LPS激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用研究

目的 探讨脂多糖(LPS)激活巨噬细胞NLRP3炎性小体的作用.方法 用佛波酯诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞.实验分为对照组、LPS组、LPS+NLRP3 siRNA组、LPS+Scrambled siRNA组.采用免疫荧光染色检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白ASC的共定位、Western blotting检测NLRP3蛋白的表达、ELISA检测细胞培养上清白介素1β(IL-1β)的浓度.结果 与对照组相比,NLRP3和ASC蛋白的共定位明显增多,LPS组NLRP3蛋白的表达增强.LPS还能使细胞培养上清IL-1β的浓度显著升高,NLRP3 siRNA干扰后细胞培养上清IL-1β的浓度显著降低.结论 LPS可以促进炎性小体成分NLRP3、ASC的表达,激活NLRP3炎性小体,刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β.     

电针预处理对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响

  目的  观察电针预处理“足三里”穴和“尺泽”穴对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响, 探讨电针预处理在脓毒症ALI中发挥的保护效应及可能机制。  方法  将SD大鼠随机分为对照组、电针预处理+对照组、模型组、电针预处理+模型组, 每组10只。各模型组采用腹腔注射脂多糖(LPS)的方法建立脓毒症ALI大鼠模型。各电针预处理组于LPS造模前1周进行连续7 d电针预处理, 疏密波, 频率4 Hz/20 Hz, 强度1~2 mA, 持续30 min。检测各组大鼠肺功能; HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化; 测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D); ELISA法检测大鼠血浆及肺组织中炎症因子IL-1β、IL-18含量; 免疫荧光观察大鼠肺组织中ASC蛋白阳性表达; Western blot法检测大鼠肺组织中NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白的表达。  结果  与对照组相比, 模型组大鼠用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气量(FEV_0.1)、第0.3秒用力呼气量(FEV_0.3)、FEV_0.1/FVC、FEV_0.3/FVC均显著降低(P < 0.001);肺泡结构紊乱, 肺组织内炎性细胞浸润明显, 肺组织充血水肿; W/D比值显著升高(P < 0.001);血浆及肺组织内IL-1β、IL-18含量明显升高(P < 0.001);ASC蛋白阳性表达明显增多(P < 0.001);肺组织中炎症小体相关蛋白NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β的表达水平均显著升高(P < 0.001)。与模型组相比, 电针预处理+模型组大鼠FVC、FEV_0.1、FEV_0.3、FEV_0.1/FVC、FEV_0.3/FVC均明显升高(P < 0.05, P < 0.001);肺组织内炎症细胞浸润及充血水肿有明显改善; W/D比值显著降低(P < 0.01);血浆及肺组织内IL-1β、IL-18含量显著降低(P < 0.01, P < 0.001);ASC蛋白阳性表达降低(P < 0.001);肺组织中炎症小体相关蛋白NEK7、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平均显著降低(P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001)。  结论  电针预处理可以减轻肺部炎性反应, 改善肺功能, 其机制与电针抑制脓毒症ALI大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活相关。      

阿托伐他汀抑制动脉粥样硬化患者NLRP3炎性体途径的研究

目的研究治疗动脉粥样硬化（AS）药物阿托伐他汀对含热蛋白结构域3的核苷酸结合寡聚化样受体（NLRP3）炎性体的调节作用。方法采用ELISA法测定30例AS患者经阿托伐他汀治疗前后IL-1β和IL-18在血浆和单核细胞来源巨噬细胞（MDM）中的表达水平;采用实时荧光定量PCR法检测炎性体相关分子如NLRP3、凋亡相关的点状蛋白（ASC）、IL-1βmRNA的表达水平;在体外用不同浓度和时间的阿托伐他汀处理单核巨噬细胞株（THP-1）,观察其对尼日利亚菌素激活NLRP3炎性体的调节作用。结果AS患者经阿托伐他汀治疗后血浆和MDM中的IL-1β和IL-18的表达水平均低于治疗前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;MDM中NLPR3、ASC和IL-1βmRNA表达均低于治疗前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与对照组比较,低、中、高浓度组的阿托伐他汀以及用阿托伐他汀处理12、24、48h后IL-1β和IL-18的表达水平均下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,且随着阿托伐他汀浓度越大、处理时间越长,下降越明显（均P＜0.01）。结论阿托伐他汀可能通过抑制AS患者NLRP3炎性体活化发挥其治疗作用。     

ATP/P2X7轴介导的K+外排促进NDV感染的ECA109细胞中NLRP3炎性小体激活

目的 探究新城疫病毒(NDV)感染食管癌ECA109细胞后，NLRP3炎性小体是否激活、其激活是否与K⁺外排有关及ATP/P2X7轴对NLRP3炎性小体激活的影响。方法 Western blot检测NLRP3和IL-1β表达情况；ELISA检测上清液中IL-1β含量；荧光免疫技术检测ASC斑点的形成情况；荧光探针技术检测细胞内K⁺浓度变化；使用ATP酶、ATP及P2X7受体抑制剂进行干预，研究其在NLRP3炎性小体激活中的作用。结果 与control组比较，NDV F3感染细胞后，细胞内NLRP3、IL-1β和ASC蛋白表达上调；胞内钾离子浓度随感染时间延长而降低(P<0.05)。P2X7受体抑制剂干预后，胞内K⁺外流受阻，随抑制剂浓度的增加，K⁺外流在10 mol/L处受最大抑制(P<0.05)。ATP酶及ATP干预结果显示，ATP酶抑制K⁺外流，ATP促进K⁺外流。Western blot结果显示，与control组比较，抑制P2X7受体，...     

NLRP3炎性小体在脂多糖诱导的高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制

目的 探究NLRP3炎性小体在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的心肌细胞高糖缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤中的作用及机制。方法 取正常对数期生长的H9C2心肌细胞,随机分为4组,即高糖(H)组(n=3)、高糖+缺氧/复氧(H+H/R)组(n=3)、高糖+LPS+H/R(H+LPS+H/R)组(n=3)和BAY11-7082干预高糖+LPS+H/R(H+LPS+BAY+H/R)组(n=3)。采用CCK-8法检测细胞活力,ROS检测试剂盒测定线粒体氧化应激水平,RT-PCR检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平。结果 与高糖组比较,H+H/R组细胞活性降低、LDH水平升高、线粒体ROS产生增加,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达上调,NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白水平增高(P<0.05);LPS处理后,H/R的高糖心肌细胞损伤进一步加重(P<0.05),而加用BAY11-7082后,LPS加重的损伤得以改善(P<0.05)。结论 BAY11-7082可以抑制NLRP3炎性小体激活,从而减轻LPS介导的H9C2细胞高糖H/R损伤。     

NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞极化在ITP中的作用

目的 探讨在免疫性血小板减少症(ITP)中NLRP3炎症小体的活化水平及抑制NLRP3介导的炎症小体活化对M1型巨噬细胞极化与免疫功能的影响。方法 RT-qPCR法检测ITP患者(ITP组)和健康对照组(Control组)外周血单个核细胞(PBMC)与CD14⁺单核细胞中NLRP3 mRNA的表达；ELISA法检测两组血清中IL-1β与IL-18的含量；Pearson相关系数分析NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平与血小板计数的相关性；将ITP患者来源的M0型巨噬细胞(MDMs)分为4组：IgG对照组(IgG组),MCC950处理组(MCC950组),LPS、IFN-γ与IgG处理组(LPS+IFN-γ+IgG组)和LPS、IFN-γ与MCC950处理组(LPS+IFN-γ+MCC950组);RT-qPCR与Western blot检测4组MDMs中M1型巨噬细胞标志物CD86、iNOS、MCP-1 mRNA与蛋白水平；Western blot检测各组MDMs中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved caspase-1与IL-β的表达；...     

阿托伐他汀抵抗吸烟相关性血管内皮损伤的实验研究

目的：探讨阿托伐他汀对吸烟相关性血管内皮损伤的保护作用。方法将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组、香烟提取物处理组和阿托伐他汀联合香烟提取物处理组。观察不同组细胞的形态学变化,并检测不同组细胞中血管细胞黏附分子‐1（VCAM‐1）和E‐选择素（E‐selectin）的蛋白表达。结果香烟提取物处理组HUVECs的细胞形态发生了剧烈的变化,失去了基本形态;而阿托伐他汀联合香烟提取物处理组 HUVECs的细胞形态仅发生了轻微的改变,保留了基本形态。同时VCAM‐1和E‐selectin蛋白在香烟提取物处理组细胞中表达明显高于对照组和阿托伐他汀联合香烟提取物处理组,差异有统计学意义（P＜0．05）;VCAM‐1和E‐selectin蛋白在阿托伐他汀联合香烟提取物处理组细胞中的表达稍高于对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论阿托伐他汀可以抵抗吸烟导致的血管内皮损伤,具有血管内皮保护作用,可用于治疗吸烟相关性血管疾病。     

黄芩苷对巨噬细胞产生抵抗素和白细胞介素-1β的影响

【目的】观察黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞产生抵抗素和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。【方法】体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,取生长良好的细胞进行接种。模型组加入LPS(终浓度为0.1μg/mL或5μg/mL)或重组抵抗素(终浓度为100 ng/mL);中药组加入不同浓度黄芩苷(终浓度为50、100μmol/L),预处理1 h,后加入LPS或抵抗素。24 h后吸取上清,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组IL-1β和抵抗素浓度,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测抵抗素mRNA表达。【结果】与正常组比较,LPS组促进了巨噬细胞分泌抵抗素,抵抗素mRNA表达上调,LPS和重组抵抗素均促进了巨噬细胞产生IL-1β(P<0.05或P<0.01)。黄芩苷高、低剂量组均可显著抑制IL-1β和抵抗素的浓度,且抑制抵抗素mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芩苷可明显降低促炎因子产生的炎症反应,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

阿托伐他汀对脂多糖诱导小鼠胰岛β细胞NF-κB、TLR4表达与胰岛素分泌的影响

目的:研究阿托伐他汀对脂多糖诱导小鼠胰岛 β 细胞活力,核转录因子(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)表达与胰岛素分泌影响的机制.方法:MTT测定细胞活性,ELISA检测胰岛素浓度,Western blotting检测NF-κB、TLR4蛋白水平.结果:与对照组相比,LPS干预24h后,MIN6细胞活力、胰岛素分泌功能下降,TLR4、NF-κB蛋白水平上调.与LPS组相比,LPS+阿托伐他汀各浓度组干预24h后细胞活力呈浓度依赖性增加.LPS+阿托伐他汀高浓度组较LPS组胰岛素分泌水平增加.LPS+阿托伐他汀中、高浓度组TLR4、NF-κB蛋白水平较LPS组呈浓度依赖性下调.结论:阿托伐他汀可逆转LPS诱导MIN6损伤并与TLR4/NF-κB通路的激活有关.     

黄芪甲苷对高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/SVneo）焦亡及侵袭迁移的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/SVneo）焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组：对照组（未处理）、高糖组（高糖刺激）及黄芪甲苷50、100μmol/L组（高糖刺激+黄芪甲苷）。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,分别采用Transwell实验和划痕实验测定细胞侵袭、迁移能力,Hoechst 33342/碘化丙啶（PI）双荧光染色评估细胞焦亡情况,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶剪切体（cleaved-Caspase-1）、消皮素D-N端（GSDMD-NT）、白细胞介素18(IL-18)蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞活力显著降低,细胞迁移率显著降低,侵袭细胞数显著减少,PI阳性细胞比例显著增加,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著升高（P<0.05或P<0.01）;与高糖组比较,黄芪甲苷处理组细胞活力显著升高,细胞迁移率显著增加,...     

线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

目的: 探讨线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法: 培养原代小鼠心肌成纤维细胞，细胞分为对照组（正常培养组），使用脂多糖刺激的引发组，使用脂多糖加三磷酸腺苷的激活组，以及再加用mito-TEMPO的干预组。通过MitoSOX染色检测各组细胞线粒体活性氧水平;通过蛋白质印迹法检测细胞内NLRP3、凋亡相关微粒样蛋白（ASC）、Pro-caspase-1、Pro-IL-1β及上清液中caspase-1 p20、IL-1β蛋白水平; 用酶联免疫吸附法检测上清液中IL-1β蛋白的含量; 使用免疫共沉淀法观察ASC与NLRP3蛋白的结合情况。结果： 激活组细胞胞内线粒体活性氧水平较对照组明显增加（P＜0.05），而干预组线粒体活性氧水平较激活组明显下降（P＜0.05）；心肌成纤维细胞经脂多糖刺激后，细胞内NLRP3和Pro IL 1β蛋白较对照组明显升高（P＜0.05），干预组中Pro-IL-1β较激活组明显升高（P＜0.05）。激活组上清液中caspase-1 p20和IL-1β较对照组明显升高（P＜0.05），干预组caspase-1 p20和IL-1β较激活组明显减少（P＜0.05）。激活组NLRP3-ASC连接形成复合体，干预组NLRP3和ASC的结合减少。结论： 心肌成纤维细胞中线粒体活性氧通过促进NLRP3蛋白和ASC蛋白的结合，使NLRP3炎症小体激活。     

葛根芩连汤不同配伍对黄芩苷含量的影响

目的　建立 RP- HPL C法测定葛根芩连汤各配伍组合中的黄芩苷的含量测定方法 ,研究配伍对黄芩苷含量的影响。方法　采用 L8(2 7)正交设计及统计方法 (统计软件 SPSS10 .0 ) ,以 HPL C法测定黄芩苷的含量。结果　葛根、黄连对方中黄芩苷含量的影响差异具有显著性 (P<0 .0 5 ) ,甘草对黄芩苷含量的影响差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,葛根、黄连、甘草对黄芩苷含量的影响不存在两两交互作用。凡是黄连与黄芩的配伍组合皆有沉淀产生 ,并且沉淀中含有较多的黄芩苷。结论　葛根芩连汤配伍中葛根、黄连能降低黄芩苷的含量 ,甘草没有增加黄芩苷的溶出的作用。 p H值的改变可能是含黄连和黄芩配伍煎液产生沉淀的主要原因之一。     

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的 探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的分子机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10⁷ TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏...     

黄芩配方颗粒黄芩苷含量近红外光谱测定方法

目的 采用近红外光谱测定方法(NIRS)快速测定黄芩配方颗粒中的黄芩苷.方法 运用NIRS与偏最小二乘法相结合,通过优化不同的预处理方法、不同的谱区范围,建立了测定黄芩颗粒剂中指标性成分黄芩苷的定量校正模型.结果 建立了黄芩配方颗粒中黄芩苷的近红外模型,定量校正模型的相关系数R2为0.9702,校正集均方根误差RMSEC为0.555,预测集均方根误差RMSEP为1.05.结论 本实验研究了基于NIRS的不同厂家黄芩配方颗粒剂快速质量分析方法,所建模型可无损、快速地预测黄芩苷含量,为黄芩配方颗粒的质量控制提供一定的参考.     

降脂颗粒调控UCP2和JNK/c-Jun介导的NLRP3炎症小体活化减轻非酒精性脂肪性肝炎小鼠脂毒性肝损伤

目的:基于炎症小体活化的调控,探讨中药复方降脂颗粒改善非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠脂毒性肝损伤的机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、降脂颗粒组,每组8只。对照组小鼠给予正常饲料;其余小鼠给予蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导NASH,降脂颗粒组小鼠同时灌胃给予0.86 g/kg降脂颗粒溶液。干预6周后,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;HE染色后光镜下观察肝组织形态学变化;PCR检测肝组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)、解偶联蛋白2(UCP2)的mRNA表达水平;Western blot检测肝组织Caspase-1前体与剪切型(pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1)、JNK与c-Jun及其磷酸化的蛋白表达水平。结果:降脂颗粒能够降低MCD饮食诱导的NASH小鼠血清ALT、AST水平,减轻肝组织脂肪变性和炎症细胞浸润。降脂颗粒作用能够显著下调模型小鼠肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18、UCP2的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),降低cleaved-Caspase-1与pro-Caspase-1蛋白表达比值(P<0.01),同时p-c-Jun和p-JNK蛋白表达受到明显抑制(P<0.05)。结论:降脂颗粒可减轻NASH小鼠脂毒性肝损伤,其部分作用机制可能是下调UCP2表达及抑制JNK/c-Jun信号通路激活,进而抑制NLRP3炎症小体的活化。     

NLRP3炎症小体介导血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎症因子IL-1β的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）NLPR3 炎症小体激活与炎症因子白介素-1β （IL-1β）表达的影响。方法体外培养HUVECs,用AngⅡ的不同浓度和刺激时间刺激HUVECs,找到最适合的AngⅡ刺激浓度 与时间。AngⅡ刺激HUVECs前,预用AngⅡ受体阻断剂氯沙坦阻断AngⅡ作用;NAD（P）H抑制剂DPI或H2O2清除剂CAT降 低胞内活性氧（ROS）含量;用caspase-1抑制剂YVAD阻断caspase-1作用;用NLRP3 siRNA沉默胞内NLRP3表达。运用蛋白 印迹法（western blot）分别检测细胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β含量。结果（1）HUVECs在浓度10-9MAngⅡ刺激 12 h后,胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β的蛋白表达显著增加;（2）氯沙坦、DPI、CAT、YVAD和NLRP3 siRNA都可减 轻AngⅡ诱导的上述反应。结论AngⅡ通过促进HUVECs活性氧生成,激活NLRP3炎症小体,促进胞内炎症介质IL-1β P17活 性片段生成增加,诱导血管炎症的发生。     

黄芩苷对脂多糖诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用。 方法 利用LPS建立人单核细胞THP-1的炎症模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitatFive polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相对表达,确定最优的LPS刺激浓度。乳酸脱氢酶检测试剂盒检测黄芩苷的细胞毒性,优选其最佳使用浓度范围。对LPS诱导的人单核细胞THP-1炎症模型予以不同浓度的黄芩苷预处理,利用RT-qPCR法检测黄芩苷对LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高的影响。 结果 与对照组相比,1 μg/mL的LPS处理人单核细胞THP-1 24 h后均可显著引起IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高(P<0.05),黄芩苷在浓度为10、30、100 μmol/L时处理人单核细胞THP-1 24 h和48 h,无明显细胞毒性。30 μmol/L和100 μmol/L的黄芩苷可降低LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高。 结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应。     

阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞Lox-1、TNF-α及ICAM-1表达的影响

目的研究阿托伐他汀(ATV)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响,探讨ATV防治动脉粥样硬化的机制及其抗炎作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,加入ATV干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定LOX-1、TNF-α及ICAM-1mRNA的表达;用Western blotting法测定LOX-1、TNF-α及ICAM-1蛋白表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起LOX-1、TNF-α及ICAM-1的高表达,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),用ATV干预以后显著抑制LOX-1、TNF-α及ICAM-1的表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ATV可抑制LOX-1、TNF-α及ICAM-1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用及抗炎作用的机制之一。     

哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3炎症小体及血清中IL-1β和IL-18表达变化及其意义

目的：观察哮喘患儿外周血单个核细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体表达水平及血清中下游因子白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平变化,探讨其对患儿病情评估的意义。方法：176例哮喘患儿根据临床表现分为急性发作期组（n=91）、慢性持续期组（n=49）和缓解期组（n=36）,同期从门诊体检中心选取健康儿童60名作为对照组,采用肺功能仪检查各组研究对象肺功能。采用实时荧光定量PCR法检测各组研究对象外周血单个核细胞中NLRP3、含有CARD结构域的凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1） mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测各组研究对象血清中IL-1β和IL-18水平。结果：与对照组比较,急性发作期组、慢性持续期组和缓解期组哮喘患儿第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%）和第1秒用力呼气容积所占肺活量比值（FEV1/FVC）均降低,且急性发作期组<慢性持续期组<缓解期组,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA表达水平及血清中IL-1β和IL-18水平均高于对照组（P<0.01）;急性发作期组患儿外周血单个核细胞中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA表达水平及血清中IL-1β和IL-18水平高于慢性持续期组和缓解期组（P<0.05）,且慢性持续期组患儿高于缓解期组（P<0.05）。Pearson相关分析,哮喘患儿外周血单个核细胞中NLRP3 mRNA表达水平与ASC、Caspase-1 mRNA表达水平和血清中IL-1β、IL-18水平均呈正相关关系（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;ASC mRNA表达水平与Caspase-1 mRNA表达水平和血清中IL-1β、IL-18水平呈正相关（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;Caspase-1 mRNA表达水平与血清中IL-1β和IL-18水平呈正相关关系（P<0.05）,而与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;血清中IL-1β水平与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）;IL-18水平与FEV1%和FEV1/FVC呈负相关关系（P<0.05）。结论：哮喘患儿外周血NLRP3炎症小体及下游因子IL-1β和IL-18水平升高,且与哮喘患儿的临床分期有关,NLRP3炎症小体通路可能促进了儿童哮喘的发病过程。