GALV致融性糖蛋白转导肺腺癌细胞的抗肿瘤实验研究

目的 探讨特异性启动子控制下嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)载体介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因转导肺腺癌细胞的抗肿瘤作用.方法 将重组HSV-Ⅰ载体质粒通过脂质体导入非洲绿猴肾细胞(Vero)中包装制备重组HSV-Ⅰ病毒,用来转染肺腺癌细胞(A549)和正常人胚胎成纤维细胞(HFL-Ⅰ GNHu 5)及裸鼠皮下肺癌转移模型,观察其体外及体内抗肿瘤作用及细胞毒性作用.统计学方法采用t检验.结果 成功包装重组HSV-Ⅰ病毒, BALB/c 裸鼠皮下接种A549细胞2周后均有肿瘤生长,成瘤率为100%.重组单纯疱疹病毒能特异性转染A549细胞,治疗组及对照组细胞存活率分别为20%及70%,病毒对A549细胞有明显的杀灭作用且对裸鼠皮下肺癌转移灶抑制明显.结论 GALV.fus基因对肺癌细胞有强效的抗肿瘤作用,为临床肺癌治疗探索出一种新型基因治疗方法.     

携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒-Ⅰ的构建及抗肺腺癌裸鼠荷瘤实验研究

目的 探讨重组单纯疱疹病毒-Ⅰ(HSV-Ⅰ)介导的长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(GALV.fus)基因系统对肺腺癌的体内外杀伤效果.方法 扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVPGALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤HSV-Ⅰ,分...     

双融膜嗜肿瘤病毒对肺腺癌细胞的杀伤效果研究

目的:构建双融膜嗜肿瘤病毒,并观察其杀伤肺癌细胞的效果.方法:将长臂猿白血病病毒融膜糖蛋白基因(Fusogenic glycoprotein gene of gibbon ape leukemia virus,GALV.fus)构建入嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 1,HSV-1)中,使其成为具有双重融细胞膜作用的嗜肿瘤病毒(Doubly fusogenic oncolytic herpes simplex virus,Synco-2D).与单一的重组嗜肿瘤病毒HSV-1比较,在显微镜下观察两种嗜肿瘤病毒融细胞现象,并观察其体外杀伤肺腺癌细胞A549的效率及体内对肿瘤生长的抑制作用.结果:显微镜下发现,双融膜病毒融细胞作用更明显,大量多核巨细胞形成,细胞结构模糊,细胞溶解.体外实验显示,两种病毒都有明显的杀死肿瘤细胞效果,双融膜嗜肿瘤病毒杀伤肿瘤细胞率较单一的HSV-1明显增强.体内动物实验显示双融膜嗜肿瘤病毒对肿瘤组织的生长有显著的抑制作用.结论:将融膜糖蛋白基因GALV.fus构建入嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒中,可以显著增强病毒杀伤肺腺癌细胞效力.     

携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定

目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus Ⅰ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因质粒(HSV-UL38P-GALV.fus),无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus质粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治疗对照质粒(HSV-CMVP-EGFP),分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1.方法:扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒.重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法.Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达.结果:成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml,1×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml.受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达.结论:成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达.     

两种建立人睑板腺癌动物模型的方法比较

目的 研究建立人睑板腺癌动物模型的方法,对比不同的方法对成瘤率的影响,为睑板腺癌的体内实验提供平台.方法 分别采用细胞悬液法和组织块移植法接种人睑板腺癌于BALB/C裸鼠体内,细胞悬液组和组织块组各接种裸鼠30只.观察两组移植瘤的成瘤率及生物学特性.结果 细胞悬液组成瘤率为20%,组织块组为46.7%.结论 组织块法较细胞悬液法成瘤率高,与原发肿瘤生物相似度接近,组织块移植法是建立人睑板腺癌动物模型的理想方法.     

建立人喉鳞癌裸鼠移植模型两种方法的比较

目的:建立人喉鳞癌(Hep-2)裸鼠移植模型,比较两种建模方法成瘤效果。方法:将裸鼠随机分成两组,每组8只,两组分别于皮下接种人喉鳞癌细胞悬液和改良法皮下接种瘤块建立动物模型,观察接种成瘤率、肿块大小、生长速度;免疫组化检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白表达。结果:接种3d后,改良瘤块接种法组裸鼠可见皮下隆起瘤体,接种1周后,皮下接种瘤细胞法和改良瘤块接种法成瘤率分别为75%、87.5%,比较第1周瘤体体积,P<0.05,但成瘤后肿瘤生长方面无明显的差别(比较第3周瘤体体积,P>0.05),两种方法成瘤后的瘤块hTERT蛋白表达阳性率相同。结论:采用改良瘤块接种法成瘤率高,生长速度快,且裸鼠皮下肿瘤较好的继承了人喉鳞癌细胞的重要生物学特点,该法能较好建立了人喉鳞癌裸鼠移植模型,为后续以端粒酶为靶点的体内抗肿瘤研究奠定良好基础。     

腺病毒介导MnSOD转染对肺癌细胞生长及体内抗肿瘤作用的影响

目的研究腺病毒介导锰超氧化物歧化酶(Ad-MnSOD)对肺腺癌细胞生长影响及在体内抗肿瘤作用.方法应用细胞基因转染、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),观察Ad-Mn-SOD转染A549细胞后对肺癌A549细胞生长的影响,并将A549细胞接种到裸鼠皮下后,注射Ad-MnSOD及Ad-LacZ到瘤体内,观察对肿瘤生长的影响.结果50MOI Ad-Laze转染率达90%以上,Ad-MnSOD转染A549细胞后MnSOD mRNA表达增加,MTT法检测显示转染Ad-MnSOD A549细胞组生长率(78.7%)低于转染Ad-LacZ的对照组(92.2%);A549细胞接种裸鼠后,用Ad-MnSOD及Ad-LacZ分别注射于瘤体内,Ad-MnSOD组瘤体生长速度低于Ad-LacZ对照组.结论Ad-MnSOD转染A549细胞后MnSOD可明显抑制A549细胞生长及肿瘤在裸鼠体内的生长,MnSOD对肺癌细胞A549有明显抗肿瘤作用.     

人胃癌裸鼠胃原位移植转移模型的建立

目的 :建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型 .方法 :用人胃癌细胞悬殊液接种于裸鼠皮下 ,形成稳定传代的皮下移植瘤 ,将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆膜下 ,称为间接胃原位移植模型 ,并与直接用细胞悬液接种于裸鼠胃浆膜下、皮下、腹腔、尾静脉的移植瘤模型比较 ,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化及细胞动力学改变等生物学特性 .结果 :肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特片 ,尾静脉注射与直接原位接种成瘤率均为6 0 % ,间接原位接种模型移植成瘤率为 80 % ,皮下与腹腔接种成瘤率均为 10 0 % .间接胃原位移植模型肝脏转移率为6 0 % ,直接胃原位移植模型肝脏转移率为 33.3% (P <0 .0 5 )尾静脉移植瘤模型仅见肝脏转移 ,实验过程中裸鼠衰竭处死后的肺脏经连续组织切片未见瘤细胞侵袭 .移植瘤细胞具有分泌CEA的功能 ,细胞动力学检测显示以五倍体细胞为主 .结论 :人胃癌裸鼠皮下 -胃原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型 .     

生长抑制因子5抑制肺癌细胞增殖作用的研究

目的探讨生长抑制因子5(ING5)抑制肺癌细胞增殖的作用。方法采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞ING5高表达细胞系A549-ING5-OE和A549细胞空质粒对照细胞系A549-control。采用细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;采用皮下接种方法建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察ING5对裸鼠皮下成瘤能力及肿瘤体积大小的影响。结果本实验成功构建了肺癌A549-ING5过表达细胞系,与A549-control比较,细胞系A549-ING5-OE中ING5表达显著增高;增殖实验结果显示ING5高表达显著抑制了肺癌细胞的增殖能力;克隆形成实验结果显示细胞系A549-ING5-OE中ING5高表达的肺癌细胞克隆形成能力明显低于A549-control肺癌细胞(P<0.01);裸鼠在体水平研究结果显示ING5高表达可以抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长。结论 ING5可以抑制肺癌细胞的增殖,为临床治疗肺癌提供新的治疗靶点。     

CD44v6,E—Cadherin表达与CNE—2Z—F1裸鼠移植瘤转移的关系

目的 探讨ＣＤ４４ｖ６，Ｅ－Ｃａｄｈｅｒｉｎ表达与人鼻咽癌裸鼠移植瘤转移的关系。方法 分别将人鼻咽癌细胞克隆株Ｆ１在体外与鼠肺块共同孵育及胸内移植，然后将带瘤细胞肺块（Ⅰ组）和胸内瘤组织块（Ⅱ组）各行裸鼠皮下移植，并与瘤细胞悬液皮下移植瘤（Ⅲ组）比较，观察各组移植瘤转移特点。采用免疫组织化学技术检测各组移植瘤回复培养细胞ＣＤ４４ｖ６和Ｅ－Ｃａｄｈｅｒｉｎ表达。结果 Ⅰ组和Ⅱ组皮下移植瘤的总转移率和     

腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应

目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC－82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC－82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的G1期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因（Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。     

裸鼠胶质瘤模型的建立及其病理

目的 建立裸鼠胶质瘤动物模型。方法 采用瘤细胞悬液接种法和瘤组织块接种法制作裸小鼠皮下移植瘤,并研究肿瘤的病理组织学特征。结果 两种方法所建肿瘤模型其成功率均为１００％,肿瘤生长状况良好,裸鼠无明显恶异质变化,肿瘤病理形态检查符合胶质瘤细胞的形态学特征,免疫组化证实体外培养的胶质瘤细胞和体内胶质瘤组织胶质纤维酸性蛋白均高表达。结论 该方法所建裸鼠皮下移植瘤模型能作为研究胶质瘤发病机制、生物学特性以     

裸鼠不同部位皮下接种鼻咽癌瘤块成瘤特点比较

目的:分析比较裸鼠腋下和背部皮下瘤块接种移植成瘤的特点.方法:培养细胞制作细胞悬液腋下皮下注射长出瘤块,瘤块传代三次均长出实体瘤,然后将26只雌裸鼠按随机的原则分为两组,13只棵鼠前腿腋下接种,另13只裸鼠前腿根部后上方的背部皮下接种.观察记录统计分析两组瘤块生长情况.结果:腋下接种、背部接种瘤块最长径长至1cm天数有明显差异(P＜0.001),腋下接种瘤体生长较快.成瘤率、溃疡坏死率两组无明显差异.结论:腋下接种、背部接种瘤块移植法制作裸鼠鼻咽癌模型简便易行成瘤率高,腋下接种瘤体生长更快.     

131Ⅰ标记抗PeroxiredoxinⅠ肺腺癌噬菌体抗体在荷瘤裸鼠体内的分布及其对肿瘤生长的抑制作用

目的 研究抗Peroxiredoxin Ⅰ(Prx Ⅰ)肺腺癌相关单链抗体体外对肺腺癌细胞的增殖抑制;观察131I标记抗体在肺腺癌裸鼠模型体内分布、靶向显像及体内抑瘤作用.方法 放射性核素计数法测定单链抗体细胞内摄水平;MTT法及流式细胞仪检测单链抗体抑制肺腺癌A549细胞生长情况;免疫印迹法检测单链抗体作用于A549细胞后对细胞内Prx Ⅰ表达水平的影响.放射性核素131Ⅰ标记纯化抗体,进行荷瘤裸鼠体内分布、SPECT放免显像及病理切片观察抑瘤作用.结果 单链抗体干预后细胞Prx Ⅰ蛋白表达水平较对照组下降(P＜0.05).体内分布研究表明单链抗体与肺腺癌组织有效结合.荷瘤裸鼠尾静脉注射131Ⅰ标记抗体48 h后,瘤/血和瘤/肌肉放射性比值均达到最大值4.06±0.13和5.17±0.97.SPECT示抗体注射后48 h T/NT值明显高于12 h、24 h和72 h(F均＞86,P均＜0.01).治疗4周后,131Ⅰ标记抗体治疗组肿瘤体积为(0.68±0.17)cm3,质量为(1.58±0.21)g,抑瘤率56.8%,与对照组比较有统计学差异.结论 抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体能有效抑制肺腺癌细胞生长,131I标记单链抗体在体内能抑制肿瘤生长.     

不同转移特性人肺癌裸鼠移植瘤模型的建立及复制

以人肺巨细胞癌细胞纱ＰＬＡ－８０１的两个细胞克隆Ｃ株及Ｄ株，建立了ＰＬＡ－８０１Ｃ及ＰＬＡ－８０１Ｄ裸鼠皮下移植瘤模型，以人肺腺癌腺鼠植移瘤培养细胞Ａｎｉｐ９７３，复制了Ａｍｉｐ９７３裸鼠皮下移植瘤及腹水瘤模型，对其生物学特性进行了研究，这４株移植瘤模型的淋巴结及肺转移率由低高依次为ＰＬＡ－８０１Ｃ皮下瘤（０％，０％），Ａｎｉｐ９７３皮下瘤（８．６％，４．３％）Ａｎｉｐ９７３腹水瘤（１００％，１２     

新型Bcl-2反义寡核苷酸（F951）治疗人小细胞肺癌的药效学实验研究

目的 建立人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型。方法 细胞悬液初代移植后，皮下埋块法连续传代移植，观察移植瘤的生物学特性。结果 潜伏期短、不易自行消退，呈进行性生长，并可出现肝转移．移植瘤细胞的组织形态与超微结构保留了NCI-H446细胞的特点．染色体检查证明为人类肿瘤细胞染色体核型。结论 皮下埋块法进行连续传代移植可缩短异种移植瘤的潜伏期，经过三次连续传代移植的NCI-H446细胞裸鼠移植瘤可作为人小细胞肺癌裸鼠异种移植瘤模型。     

靛玉红对人肺癌细胞异种移植瘤的作用观察

目的观察靛玉红对人肺癌细胞裸鼠移植瘤生长以及裸鼠体重的影响。方法将人肺癌H1299细胞皮下接种于裸鼠右侧腋窝,建立肺癌异种移植模型,将成模裸鼠随机分为3组,其中包括空白对照组、靛玉红每天65mg／kg组、TXT每周8mg／kg阳性对照组。使用游标卡尺每周测量两次移植瘤体积,给药三周,观察药物对移植瘤的生长抑制作用以及裸鼠体重的影响。结果靛玉红给药后对肺癌细胞移植瘤有抑制作用,药物作用22d,与对照组比较差异有显著意义（P〈0．05）。靛玉红给药后对裸鼠体重无显著影响。讨论靛玉红对肺癌细胞H1299的异种移植肿瘤生长有一定的抑制作用,对裸鼠体重的影响并不明显。     

人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型的建立和改进

目的：建立人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型。方法：用人胃癌细胞SGC-7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤。将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆肌层，观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化等生物学特性。结果：肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特点，人胃癌裸鼠原位移植模型成瘤率为100％(20／20)，肝脏转移率为45％(9／20)。结论：人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似，为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 建立人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,测定荷人肺癌裸鼠移植瘤的大小和重量,应用免疫组化SP法检测移植瘤组织中PCNA、VEGF、CD31的表达.结果 ADFMChR对肺癌移植瘤生长有显著抑制作用(P<0.01),5.0、10.0、20.0 mg/(kg·bw)的ADFMChR对移植瘤的瘤重抑制率分别为42.98%,82.31%和89.91%.免疫组化检测结果表明:ADFMChR具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤细胞PCNA、VEGF及CD31蛋白表达作用.结论 ADFMChR抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长作用与其抑制移植瘤细胞PCNA、VEGF以及CD31的蛋白表达相关.     

2种人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的比较

目的比较直接接种人卵巢癌COCl细胞和COCl细胞经体内传代后接种Balb／c—nu裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的成瘤率。方法雌性突变系Banb／c—nu小鼠40只，分为对照组及实验组，每组20只。COCl细胞注射于裸鼠一侧背部皮下，对照组细胞培养后即接种，观察统计数据后处死，取瘤体制成单细胞悬液再接种于实验组裸鼠，比较两种不同方法接种的成瘤率，并观察成瘤时间、瘤重及肿瘤生长速度。结果实验组成瘤率为70％，对照组仅为30％。结论经过裸鼠体内传代后的COCl细胞用于制备人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型具有较高的成瘤率。