺。实验数据采用多指标实验公式评分法处理 ,兼顾总碱和酯型碱的综合效应 ,优选出乌头的最佳炮制工艺为 :水浸润至内无干心 ,切厚片 ( 2～ 4mm) ,清水煮沸 1 2 0min。     

薯蓣皂苷元对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞极化状态的影响

目的探讨薯蓣皂苷元(diosgenin)对脂多糖(LPS)诱导下BV2小胶质细胞极化状态的影响。方法将BV2细胞根据不同的处理方法分为对照组,LPS组,LPS+薯蓣皂苷元组。使用MTT法检测BV2细胞的增殖能力,使用ELISA法检测BV2细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素10(IL-10)水平,使用实时荧光定量(RT-PCR)法检测BV2细胞IL-10,诱导型一氧化氮合酶(i NOS)以及精氨酸酶(Arg-1)mRNA水平。结果使用不同浓度的薯蓣皂苷元处理BV2细胞后,各浓度的薯蓣皂苷元对BV2细胞的增殖影响无统计学意义(P0.05),而加入LPS刺激后,发现25μg/ml薯蓣皂苷元为最适浓度,且其最佳作用时间点为24 h(P0.05);薯蓣皂苷元可以抑制在LPS诱导下BV2细胞TNF-α水平以及i NOS表达,同时提高IL-10水平以及Arg-1表达(P0.05)。结论薯蓣皂苷元可以通过抑制M1型小胶质细胞极化以及促进M2型小胶质细胞极化进而发挥抗炎的作用。     

次乌头碱对心肌细胞Ca2+调控蛋白mRNA表达的影响

目的 考察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞L-钙通道、钙调蛋白(CaM)、肌质网雷诺定受体(RyR2)mRNA表达的影响.方法 体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定L-钙通道α1C亚基、CaM及RyR2 mRNA的表达.结果 HA作用15 min时,60、120 μΜ/L能提高心肌细胞膜L-钙α1C ...     

附子中的新乌头碱对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究附子中的成分新乌头碱作用于白血病K562细胞株对其生物学特性的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)检测附子中是否含有新乌头碱和苯甲酰新乌头原碱。用新乌头碱标准品作用白血病K562细胞,电子显微镜下观察白血病细胞形态变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期状态、凋亡的情况。结果高效液相色谱法检测出附子中含有新乌头碱。25~50 mg/L的新乌头碱对K562细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P0.05)。K562细胞在形态学上有明显的凋亡变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期和凋亡状态,S期比例上升,G1期比例降低(P0.05)。25~50 mg/L的新乌头碱能不同程度地诱导K562细胞发生凋亡(P0.05)。结论附子中的新乌头碱具有抑制白血病K562细胞增殖、诱导其细胞凋亡的作用。     

乌头碱对胎鼠中脑多巴胺能神经元细胞的神经毒性作用

目的: 观察乌头碱对中脑多巴胺能神经元细胞的毒理作用,以了解和预防乌头碱及其衍生物产生的神经毒性作用。方法: 从孕14 d的小鼠中取出胎鼠中脑,并分离出多巴胺能神经元细胞,于5％CO2,37 ℃和100％湿度条件培养,培养第10天加入不同浓度的乌头碱(0.1,0.5,1,5,10,50 和100 μmol/L)作用48 h,于第12天免疫组化染色。选取神经元细胞数、神经元树突的长度和数量作为观察指标,并进行分析。结果: 乌头碱作用48 h后,不同浓度的乌头碱(0.5～100 μmol/L)对神经细胞生长均有明显的抑制作用,并表现出浓度依赖性神经毒性作用,高浓度乌头碱(10～100 μmol/L)的抑制强度高于低浓度组(0.5～5 μmol/L)。结论: 体外实验证实了乌头碱对中脑多巴胺能神经元有神经毒性作用。     

复方中药中乌头生物碱在人体内的代谢产物

目的鉴定复方中药中乌头生物碱在人尿液中的代谢产物。方法液相色谱-电喷雾离子阱多级质谱(LC-ESI-MSn)法。结果检测出5种乌头生物碱代谢产物。结论从具有乌头碱中毒临床表现的患者尿液中检测到的5种乌头生物碱代谢产物保存着乌头生物碱的基本结构即乌头烷骨架,可逆证或指示乌头生物碱进入肌体,因而可作为乌头碱(乌头生物碱)中毒的指示物,并可在法医学上取代在生物体内代谢迅速难以检测的中毒指标物乌头碱。LC-ESI-MSn法作为检测乌头碱中毒指示物的方法具有灵敏、专属和简单快速的优点。     

白喉乌头对RA大鼠B10细胞和炎症因子的影响

目的探讨白喉乌头对类风湿关节炎(RA)大鼠B10细胞和炎症因子的影响。方法将40只SPF级雌性Wistar大鼠均分为空白对照组、模型组、低剂量组、高剂量组与阳性对照组。除空白对照组外,其他组大鼠均建立类风湿关节炎模型,造模成功后,模型组生理盐水灌胃,低剂量和高剂量组每天22.5、45 mg/kg白喉乌头灌胃,阳性对照组每天1 mg/kg雷公藤灌胃,每次灌胃1 mL,每天1次,连续4周。HE染色观察各组大鼠踝关节滑膜组织病理学变化,免疫组化法检测各组滑膜组织B10细胞表面抗原CD19、CD5表达情况,ELISA法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、IL-10、IL-12的水平。 结果模型组关节滑膜有水肿及大量纤维组织增生;低剂量组、阳性对照组有少量纤维组织增生;高剂量组轻微水肿,无纤维组织增生。模型组CD5、CD19蛋白表达较空白对照组增高(P＜0.05),低剂量组、高剂量组和阳性对照组CD5、CD19蛋白表达较模型组降低(P＜0.05)。模型组TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β水平较空白对照组增加(P＜0.05),低剂量组、高剂量组、阳性对照组TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β水平较模型组降低(P＜0.05)。结论白喉乌头可能通过调控B10细胞减少RA滑膜组织的炎症反应。     

山东乌头属植物分类的研究

报道了山东乌头属3种和1变种,即拟两色乌头 Acniturn olczyanum Rapcs.乌头 A.carmichaeli Debx.展毛乌头(变种)var.truppelianum(Ulbr.)W.T.Wanget Hsiao 和圆锥乌头 A.paniculigerum Nakai(其中拟两色乌头 A.olczyanum Rapcs.为国内分布新记录,圆锥乌头 A.panicligerum Nakai 为我省分布新记录)的分类和分布等,并对其学名等问题进行了讨论。     

乌头半夏混剂促进大鼠创面愈合的研究

目的:通过观察乌头半夏混剂对大鼠创面愈合速率的影响,探讨该混剂促进创面修复的机制。方法:清洁级雄性Wistar大鼠60只,分为模型组、对照组云南白药组、治疗组乌头半夏混剂,每组20只。大鼠背部左右侧各切取直径2 cm大小的皮肤,造成创面模型。模型组、对照组和治疗组大鼠创面分别给予生理盐水、云南白药和乌头半夏混剂。伤后3 d、7 d、11 d计算伤口愈合速率,real-time PCR分析转化生长因子—β1(TGFF—β1)、表皮细胞因子(EGF)和碱性成纤维细胞因子(b FGF)的表达。结果:与模型组相比,治疗组创面愈合速率明显加快,TGF-β1mRNA水平在第3 d和7 d分别升高114.3%(P0.01),72.3%(P0.01);EGF mRNA第7d和11d分别升高了57.9%(P0.01)和37.4%(P0.05)。b FGF mRNA第3d治疗组升高了74.7%(P0.01)。结论:乌头半夏混剂具有明显促进创面愈合的作用,其机制可能与诱导TGFF—β1、EGF和b FGF的表达有关。     

乌头碱中毒致心律失常的表现及对内皮功能的影响

目的探讨乌头碱中毒致心律失常的表现和对内皮功能的影响。方法回顾性分析29例乌头碱中毒患者的临床资料,检测患者血浆一氧化氮（NO）和一氧化氮合成酶（NOS）,同时检测20名正常人（对照组）的NO和NOS。结果中毒组83％的患者有明显心律失常,其中室性心律失常最为明显,治愈出院26例,3例死亡;中毒组患者血浆NO和NOS明显高于对照组（P〈0．05）。结论乌头碱中毒可导致多种心律失常,尤其是室性心律失常;同时可以导致NO和NOS升高,造成细胞毒性。