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1.
抗肝癌单链抗体融合人突变型TNFalpha的构建与表达 总被引:4,自引:1,他引:3
目的鼠/人源化抗人肝癌单链抗体(m/hscFv25)融合人突变型TNFα(mTNFα)原核表达载体的构建及表达.方法用Oligo软件分析并设计人mTNFα的5及3端引物,化学合成并用PCR方法扩增mTNFα,经限制性内切酶酶切后,连接在原核表达载体pGEX4T-1中的m/hscFv25之后,构建成pGEX4T-1/m/hscFv25-mTNFα融合蛋白表达载体,转化大肠杆菌JM109后,通过IPTG诱导进行目的蛋白的初步表达.结果经DNA电泳分析表明,mTNFα基因全长约460 bp,并通过酶切鉴定证明成功构建了抗人肝癌单链抗体融合mTNFα的原核表达载体,融合蛋白产物经SDS-PAGE显示,相对分子质量(Mr)为68 000的蛋白谱带,与预期设计完全一致,光密度扫描结果表明,GST-mscFv25-mTNFα和GST-hscFv25-mTNFα融合蛋白分别占菌体总蛋白的15%和12%,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在.结论成功构建并表达了鼠/人源化抗人肝癌单链抗体融合人mTNFα的双功能抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研究HCC的治疗奠定了基础. 相似文献
2.
抗肝癌人源化单链抗体融合肿瘤坏死因子a的导向作用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 获得有临床应用潜力的人源化抗肝癌基因工程双功能抗体。方法 将鼠源性抗肝癌单克隆抗体HAb25的人源化单链抗体(hscFv25)基因与人TNF(基因偶连构建抗肝癌双功能抗体(hscFv25-TNF a),亚克隆入原核GST融合表达载体pGEX 4T-1中,在大肠杆菌中进行表达并纯化目的蛋白。对肝癌SMMC-7721细胞涂片进行间接免疫荧光染色测定纯化后的基因重组双功能抗体蛋白活性。MTT实验测定hscFv25-TNF a对靶细胞SMMC-7721杀伤活性。荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠体内的初步抑瘤实验检测hscFv25-TNF a的导向治疗效果。结果 hscFv25-TNF a具有与亲本抗体HAb25相同的抗原结合特异性。1h预处理的MTT实验显示,hscFv25-TNF a对靶细胞SMMC-7721具有明确的杀伤作用,其IC50值为7.1mg/L。且该杀伤作用可被亲本抗体HAb25所封闭,表明hscFv25-TNF a对靶细胞的杀伤作用是抗体hscFv25介导的选择性杀伤作用。hscFv25-TNF a对荷肝癌裸鼠体内直径3.0mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用,有效率达到3/3,1/3完全缓解,强于TNF a对照组,该组有效者只有2/3,同时无完全缓解。结论 hscFv25-TNF a是具有一定临床应用潜力的抗肝癌双功能抗体。 相似文献
3.
目的 了解热休克蛋白72(HSP72)在培养角质形成细胞中的表达情况。方法 无血清培养基培养原代角质形成细胞,免疫组织化学(SABC)及核酸原位杂交技术检测HSP72的表达。结果 角质形成细胞的细胞中常见阳性染色,少数大细胞中HSP72表达增强,集中在细胞核周围。结论:普通条件培养的皮肤角质形成细胞即可构成性表达HSP72,可能对维持角质形成细胞的正常功能和活性方面个有重要作用。 相似文献
4.
目的: 检测乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中乙型肝炎病毒X基因(HBx)及截短型乙型肝炎病毒表面抗原(MHBst)mRNA的表达, 探讨HBx、 MHBst在HBVGN发生中的意义.方法: 采用原位杂交的方法对40例HBVGN患者的肾组织进行HBx、 MHBst mRNA检测.结果: HBVGN患者肾组织中存在HBx、 MHBst mRNA, HBx、 MHBst mRNA主要分布于肾小管上皮细胞的胞质内, 少数肾小球上皮、内皮、系膜细胞的胞质内也有分布; 肾小管上皮细胞内HBx、 MHBst mRNA阳性率分别为82.5%(33/40)、 80%(32/40), 肾小球内HBx、 MHBst mRNA阳性率分别为30%(12/40)、 22.5%(9/40), HBx、 MHBst mRNA在肾小管上皮细胞的表达明显高于肾小球(P<0.01).结论: 在HBVGN肾组织, 特别是在肾小管上皮细胞的胞质存在HBx、 MHBst mRNA的表达, 提示HBV感染及其基因整合可能在HBVGN发生中有一定意义. 相似文献
5.
抗肝癌单链抗体融合TNFα导向作用的初步实验研究 总被引:11,自引:4,他引:7
目的 获得有效果的抗肝癌基因工程单链免疫细胞因子(TNFα)。方法 将抗肝癌单克隆抗体(mAb)HAb25的单链抗体(scFv25)与人TNFα基因偶联,构建抗肝癌免疫细胞因子(scFv25-TNFα,亚克隆人原核GST融合表达载体pGEX4T-1中,在大杆菌中进行表达。对肝癌细胞SMMC-7721涂片进行间接免疫荧光染色,测定纯化后目的蛋白的活性,通过对荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠进行的初步抑瘤实验,检测scFv25-TNFα的导向治疗效果。结果scFv25-TNFα具有与亲本抗体HAb25类似的抗原结合特异性。scFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径2mm左右的肿瘤具有明确的导向杀伤作用,达到3/3完全缓解,明显强于TNFα对照组。该组有交待得只有2/3,且无完全缓解。结论 scFv250-TNFα为具有一定效果的抗肝癌双功能抗体。 相似文献
6.
目的研究特发性膜性肾病(IMN)肾组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及意义.方法对15例IMN肾活检组织进行α-SMA免疫组化染色,染色结果半定量评分,并与相应肾小球及间质损伤程度比较.结果各期IMN肾小球及间质α-SMA表达均增高,并分别与肾小球损伤程度正相关(r=0.628,P<0.05),与间质损伤程度显著正相关(r=0.932,P<0.01).结论肾组织固有细胞-肌成纤维细胞转分化在IMN进行性进展中具有重要意义. 相似文献
7.
抗体是一种免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。抗体工程指的是抗体的人工改造、构建与重组。如同桥梁工程、水力工程是人力对桥梁及水力的构建与改造一样。抗体工程可以分为两种,一种是抗体化学工程,如抗体的标记,抗体与亲合物质结合以及EnVision法等。一般所谓抗体工程是指抗体的基因工程,是通过基因操作、扩增、酶切、连接、构建以及重组来实现的。乍看起来,抗体工程与病理学,特别是诊断病理学,并不那么亲切。但是,实地考查起来,它们之间也不那么遥远,而且随科学的发展,正让它们越走越近。 相似文献
8.
Fabry肾病临床病理观察 总被引:2,自引:0,他引:2
目的阐明具有肾损害的Fabry病的临床病理特点。方法回顾性分析2例具有肾损害的Fabry病患者的临床表现,并对其肾活检组织进行光镜、免疫荧光及超微结构观察。结果2例患者出现蛋白尿、慢性肾功能不全/慢性肾炎;光镜下可见肾小球脏层上皮细胞空泡变性,远端肾小管上皮细胞、肾小球内皮细胞及系膜细胞、间质成分也可出现泡沫样变;病变晚期,肾小球出现节段性和/或球性硬化;超微结构显示肾小球脏层上皮细胞内具有嗜锇性髓鞘样包涵体,表现为“斑马”样外观。结论Fabry病少见。具有肾损害的患者临床可出现蛋白尿,晚期常发展为肾功能衰竭,肾小球脏层上皮细胞内出现嗜锇性髓鞘样小体是Fabry病特征性的形态学改变。 相似文献
9.
10.
本文报道用临床手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB/c小鼠与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,在筛选过程中获得一株抗血管内皮细胞的单克隆抗体。该细胞株稳定地在体外连续培养四个月。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的切片染色,不需胰酶消化。经A.B.C法免疫组化染色证明,对全身各脏器血管内皮细胞定位以及30例各种类型血管瘤的内皮细胞染色均呈阳性反应。对起源于内皮细胞的5例血管内皮细胞肉瘤定位4例阳性,1例为阴性。而对血管外皮细胞肉瘤却大部份呈阴性反应。与内皮细胞以外的组织无交叉反应。提示此抗体能识别的抗原可能是Ⅷ因子相关抗原,它对起源于血管的软组织肿瘤的鉴别诊断及免疫组化定位有一定的应用价值。 相似文献