季德胜蛇药对小鼠树突状细胞功能的影响

目的:观察季德胜蛇药对小鼠树突状细胞(DCs)功能的调节作用.方法:48只BALB-c小鼠随机分为4组,每组各12只,分别为正常对照组、环磷酰胺模型组、治疗1组、治疗2组.各组均以灌胃给药,2次/d,连续21 d,正常对照组和造模组给予同体积的0.9％氯化钠液,治疗组分别给予相应剂量的蛇药治疗.给药第15天起,除正常对照组外各组小鼠均予以环磷酰胺30 mg/kg皮下注射,连续7d制备免疫功能低下模型.比较4组间DCs表型、DCs功能和细胞因子白介素12(IL-12)的浓度.结果:与模型组比较,治疗组小鼠DCs的表面分子主要组织相容性抗原复合物(MHC)-Ⅱ、CD11c的表达水平显著升高、刺激T淋巴细胞增殖的能力以及分泌IL-12均显著增强.结论:季德胜蛇药可提高免疫抑制小鼠树突状细胞的免疫功能.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人外周血CD4+T细胞Th1/Th2分化的影响

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)和丁酸钠(NaB)对人外周血CD4+T细胞向Th1/Th2分化的影响。方法体外分离并培养人外周血CD4+T细胞,分为TSA组(0.33μmol/L)、NaB组(1.4 mmol/L)和对照组(CON组)。采用MTT、流式细胞术、qRT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TSA组、NaB组及对照组细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平及IFN-γ+细胞/IL-4+细胞比值。结果外周血CD4+T细胞在植物血凝素(PHA)刺激48 h后,ELISA检测细胞培养上清显示:TSA组、NaB组上清IFN-γ、IL-4分泌水平均明显高于对照组(P<0.05)。qRT-PCR检测显示:TSA组、NaB组IFN-γmRNA表达高于对照组,相比对照组提高到(3.12±0.34)、(2.3±0.51)倍,差异有统计学意义(P<0.05);IL-4 mRNA提高到(1.87±0.42)、(1.63±0.51)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术对胞内因子检测显示:TSA组、NaB组IFN-γ+细胞/IL-4+细胞比值明显升高,是对照组的1.93、1.55倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TSA、NaB暴露可引起人外周血CD4+T细胞Th1/Th2分化平衡改变,出现向Th1方向的"Th1/Th2平衡的漂移"。     

早期B细胞因子3对HepG2细胞周期的影响

目的:克隆人早期B细胞因子3 (EBF3)基因,构建真核表达载体pEGFP/EBF3,研究人EBF3对肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响.方法:提取人胎盘组织总RNA,采用RT-PCR技术克隆人EBF3基因,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1,重组质粒双酶切鉴定,并进行序列测定.将重组质粒转染HepG2细胞,Western blot确证EBF3-EGFP融合蛋白的表达及亚细胞定位,流式细胞术分析转染细胞周期.结果:成功获得全长人EBF3基因,经双酶切和序列测定鉴定,真核表达质粒pEGFP/EBF3构建正确,将pEGFP /EBF3导入HepG2细胞24小时后,在倒置荧光显微镜下可观察到EBF3-EGFP融合蛋白主要表达于核内.Western blot证实转染pEGFP/EBF3后24小时和48小时细胞质和细胞核中均检出相对分子质量(Mr)为87 000的EBF3-EGFP融合蛋白.转染pEGFP/EBF3后48小时和72小时,S期细胞比例均明显高于pEGFP-N1转染细胞组,表明EBF3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展,从而促进细胞增殖.结论:成功构建了真核表达质粒pEGFP/EBF3,pEGFP /EBF3转染组S期细胞比例高于pEGFP-N1转染组,提示EBF3对人肝癌细胞株HepG2细胞有促进增殖作用.     

慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T淋巴细胞对树突状细胞的作用

高效的特异性CTL反应是机体清除HBV的关键,树突状细胞(DC)在诱导特异性抗HBV免疫的过程中发挥非常重要的作用[1-2].近年来的研究发现,慢性乙型肝炎(CHB)患者体内的DC存在功能缺陷,可以影响Th1/Th2分化,进而使患者体内CTL反应不足[3-4],但是导致DC出现功能缺陷的确切机制尚不清楚.     

活化的类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4诱导Th17细胞分化

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs) Toll样受体4(TLR4)通过诱导Th17细胞分化参与RA疾病发生发展的意义.方法 采集22例RA患者和20名健康对照外周血,流式细胞术检测Th17细胞频率,脂多糖刺激PBMCs 2 d,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PBMCs TLR4 mRNA水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.收集上清液与CD4+脐带血单个核细胞(CBMCs)培养3d,RT-qPCR检测CBMCsIL-17 mRNA水平.ELISA检测上清液IL-17含量.统计学处理采用成组t检验.结果 与健康对照组比较,RA患者Th17细胞频率[(0.53±0.14)％与(1.57±0.68)％]、TLR4 mRNA显著升高(P均＜0.01);PBMCs经脂多糖刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.5倍,而健康对照组下降到0.11倍;RA患者PBMCs产生的IL-6、TNF-α较健康对照组明显增加(P＜0.01);RA患者PBMCs上清液诱导CD4+CBMCs IL-17 mRNA水平、IL-17含量与健康对照组相比均显著升高(P＜0.01);而未经脂多糖刺激,2组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者PBMCs的TLR4表达及对脂多糖的刺激的反应性增加,且具有较强的诱导Th17细胞分化能力.     

肥胖对小鼠乙肝疫苗免疫效果影响研究

目的通过检测肥胖小鼠的乙肝疫苗接种效果和免疫系统功能,探讨肥胖影响乙肝疫苗预防效果的免疫学机制。方法对WNIN/Ob肥胖小鼠(突变型)和正常体重小鼠(野生型)接种4μg乙肝疫苗(3,4月),第二针接种7d后,流式细胞检测脾脏细胞中总T细胞及T细胞亚群的比例,MTT法检测脾脏淋巴细胞对刀豆球蛋白A(ConA)、乙肝表面抗原(HBsAg)的增殖试验,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗-HBs浓度。脂多糖(LPS)刺激腹腔巨噬细胞,上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)浓度分别用ELISA和Griess法检测。结果与正常组相比,肥胖组小鼠脾脏中总T细胞和Th细胞比例下降(P<0.05)、血清抗-HBs降低(P<0.05)、脾脏淋巴细胞对ConA、HBsAg的增殖率都降低(P<0.05)。腹腔巨噬细胞上清液中NO、TNF-α浓度差异有统计学意义(P<0.05)。结论肥胖小鼠先天性免疫和特异性免疫功能均受损,导致对乙肝疫苗免疫应答降低。     

抑制LSD1酶活性对HBV模型小鼠的作用

目的研究组蛋白赖氨酸去甲基化酶1（LSDl）酶活性下降对乙型肝炎病毒（HBV）模型小鼠的作用。方法尾静脉高压注射重组HBVl．3质粒建立HBV小鼠模型;将雌性BALB／c小鼠随机分为正常组、模型组、LSDl小干扰RNA（siRNA）处理组和反苯环丙胺（TCP）治疗组。取各组小鼠外周血,通过酶联免疫吸附试验、全自动微粒子化学发光法和Real—TimePCR检测小鼠体内乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）和HBVDNA的表达;免疫组织化学法检测HBsAg在肝脏中的分布;Western blotting检测小鼠脾淋巴细胞LSDl的表达。结果HBV模型小鼠造模成功;LSDlsiRNA处理组和TCP治疗组小鼠HBsAg、HBVDNA和LSDl的表达水平均较模型组明显下降（P〈0．01）,肝组织中HBsAg的分布也明显减少。结论抑制LSDl酶活性对HBV模型小鼠体内HBV的清除有一定的作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞的表达及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血Th17细胞频率、血清IL-17水平及其与临床指标的相关性。方法采集29例CHB患者(CHB组)及17例健康体检者(对照组)外周血,采用流式细胞仪分析外周血Th17细胞频率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清IL-17水平及HBV标志物;荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果 CHB组患者外周血Th17细胞频率、血清IL-17水平高于对照组(P<0.05);CHB组患者外周血Th17细胞频率与其血清ALT水平正相关(r=0.582,P<0.01),而与血清HBV DNA载量无明显相关(r=-0.213,P>0.05)。结论 Th17细胞可能参与了CHB的发生、发展。     

人工组织神经移植物桥接狗坐骨神经缺损后的机体免疫功能反应

目的：观察机体免疫系统对人工组织神经移植物的反应。方法：将人工组织神经移植物桥接到狗的坐骨神经缺损处，并在术前和术后6个月时分别取血，进行淋巴细胞转化试验、E花环试验，同时光镜观察术后6个月时再生神经中白细胞浸润的情况。结果：人工组织神经移植物植入后未见排斥反应产生。结论：人工组织神经移植具有较好的生物相容性。     

小鼠TIL,LAK细胞穿孔蛋白mRNA表达与其抗瘤作用的关系

用原位杂交法检测小鼠不同培养时期的ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞中穿孔蛋白（ＰＦＰ）ｍＲＮＡ的表达，并用显微图象分析系统处理检测ＰＦＰＭＲＮＡ表达水平。结果表明：ＴＩＬ细胞的ＰＦＰＭＲＮＡ表达在第１４、２１天时达高峰，２８天时开始下降；而ＬＡＫ细胞则在第６７天时即达到较高水平，２１天时开始下降，但ＴＩＬ细胞的表达水平显著高于ＬＡＫ。将同时期的ＴＩＬ及ＴＡＫ细胞进行体内外抗瘤活性测定，发现两者的ＰＦＰｍＲＮＡ水