非编码RNA在消化系统肿瘤中的作用

目的探究LIM激酶1(LIMK1)高表达通过LIMK1/cofilin1通路对人结肠癌SW480细胞生物学特性的影响。 方法构建高表达LIMK1基因SW480细胞。 实验分为空载体组、SW480组、LIMK1高表达组(LIMK1/SW480组)。RT-PCR、Western blotting分别检测LIMK1、Rac1、Pak1、p-LIMK1、cofilin1与p-cofilin1表达。MTT、流式细胞术、划痕实验和侵袭实验检测LIMK1高表达对SW480细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。 结果与空载体组和SW480组比较,LIMK1/SW480组LIMK1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖活性、穿膜细胞数升高(P＜0.05),G2/M期细胞百分率、瘢痕距离减少(P＜0.05)。LIMK1/SW480组LIMK1、p-LIMK1、p-cofilin1蛋白较空载体组和SW480细胞组升高(P＜0.05)。各组Rac1、Pak1、cofilin1表达差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论LIMK1高表达可能通过抑制LIMK1/cofilin1通路促进SW480细胞增殖、迁移、侵袭。     

异丙酚对脂多糖诱导的内皮细胞通透性的影响

目的 探讨异丙酚对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞通透性和过氧亚硝基阴离子的影响。方法 脐静脉内皮细胞随机分7组，每组5份，并施以不同的处理：⑴对照组；⑵LPS0.1组（脂多糖终浓度为0.1?g/mL）；⑶LPS1组（脂多糖终浓度为1?g/mL）；⑷LPS10组（脂多糖终浓度为10?g/mL）；⑸P4（丙泊酚终浓度为4?g/mL）+ LPS10组；⑹P40（丙泊酚终浓度为40?g/mL）+ LPS10组； ⑺I40（脂质溶剂的体积和浓度同P40组）+ LPS10组。孵育6h后测定内皮单层滤过系数（Kf）和蛋白质渗透压反射系数（s）以反映内皮细胞通透性的变化。用MTT法测定内皮细胞存活率、流式细胞技术检测硝基酪氨酸(nitrotyrosine, NT)的蛋白表达。结果 与C组比较，LPS呈浓度依赖性使内皮细胞Kf增加、s减少，NT蛋白表达显著增加，细胞存活率降低（P <0.01），且NT表达与细胞存活率之间呈负相关；P4+ LPS10及P40+ LPS10两组可显著减少LPS 引起内皮细胞Kf 和s 的变化，抑制NT蛋白的表达并提高细胞的存活率（P <0.01）。I4+ LPS10组无上述保护效应。结论 异丙酚可减少LPS所致单层内皮细胞通透性的增加，提高细胞存活率，这种保护作用可能与其抑制过氧亚硝基阴离子（ONOO-）的过量生成密切相关。     

miR-503-5p对IL-1β诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响

目的探讨miR-503-5p对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响和分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分为NC组、IL-1β组、IL-1β+anti-miR-con组及IL-1β+anti-miR-503-5p组。分别采用噻唑蓝（MTT）法、黏附实验、流式细胞术、Transwell实验检测HUVECs增殖、黏附、凋亡和迁移能力。Western blotting检测细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著降低,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著升高（P < 0.01）。与IL-1β+anti-miR-con组比较,IL-1β+anti-miR-503-5p组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著升高,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著降低（P < 0.01）。结论抑制miR-503-5p表达可促进血管内皮细胞增殖和迁移,抑制细胞黏附和凋亡,其机制可能与抑制ICAM-1和VCAM-1表达有关。     

丙泊酚对脂多糖诱导的内皮细胞通透性的影响

目的 探讨丙泊酚对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞通透性的影响.方法 脐静脉内皮细胞随机分7组,每组5份,并施以不同的处理:(1)对照组;(2)LPS0.1组(脂多糖终浓度为0.1μg/mL);(3)LPS1组(脂多糖终浓度为1μg/mL);(4)LPS10组(脂多糖终浓度为10μg/mL);(5)P4(丙泊酚终浓度为4μg/mL)+LPS10组;(6)P40(丙泊酚终浓度为40μg/mL)+LPS10组;(7)I40(脂质溶剂的体积和浓度同P40组)+LPS10组.孵育6 h后测定内皮单层滤过系数(Kf)和蛋白质渗透压反射系数(σ)以反映内皮细胞通透性的变化.用MTT法测定内皮细胞存活率、流式细胞技术检测硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)的蛋白表达.结果 与C组比较,LPS呈浓度依赖性使内皮细胞Kf增加、σ减少,NT蛋白表达显著增加,细胞存活率降低(P<0.01),且NT表达与细胞存活率之间呈负相关;P4+LPS10及P40+LPS10两组可显著减少LPS引起内皮细胞Kf和σ的变化,抑制NT蛋白的表达并提高细胞的存活率(P<0.01).I4+LPS10组无上述保护效应.结论 丙泊酚可减少LPS所致单层内皮细胞通透性的增加,提高细胞存活率,这种保护作用可能与其抑制过氧亚硝基阴离子(ONOO-)的过量生成密切相关.     

银杏叶提取物对脂多糖介导的血管内皮细胞低密度脂蛋白受体 LOX-1 表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物（GBE50）对脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白受体（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor,LOX-1）表达的影响.[方法]应用LPS刺激体外培养的HUVECs 24h.RT-PCR方法检测（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor mRNA,LOX-1 mRNA）表达水平;采用蛋白质印迹分析检测LOX-1蛋白表达水平.[结果]LPS （1 μg/ mL）上调LOX-1 mRNA和蛋白表达水平,GBE50（40 μg/mL）轻度抑制LPS介导的LOX-1 mRNA（P＜0.005）和蛋白表达增加（但没有统计学意义,P＞0.05）,GBE50（80 μg/mL）及NF-κB抑制剂CAPE（20 μg/mL）明显抑制LOX-1 mRNA和蛋白表达上调（P＜0.01）.[结论] GBE50可能通过抑制LOX-1表达,在防治动脉粥样硬化中发挥作用.     

姬松茸多糖对LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护机制

目的：探讨姬松茸多糖（ABP）对脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用及其可能的机制。方法：HUVECs分为Control组、LPS组（终浓度为1 μg/mL LPS构建细胞损伤模型）、LPS+ABP组（LPS基础上分别用10、20、50 μg/mL ABP进行干预）,CCK-8法检测ABP对HUVECs的细胞毒性作用,ELISA法、Western blot及RT-PCR检测各组炎症因子及细胞黏附分子的表达,Western blot和免疫荧光法检测各组NF-κB信号通路相关蛋白表达及核转位。结果：LPS组TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1蛋白及p-p65/p65、p-IκB/IκB蛋白相对表达量较Control组显著升高（P ＜0.01）;LPS+ABP组随药物浓度升高,TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1蛋白及p-p65/p65、p-IκB/IκB蛋白表达较LPS组逐渐降低（P ＜0.05）。LPS组TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA较Control组显著升高（P ＜0.01）;LPS+ABP组随药物浓度升高,TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达较LPS组逐渐降低（P ＜0.05）。结论：ABP可以通过抑制LPS诱导的炎症因子和细胞黏附分子的表达来减轻HUVECs的损伤,其机制可能与抑制细胞中NF-κB信号通路的激活有关。     

ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

目的 观察乙醛脱氢酶2（ALDH2）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响,并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理;LPS损伤组（LPS）：1 μg/mL的LPS刺激24 h;LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20 μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性;跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化;试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平;超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达;Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比,LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高,MDA含量升高、SOD活性下降,ROS荧光表达增强,ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低,而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1表达升高（P<0.05）。应用Alda-1干预后,可显著抑制LPS所致的内皮细胞膜通透性升高,减低ROS荧光表达,ALDH2、ZO-1、Occludin 、OPA1和Mfn2蛋白表达增高,而Drp1和Fis1蛋白表达降低（P<0.05）。结论 ALDH2通过抑制线粒体ROS的产生,减轻LPS诱导脑微血管内皮细胞屏障的损伤,其机制可能与促进线粒体融合及抑制线粒体裂变有关。     

黄连碱对人脐静脉内皮细胞内质网应激的影响

目的 建立人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内质网应激细胞模型,观察黄连碱对HUVECs以及内质网模型细胞生长活性的影响,对CHOP、GRP78基因以及蛋白表达的影响。方法 使用10 μg/mL的衣霉素诱导HUVECs 18 h后,加入不同浓度的黄连碱再处理24 h。CCK8法检测不同浓度黄连碱对HUVECs的活性影响以及黄连碱对衣霉素诱导后的HUVECs的活性影响;采用RT-RCR法比较各组细胞中CHOP、GRP78的mRNA的表达情况;采用Western blotting和细胞免疫荧光法比较各组细胞中CHOP,GRP78的蛋白表达情况。结果 随着黄连碱浓度的增加,在1~20 μmol/L范围内的黄连碱对HUVECs的活性无影响,浓度为20 μmol/L黄连碱作用24 h后,对衣霉素诱导的HUVECs活性具有保护作用（P < 0.01）。加入衣霉素诱导18 h,HUVECs中CHOP、GRP78 mRNA水平的表达增高（P < 0.01）,再加入黄连碱继续诱导24 h后,黄连碱可以抑制衣霉素所诱导的HUVECs中CHOP、GRP78 mRNA水平的表达增高（P < 0.01）。加入衣霉素诱导18 h,HUVECs中CHOP、GRP78蛋白水平的表达增高（P < 0.01）,再加入黄连碱继续诱导24 h后,发现黄连碱可以抑制衣霉素所诱导的HUVECs中CHOP、GRP78蛋白水平的表达增高（P < 0.01）,与衣霉素诱导组相比数据具有统计学意义,细胞免疫荧光染色结果与Western blotting结果相似。结论 黄连碱可以减轻由衣霉素诱导的HUVECs过度内质网应激反应,并可提高受损细胞的活性;并可通过下调CHOP、GRP78的表达改善HUVECs过度内质网应激反应。     

法舒地尔对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,探讨其作用机制.方法:用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs,加入内皮细胞完全培养基中培养,采用胰蛋白酶进行消化传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态并进行免疫组织化学鉴定.将HUVECs随机分为对照组(内皮细胞培养基培养)、LPS组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS)和法舒地尔组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS+3.275 μg/mL法舒地尔),Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-ERM蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测RhoA、ROCK2和p-ERM mRNA表达量.结果:原代培养的内皮细胞在接种后24 h后完全贴壁生长,第3天融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组织化学检测可见第Ⅷ因子相关抗原阳性反应,证实为内皮细胞.LPS组RhoA、ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达水平均显著高于对照组(P<0.01);而法舒地尔组ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达均低于LPS组(P<0.05~P<0.01),但2组RhoA蛋白和基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:Rho/ROCK/ERM通路在LPS诱导的HUVECs细胞骨架改变中起重要作用,法舒地尔可拮抗LPS诱导的骨架蛋白重排等HUVECs损伤,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路活化有关.     

丙酮酸乙酯对人脐静脉内皮细胞HMGB1表达的影响

目的：本研究意在探讨丙酮酸乙酯（EP）对炎症因子HMGB1表达的影响,从而证实EP在急性脓毒症中的作用及机制。方法：采用原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,免疫组化法鉴定其纯度,台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力。观察不同计量的EP对人脐静脉内皮细胞分泌HMGB1的作用。细胞分三组：LPS 100 ng/mL＋EP 0μM组、LPS 100 ng/mL＋EP 5μM组、LPS 100 ng/mL＋EP 10μM组。采用Western blot方法检测培养上清液HMGB1的含量。结果：各细胞组于LPS 100 ng/mL刺激16 h后,EP 5μM剂量组对HMGB1分泌具有一定的抑制作用,与EP 0μM组比,HMGB1含量明显降低（t=21.27,P〈0.05）;10μM剂量组与0μM组比,降低HMGB1作用更为明显（t=26.38,P〈0.05）。结论：丙酮酸乙酯可以减少血管内皮细胞释放HMGB1,对急性脓毒症有改善作用。     

川芎嗪对脂多糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCK2)、肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化及细胞骨架连接蛋白(ezrin-radxin-moesin,ERM)磷酸化水平的影响。方法:以体外培养的HUVEC为实验对象,分为对照组、LPS组和TMP组(0.5、1.0、1.5 mg/mL),荧光定量PCR测定内皮细胞RhoA、ROCK2和信使RNA(p-Ezr mRNA)的表达,Western blot法测定内皮细胞RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白水平的表达。结果:与对照组比较,LPS组RhoA、ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及RhoA、ROCK2和p-Ezr mRNA表达均显著升高(P<0.01);与LPS组比较,TMP 3组RhoA蛋白表达与mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05),ROCK2、p-MLC和p-ERM蛋白及ROCK2、p-Ezr mRNA表达均降低(P<0.05~P<0.01),且TMP 3组之间ROCK2、p-MLC和p-ERM的分子表达差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。结论:TMP对LPS诱导的HUVEC损伤的保护作用可能是通过抑制Rho/ROCK信号通路中ROCK2、p-MLC和p-ERM的表达,以减弱LPS对内皮细胞骨架的损伤。     

外源性胍丁胺抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤

目的研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κB、MAPK通路及活性氧（ROS） 的产生是否相关。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）。MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24 h对HUVECs细胞 活力的影响。HUVECs细胞机分为：①空白对照组;②脂多糖（10 μg/mL）组;③胍丁胺干预组：脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺 （0.125、0.5、1 mmol/L）。ELISA 法检测24 h 细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）、可溶性血管间粘附分子-1 （sVCAM-1）、可溶性E-选择素（sE-selectin）及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）水平,确定胍丁胺最适干预浓度（1 mmol/L）。后续 实验中HUVECs细胞随机分为：对照组、脂多糖（10 μg/mL）组、胍丁胺（1 mmol/L）组及脂多糖（10 μg/mL）+胍丁胺（1 mmol/L） 共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1 h,用10 μmol/L NF-κB（PDTC）、ERK1/2（PD98059）及p38（SB203580）抑 制剂进行预处理。qRT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO1）mRNA 表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;Western blot 法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化- p65（p-p65）、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平。结果（1）HUVECs经10 μg/mL脂多糖刺激24 h 后,上清sVCAM-1、sICAM-1、sE-选择素、MCP-1 含量明显升高（P<0.05）,细胞内ROS明显增加（P<0.05）;刺激6 h 后各因子 mRNA水平升高（P<0.05）;（2）胍丁胺（1 mmol/L）干预后上述指标显著下调（P<0.05）,这与p38、ERK及NF-κB信号通路抑制剂 预处理细胞后的抑制效应相似;（3）胍丁胺干预组6 h HO-1 mRNA表达较脂多糖组明显增加（P<0.05）,而NQO-1无明显变化; （4）胍丁胺明显抑制脂多糖刺激引起的细胞内p38、ERK、核内p65（Ser536）与胞浆IκBα磷酸化,并上调胞浆IκBα蛋白水平。结 论胍丁胺可能通过抑制NF-κB、MAPK通路的激活下调粘附分子及趋化因子水平,并增强HO-1表达以减少活性氧产生对抗脂 多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤。     

丙泊酚对LPS激活人体中性粒细胞释放炎性细胞因子的影响及机制研究

目的观察丙泊酚对LPS激活后人体中性粒细胞（PMN）释放炎性细胞因子的影响。方法 20例健康志愿者外周静脉采血,分离PMN后每例分为5份,分别加入等量生理盐水（C组,对照组）、LPS组（终浓度为100 ng/L）、LPS＋丙泊酚2μg/mL组（P1组）、LPS＋丙泊酚4μg/mL组（P2组）、LPS＋丙泊酚8μg/mL组（P3组）的5组。孵育12 h后,ELISA法检测培养液中TNF-α、IL-8含量,Western blotting法检测核内p65蛋白含量。结果实验剂量的丙泊酚均可不同程度抑制LPS激活后培养液中TNF-α、IL-8的增高（P〈0.05）;2~8μg/mL浓度的丙泊酚可以显著增加LPS导致的核内p65含量的增加（P〈0.05）;丙泊酚的这种效应具有剂量依赖性。结论 2~8μg/mL浓度的丙泊酚可通过抑制p65的激活,显著减少PMN释放炎性细胞因子。     

丹参酮ⅡA通过 Rho/Rho激酶途径保护脂多糖诱导内皮细胞损伤

Objective： To test whether tanshinone ⅡA （Tan ⅡA）, a highly valued herb derivative to treat vascular diseases in Chinese medicine, could protect endothelial cells from bacterial endotoxin （lipopolysaccharides, LPS）-induced endothelial injury. Methods： Endothelial cell injury was induced by treating human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） with 0.2 μg/mL LPS for 24 h. Y27632 and valsartan were used as positive controls. The effects of tanshinone Ⅱ A on the LPS-induced cell viability and apoptosis rate of HUVECs were tested by flow cytometry, cell migration by transwell, adhesion by a 96-well plate pre-coated with vitronectin and cytoskeleton reorganization by immunofluorescence assay. Rho/Rho kinase （ROCK） pathway- associated gene and protein expression were examined by microarray assay; quantitative real-time polymerase chain reaction and Western blotting were used to confirm the changes observed by microarray. Results： Tan ][ A improved cell viability, suppressed apoptosis and protected cells from LPS-induced reductions in cell migration and adhesion at a comparable magnitude to that of Y27632 and valsartan. Tan II A, Y27632 and valsartan also normalized LPS-induced actomyosin contraction and vinculin protein aggregation. A microarray assay revealed increased levels of fibronectin, integrin A5 （ITG A5）, Ras homolog gene family member A （RheA）, myosin light chain phosphatase, phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase （PI3K, or PIP2 in Western blotting）, focal adhesion kinase, vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor 2 in the damaged HUVECs, which were attenuated to different degrees by Tan ⅡA, Y27632 and valsartan. Conclusion： Tan ⅡA exerted a strong protective effect on HUVECs, and the mechanism was caused, at least in part, by a blockade in the Rho/ROCK pathway, presumably through the down-regulation of ITG A5.     

JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD—L1表达的实验研究

目的探讨脂多糖（LPS）刺激脐静脉内皮细胞表达程序性死亡因子配体1（PD—L1）与C—JUN氨基末端激酶（JNK）信号通路的关系。方法体外培养脐静脉内皮细胞,按2x107／m1种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分成阴性对照组、LPS组及SP600125＋LPS组,其中阴性对照组不加干预因素;LPS组先用DMSO（0．1％V／V）作用1h,再用LPS（1．0}xg／m1）刺激24h;SP600125＋LPS组先用SP600125（20μmol／L）作用1h后再用LPS刺激24h,Western．blot测定各组PD．L1及P．JNK蛋白表达。结果SP600125＋LPS组PD—L1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;而SP600125＋LPS组和对照组PD．L1蛋白表达与LPS组比较均明显减少,差异均有统计学意义（P〈0．05）。SP600125＋LPS组细胞P．JNK蛋白表达与对照组和LPs组比较均减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LPS可能通过JNK信号通路调控脐静脉内皮细胞表达PD．L1。     

辛伐他汀对脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞Tribbles表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)肿瘤坏死因子(TNF-α)和Tribbles mRNA表达变化及辛伐他汀对其表达的影响.方法 实验分为12h组和24h组,各组又分为空白对照组、脂多糖(100ng/ml)组、辛伐他汀(5 μg/ml)组、辛伐他汀(5 μg/ml)和脂多糖(100ng/ml)共...     

黄芩抑制脂多糖/三磷酸腺苷诱导的内皮细胞NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)表达和Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活

【目的】观察黄芩和黄芩苷对脂多糖(LPS)/三磷酸腺苷(ATP)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)和Nod样受体蛋白3(NLRP3)小体表达的影响。【方法】将HUVECs随机分为空白对照组、模型组、阿托伐他汀组、黄芩苷组和黄芩血清组,按分组相应药物预处理细胞24 h,然后用1μg/mL LPS刺激细胞24 h,再用5.5 mmol/L ATP刺激细胞4 h后检测各指标。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,均相竞争法测定细胞上清液中内皮素1(ET-1)的含量,硝酸还原酶法测定细胞上清液中总硝酸盐(NOx)水平,蛋白免疫印迹法检测细胞内NEK7、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解型胱天蛋白酶1(cleaved-Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。【结果】与模型组比较,黄芩血清组、黄芩苷组、阿托伐他汀组LPS/ATP诱导的细胞活力升高,ET-1水平降低、NOx水平升高,NEK7、NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、IL-1β的蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),且黄芩血清组、黄芩苷组的作用效果优于阿托伐他汀组。【结论】黄芩和黄芩苷可以抑制LPS/ATP诱导HUVECs的NLRP3炎症小体激活引起的细胞焦亡而保护内皮,其机制可能与调控NEK7表达有关。