汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性抗原的检测

目的通过检测汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性病毒抗原,以建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将汉坦病毒陈株按照原病毒液、10-1、10-2三个滴度经肌肉注射感染C57BL/6小鼠,在感染后的第3、6、9、12、15天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原。结果 C57BL/6小鼠感染汉坦病毒后短期内在其肝脏和脾脏可以检测到特异性抗原,随着时间的延长,这些抗原逐步消失。结论上述结果为建立汉坦病毒感染动物的评价体系提供了一种参考。     

汉滩病毒感染SCID小鼠动物模型的建立

目的通过检测汉滩病毒(HTNV)76-118株感染SCID小鼠组织中的特异性病毒抗原、核酸的分布以及病理学变化,以建立汉滩病毒感染动物的评价体系。方法取汉滩病毒76-118株病毒液通过肌肉注射接种SCID小鼠,接种3 d后,取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织,并分别利用ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原;利用q RT-PCR法检测各组织中的病毒RNA;利用HE染色法检测各组织中的病理学变化。结果SCID小鼠感染汉滩病毒后,用夹心ELISA法可在其心、肝、脾、肺、肾组织中检测到HTNV特异性抗原,平均P/N值分别为2.33、7.41、8.13、7.40、2.89,其中脾病毒抗原含量最高;以q RT-PCR法检测小鼠各脏器组织中的HTNV核酸,在实验组小鼠的心、肝、脾、肺、肾中均可检测到病毒核酸,与对照组相比,其相对量分别达到2~(2.11)、2~(6.23)、2~(8.21)、2~(5.26)、2~(3.79)倍,其中脾病毒核酸含量最多;HE染色法可见肝、脾、肺中伴有显著的病理学变化。结论成功检测了汉滩病毒感染SCID小鼠后组织中特异性抗原、核酸的分布以及病理学变化,从而为建立汉滩病毒感染动物的评价体系提供一种参考。     

普通小鼠和裸小鼠呼吸道合胞病毒感染模型比较

目的：比较研究BALB／c小鼠和裸小鼠呼吸道合胞病毒（RSV）感染模型的特点，建立理想的动物模型。方法：BALB／c鼠和裸鼠感染RSV后不同时间空斑形成实验检测肺组织病毒滴度，计数支气管肺泡灌洗液白细胞总数和分类情况，免疫荧光和免疫组化检测RSV抗原，光镜和电镜检查肺组织病理学改变。结果：感染后裸鼠肺组织RSV滴度明显高于BALB／c鼠，两者都在第3天达峰值，带毒时问分别为大于9天和6天，免疫组化和免疫荧光检测到RSV抗原，支气管肺泡灌洗液和肺组织病理学检查表现的以淋巴细胞浸润为主的炎症反应，裸鼠明显重于BALB／c鼠。结论：裸鼠和BALB／c鼠RSV感染特点相似，感染程度更重，有利于抗RSV药物效果评价，是较理想的RSV感染小鼠模型。     

陈株病毒抗原在隐性感染小鼠组织中定位的研究

目的:研究汉坦病毒抗原在隐性感染小鼠体内各脏器组织中的定位与分布特点。方法:以陈株汉坦病毒腹腔感染成龄昆明系小鼠,取其心、肝、脾、肺、肾等内脏组织,用免疫组化多重PAP法对病毒抗原进行检测。结果:感染小鼠的肝脏与肺脏是病毒抗原检测阳性率最高的脏器,心脏与脾脏病毒抗原呈阴性分布,肾脏与小肠病毒抗原亦可呈阳性,但阳性率较低。病毒抗原定位于感染细胞的胞浆,主要分布于感染小鼠的血管内皮细胞、肝细胞和肺泡上皮细胞等。结论:(1)肝脏与肺脏是成龄小鼠最易受HV病毒侵犯和寄生的脏器;(2)HV病毒抗原在感染小鼠体内的组织分布与在EHF病人体内的组织分布特点不同,这很可能是成龄小鼠感染HV病毒不发病的原因之一。     

小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法的建立及初步应用

目的 建立小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法并对方法进行初步应用。方法 根据NCBI发表的TMEV GD VII株(GI:62039)基因组序列设计特异引物,建立RT-PCR方法,验证方法的敏感性和特异性;脑腔接种方式感染9只BALB/c小鼠,感染后第6天采集动物的脑、心、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物和血清等样本,用建立的方法进行检测;同时检测100份小鼠盲肠内容物样本,对方法进行初步应用。结果 以GD VII RNA为模板,建立的RT-PCR方法能够扩增出约371bp的单一目的条带,敏感性验证显示能够检测到的最低GD VII cDNA量为0.69pg/μL;以脑心肌炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、日本乙型脑炎病毒、小鼠诺如病毒及正常小鼠脑组织为对照进行方法特异性验证,均未出现目的条带。脑腔接种感染小鼠,所有小鼠在接种第3天均产生不同程度的精神萎靡后肢麻痹等症状,其中2只小鼠于第5天死亡;采集心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠内容物及血清等样本进行检测,所有小鼠的脑组织均检测到GD VII RNA,而其他组织均未检测到;对100份小鼠盲肠内容物进行检测,结果均为阴性。结论 建立的TMEV GDVII株RT-PCR方法能够高效的检测小鼠组织中的病毒感染,可作为实验动物国家标准的有力补充。     

柯萨奇病毒B_3致病模型的建立

目的 :建立柯萨奇病毒 (CV)B3 的实验动物模型 ,以期为抗病毒药物筛选提供工具。方法 :雄性BALB/C鼠腹腔注射CVB3 后 ,观察小鼠发病症状 ,并在不同时间处死小鼠 ,取小鼠心、脾、肝、肾等组织进行病毒分离、病毒核酸检测、心肌组织病理检查。结果 :感染后第 3d小鼠即出现症状 ,第 5d在小鼠的心脏、脾脏、肾脏均可分离出感染性病毒 ,其滴度分别为 :10 4 .7,10 3.3 ,10 3.2 TCID50 / 0 .1ml,同时小鼠心、脾、肾、等组织及血清中CVB RNA检测为阳性 ,心肌组织出现典型炎性改变。结论 :雄性BALB/C鼠感染CVB3 后可引起病毒性心肌炎发生     

恶性疟原虫FCC1／HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究

目的：用恶性疟原虫FCC1／HN株CSP基因表达产物免疫小鼠，观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况。方法：提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物，免疫注射BALB／c小鼠。取免疫后4周及7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉，通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原。结果：免疫7周后的BALB／c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原－抗体反应，而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应。结论：恶性疟原虫FCC1／HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别，其免疫后的抗原分布主要在肝脏。     

HFRSV感染NIH裸鼠抗原定位研究

目的探讨肾综合征出血热病毒感染NIH裸鼠抗原在各脏器的分布情况，观察其分布规律。方法经裸鼠腹腔注射肾综合征出血热病毒液，裸鼠发病后，濒死状态处死，进行免疫组织化学、电镜和光学显微镜观察。结果感染肾综合征出血热病毒裸鼠，其肺、脑、肾、肝、心脏和脾组织内均检测到特异性抗原，抗原主要分布于细胞浆，以高尔基器及其周围囊泡较多。结论肾综合征出血热病毒感染NIH裸鼠，病变可广泛侵犯裸鼠各组织器官，导致细胞损伤。     

恶性疟原虫FCCL/HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究

目的用恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫小鼠,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况.方法提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物,免疫注射BALB/c小鼠.取免疫后4周及7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉,通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原.结果免疫7周后的BALB/c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原-抗体反应,而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应.结论恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别,其免疫后的抗原分布主要在肝脏.     

实验小鼠感染诺如病毒后组织病理变化及病毒含量分析

目的研究常用实验小鼠在人工感染小鼠诺如病毒后组织病理改变及病毒含量变化情况。方法使用KM、BALB/c、NIH、C57BL/6及BALB/c-nu等五个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组以灌胃方式接种小鼠诺如病毒液,对照组灌同等体积生理盐水,分别在感染后第7、14、21、28、55天采集肝、脾、肺、盲肠、结肠及小肠,每个组织取2份,分别进行病理诊断及病毒核酸含量检测,最后对结果进行汇总分析。结果肝、脾、肺病理改变总发生率分别为8%(10/125)、5.6%(7/125)和4%(5/125),盲肠、结肠及小肠均未发现病变,其中KM及BALB/c小鼠病变主要发生在肝、脾和肺,C57BL/6小鼠主要在肝和肺,NIH及BALB/c-nu小鼠主要在肝和脾。在所观察的实验鼠中KM小鼠较易发生肺的病变; KM及NIH小鼠发生病变较早,C57BL/6小鼠较晚。所有实验鼠盲肠、结肠MNV核酸阳性率均为100%(125/125),小肠、肝、脾、肺及血阳性率分别为71.2%(89/125),17.6%(22/125),39.2%(49/125),3.2%(4/125)和1.6%(2/125);病毒含量比较盲肠结肠小肠脾肺肝; BALB/c-nu小鼠结肠病毒含量显著高于其他品系小鼠(P0.01),其它品系小鼠各组织病毒含量无统计学差异; C57BL/6小鼠在感染MNV第14天盲肠及结肠病毒含量达峰值(P0.05),其它品系小鼠不同时间点病毒含量无统计学差异;组织器官病理检查及病毒核酸检测结果之间无相关性。结论小鼠诺如病毒感染会引起组织病变,建议进行病理有关的动物实验选择MNV阴性小鼠。     

抑制LSD1酶活性对HBV模型小鼠的作用

目的研究组蛋白赖氨酸去甲基化酶1（LSDl）酶活性下降对乙型肝炎病毒（HBV）模型小鼠的作用。方法尾静脉高压注射重组HBVl．3质粒建立HBV小鼠模型;将雌性BALB／c小鼠随机分为正常组、模型组、LSDl小干扰RNA（siRNA）处理组和反苯环丙胺（TCP）治疗组。取各组小鼠外周血,通过酶联免疫吸附试验、全自动微粒子化学发光法和Real—TimePCR检测小鼠体内乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）和HBVDNA的表达;免疫组织化学法检测HBsAg在肝脏中的分布;Western blotting检测小鼠脾淋巴细胞LSDl的表达。结果HBV模型小鼠造模成功;LSDlsiRNA处理组和TCP治疗组小鼠HBsAg、HBVDNA和LSDl的表达水平均较模型组明显下降（P〈0．01）,肝组织中HBsAg的分布也明显减少。结论抑制LSDl酶活性对HBV模型小鼠体内HBV的清除有一定的作用。     

病毒性心肌炎小鼠细胞外信号调节激酶表达变化及其意义

目的：探讨病毒性心肌炎小鼠细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的表达变化及其意义。方法：105只清洁级近交系4～6周龄雄性Balb/C小鼠,随机分为两组,正常对照组40只和心肌炎组65只。心肌炎组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3复制心肌炎动物模型。在病毒接种后第1、第3、第5、第7和第14天,每组各取8只,留取血清及心脏标本。采用HE染色及电镜观察心肌组织学改变,化学发光免疫法测定血清心肌肌钙蛋白-I（cardiac troponin,cTn-I）含量,Western-blot及免疫组化法检测心肌组织中磷酸化ERK含量,Pearson等级相关分析磷酸化ERK和心肌组织炎症积分、血清cTn-I含量之间的关系。结果：心肌炎组小鼠在病毒接种后第3天出现炎症细胞浸润,炎症积分于第7天达到高峰;心肌损伤标志物血清cTn-I在病毒接种后第3天出现升高,于第5天达到峰值,然后逐渐下降;小鼠在病毒接种后第1、第3、第5天磷酸化ERK含量明显增加,伴核转位,第7天减弱至接近正常对照组水平,第14天磷酸化ERK含量又复增加,表现为早期和晚期2次活化;相关分析结果显示,磷酸化ERK水平和血清cTn-I含量成正相关,和炎症积分之间则无明显相关性。结论：病毒性心肌炎小鼠心肌组织的ERK表现为早、晚期两个活化阶段,这可能和病毒早期所致的心肌损伤及晚期疾病进展有关。     

Tracing of the viral antigens by gold－labelled antibodies in the experimentally infected suckling mice with Chen strain hemor

Ｔｒａｃｉｎｇｏｆｔｈｅｖｉｒａｌａｎｔｉｇｅｎｓｂｙｇｏｌｄ－ｌａｂｅｌｌｅｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙｉｎｆｅｃｔｅｄｓｕｃｋｌｉｎｇｍｉｃｅｗｉｔｈＣｈｅｎｓｔｒａｉｎｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅ...     

血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究

目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。     

抗鼠疟iRNA体外传递疟原虫抗原特异性白细胞粘附抑制反应

疟疾免疫是一个复杂而重要的问题,其中细胞免疫的作用正受到越来越多的重视。免疫核糖核酸(iRNA)能够传递特异性免疫反应,并己开始用于某些疾病的预防和治疗。故本实验制备了抗约氏疟原虫(Plasmodium yoelii yoelii)iRNA,通过白细胞粘附抑制(LAI)试验,观察其体外传递特异性细胞免疫反应的效应,以期将iRNA用于疟疾免疫机理的探讨和实际应用。     

柯萨奇病毒B_3感染小鼠心肌的病毒核酸与炎症变化之间的关系

[目的 ]研究柯萨奇病毒感染的心肌炎模型小鼠的心肌中病毒核酸与炎症变化之间的关系 .[方法 ]应用聚合酶链反应 ,于感染后 1,3,5,7,10 ,14,2 1,30d ,对 58只实验组和 32只对照组的BALB/C小鼠心肌进行柯萨奇病毒B3 RNA检查 ,并观察心肌病理变化 .[结果 ]实验组小鼠心肌柯萨奇病毒B3 RNA在感染后 3～ 30d呈阳性 ,对照组心肌柯萨奇病毒B3 RNA均阴性 .感染后 3 30d心肌聚合酶链反应与病理学两种检查结果相一致 .[结论 ]心肌中柯萨奇病毒B3 RNA的存在与心肌炎症变化之间有密切的关系 .     

中、重症呼吸道合胞病毒感染BALB／c小鼠模型的实验研究

目的建立呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染的中、重症小鼠模型．方法采用RSV原液（TCID50为10～4．2／100μL）及100TCID50RSV液滴鼻感染BALB／c小鼠,于感染后第3、5、7、9d处死小鼠,进行病毒分离、病理光镜及电镜检查．结果（1）RSV原液组（实验Ⅰ组）的病毒分离阳性率明显高于100TCID50RSV液组（实验Ⅱ组）,二者差异有统计学意义（P〈0．01）;（2）光镜下实验Ⅰ组肺泡壁明显增厚,毛细血管扩张充血,有较多的淋巴细胞浸润,以Ⅲ级炎症为主;实验Ⅱ组病变较实验Ⅰ组减轻,Ⅲ级炎症面积及炎性细胞浸润支气管百分数少于实验Ⅰ组,差异有统计学意义（P〈0．05）;病变以第5天最重,第7天以后开始减轻;（3）电镜下实验Ⅰ组可见肺泡Ⅰ型、Ⅱ型上皮细胞及毛细血管内皮细胞肿胀,肺泡隔水肿,淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞浸润;实验Ⅱ组病变轻于实验Ⅰ组．结论用RSV原液可以成功地建立中、重症的RSV感染的动物模型．     

人H7N9禽流感病毒、高致病H5N1禽流感病毒及H1N1流感病毒感染小鼠特征分析

目的 对比分析人高致病H5N1禽流感病毒、H7N9禽流感病毒及H1N1流感病毒分别感染BALB/c小鼠后的机体反应特征。方法 分别以H7N9病毒、H5N1病毒和H1N1病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠存活率、体征变化及感染后肺组织病理损伤差异,检测小鼠感染流感病毒后肺组织增殖细胞核抗原（PCNA）表达并观察小鼠感染后修复状况。结果 H7N9病毒、H5N1病毒和H1N1病毒均感染BALB/c小鼠,小鼠存活率依次为H7N9>H1N1>H5N1,肺组织病理损伤严重程度依次为H5N1 >H1N1 >H7N9,PCNA表达水平依次为H7N9 >H1N1 >H5N1。结论 H7N9病毒感染后宿主炎症反应较小,感染后小鼠肺组织自我修复能力较强;H5N1病毒感染BALB/c小鼠后的机体反应最为强烈,感染后恢复能力差,致死率高。     

EV71临床分离株BALB/c小鼠致病特点分析

目的 将肠道病毒71型(EV71)临床分离株接种小鼠观察其致病特点.方法 将6株EV71临床株分别腹腔接种1日龄BALB/c小鼠,观察小鼠表现以及脑、肺脏、骨骼肌组织病理变化;采用免疫组化和RT-PCR方法,检测组织中病毒抗原和基因片段.结果 临床分离的6株EV71(C4亚型)接种1日龄小鼠均出现病症,其中JN200804株实验小鼠症状较重,小鼠脑组织和骨骼肌可观察到细胞空泡变性、淋巴细胞浸润等病理变化;JN200804株感染组小鼠脑内检测到EV71抗原和基因片段.结论 6株EV71临床株均可感染小鼠并致病,重者出现松弛型麻痹并死亡,轻者出现震颤、麻痹但可恢复至正常.