MEK／ERK信号通路活性表达与乳腺癌干细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨MEK／ERK信号通路在乳腺癌干细胞增殖和凋亡中的作用。方法体外培养乳腺癌干细胞,采用MEK抑制剂PD98059抑制MEK／ERK信号通路表达,Western blot检测PD98059对p—ERK1／2表达的影响,进一步应用MTT法测定PD98059对乳腺癌干细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期变化;同时,TUNEL荧光染色分析、Histone／DNAELISA和流式细胞术检测评价细胞凋亡。结果PD98059可有效下调p—ERK1／2表达,抑制乳腺癌干细胞生长,诱导G0／G1期抑制;TUNEL荧光染色,Histone／DNAELISA检测和流式细胞术检测分析显示PD98059可有效诱导乳腺癌干细胞凋亡。结论MEK／ERK信号通路在乳腺癌干细胞增殖和凋亡中发挥重要作用。     

Survivin和NF-κB在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨Survivin和NF-κB在食管癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测57例食管癌和30例正常食管粘膜中Survivin和NF-κB的表达情况。结果Survivin在57例食管癌中的阳性率49.12%(28/57)显著高于30 例正常食管粘膜中的阳性率13.33%(4/30)(P<0.05)。NF-κB在57例食管癌中的阳性率63.16%(36/57)显著高于30例正常食管粘膜中的阳性率26.67%(8/30)(P<0.05)。Survivin的表达与食管癌的浸润深度和分化程度相关(P<0.05)。NF- κB的表达与食管癌的淋巴结转移相关(P<0.05)。食管癌中Survivin与NF-κB的表达相关(P<0.05)。结论Survivin和NF-κB在食管癌中表达上调,二者可能共同参与了食管癌的凋亡调控,在食管癌的发生发展中起重要作用。     

PD98059对肝癌HepG2细胞Tec信号转导作用的初步研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)及ERK2作用.方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2 mRNA及蛋白表达.结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2 mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40 μmol/LPD98059细胞抑制最明显.结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系.     

ERK通路对PHA诱导人外周血单个核细胞中USP22基因表达的影响

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)对植物血凝素(PHA)诱导人外周血单个核细胞USP22基因表达的调控作用.方法 不同浓度PHA刺激人外周血淋巴细胞,Western blot检测ERK1/2的磷酸化水平及USP22蛋白表达;ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059预处理细胞,Western blot和RT-PCR分别检测PHA诱导的USP22蛋白及mRNA的表达.结果 Western blot显示受PHA刺激后,人外周血单个核细胞USP22和p-ERK1/2蛋白的表达水平均高于对照组;而p-ERK1/2抑制剂阻断ERK磷酸化水平,进而下调USP22蛋白及mRNA表达水平.结论ERK1/2信号通路参与PHA对人外周血单个核细胞USP22基因的转录激活.     

PD98059通过诱导PUMA表达增强肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性

目的 体外实验探讨MEK1特异性抑制剂PD98059对奥沙利铂药物治疗作用的影响及PUMA在这一过程中的作用.方法 MTT法检测转染MEK1 active质粒后及不同药物处理后对LoVo细胞增殖率的影响;Western blot检测奥沙利铂和/或PD98059处理后PUMA蛋白的表达和ERK的活性;利用表达反义PUMA基因的细胞克隆抑制PUMA的表达后检测对PD98059和奥沙利铂诱导凋亡作用的影响.结果 在肠癌LoVo细胞中,ERK的激活增加细胞的增殖率;奥沙利铂可以抑制ERK的活性,并呈剂量依赖关系;PD98059可以协同奥沙利铂抑制细胞增殖率的作用;奥沙利铂和PD98059可以协同诱导PUMA的表达;抑制PUMA的表达可以减弱奥沙利铂和PD98059诱导的LoVo细胞的凋亡.结论 PD98059通过诱导PUMA表达增强肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性.     

细胞外信号调节激酶抑制剂协同蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡

目的 观察细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK )抑制剂PD98059与蟾蜍灵(bufalin)协同诱导K562细胞凋亡作用并探讨其分子机制.方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;采用形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot方法检测bcl-2蛋白表达.结果 25～100 μmol/L 的PD98059与蟾蜍灵单独或联合应用可抑制K562细胞增殖,并诱导细胞凋亡,在此过程中下调bcl-2蛋白表达,且二者具有协同作用.结论 PD98059协同蟾蜍灵诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调bcl-2蛋白表达有关.     

羟基喜树碱脂质体对人食管癌Ecal09细胞株作用的研究

目的研究羟基喜树碱脂质体对人食管癌Ecal09细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响。方法将人食管痛细胞株Ecal09常规培养于RPMI-1640培养基中，实验分空白对照组和浓度分别为0．1、1、10、50mmol／L的羟基喜树碱脂质体组，应用MTF法检测羟基喜树碱脂质体对食管癌细胞增殖的影响，Western blot检测细胞膜P糖蛋白水平的改变，流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的改变。结果各剂量组羟基喜树碱脂质体均对人食管癌Ecal09细胞的增殖具有抑制作用，并伴随着对细胞凋亡的羼导，以及对和多药耐药性（MDR）相关的P糖蛋白的抑制。结论羟基喜树碱脂质体能够抑制人食管癌细胞的增殖，诱导其凋亡并能够抑制P糖蛋白的表达，减少细胞耐药，且在0．1～50mmol／L浓度范围内，随着浓度增加，上述抑制作用增强，存在浓度依赖性。     

PD98059抑制Peroxynitrite诱导人脑血管平滑肌细胞DDR2的表达

目的 探讨过氧亚硝酸盐(ONOO-)诱导人脑血管平滑肌细胞(HBVSMCs)盘状结构域受体2(DDR2)表达的机制.方法 体外培养HBVSMCs,用倒置相差显微镜、吖啶橙染色法和MTT比色法对PD98059预处理的细胞进行细胞形态学及细胞生存率检测,采用Western blot及Real-time PCR技术,检测ONOO-作用下HBVSMCs中DDR2表达及施加ERK1/2抑制剂PD98059后DDR2/MMP-9表达的变化.结果 10 μmol/L ONOO-诱导DDR2在蛋白及mRNA水平上呈现高表达(P＜0.05),随着ONOO-浓度的增加,DDR2逐渐呈现低表达(P＜0.05).PD98059预处理后的HBVSMCs,无明显形态学变化,对其进行生存率检测亦无显著影响(P＞0.05).PD98059显著抑制ONOO-诱导的DDR2/MMP-9表达(P＜0.05).结论 ERK1/2信号转导途径抑制剂PD98059可以抑制ONOO-诱导的DDR2/MMP-9表达,ONOO-诱导HBVSMCsDDR2的表达机制与ERK1/2信号转导途径有关.     

ERK1/2介导的bFGF在乳腺癌细胞系MCF-7增殖中的作用

目的 观察Ras-Raf-ERK1/2途径介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖的影响,探讨bFGF及其信号传导途径与乳腺癌发生及发展的关系.方法 应用细胞免疫组织化学技术检测不同浓度bFGF处理细胞后ERK1/2蛋白的表达;应用蛋白印迹技术检测不同浓度、不同时间bFGF和bFGF+PD98059处理MCF-7细胞后,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达水平的变化.结果 经bFGF不同浓度(0、12.5、25及50 ng/mL)处理MCF-7乳腺癌细胞系后,ERK蛋白表达随着浓度的增加而增强,且与bFGF水平呈剂量依赖关系;以最佳工作浓度25 ng/mLbFGF处理MCF-7乳腺癌细胞系不同时间后,其表达活性明显高于对照组和bFGF+PD98059组.加入bFGF抑制剂PD98059后,bFGF诱导MCF-7细胞系p-ERK1/2活性的作用受到抑制,ERK蛋白表达明显下调.结论 bFGF通过Ras-Raf-ERK1/2途径的介导,促进了MCF-7细胞的增殖,进而抵抗无血清诱导的凋亡.抑制剂PD98059可阻断此诱导作用,使ERK表达明显下调.ERK信号传导通路可能是乳腺癌侵袭和转移的重要途径,ERK1/2和bFGF的表达可为乳腺癌治疗的靶点提供理论依据.     

阻断MAPK通路对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究前列腺癌进展中细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的变化，探讨阻断此通路对前列腺癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法检测表皮生长因子（EGF）、PD98059对前列腺癌细胞系LNCaP、PC 3和DU145增殖的影响；用Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达和磷酸化ERK1/2水平的差异，以及EGF、PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：EGF促进LNCaP、PC 3和 DU145的增殖，PD98059抑制细胞增殖；Western blot结果显示，3株前列腺癌细胞的总ERK1/2无明显差异。在血清饥饿的状态下，LNCaP细胞无ERK1/2的活化,而PC 3和 DU145细胞ERK1/2处于持续活化的状态。PD98059能够阻断EGF对3株前列腺癌细胞ERK1/2的激活。结论：MAPK通路的持续活化在前列腺癌的恶性进展中起重要作用，阻断此通路可以抑制前列腺癌细胞的增殖。     

Survivin、CyclinD1基因在哈萨克族食管癌中表达及其意义的研究

目的：研究Survivin和CyclinD1基因在哈萨克族食管癌组织中的表达。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术检测Survivin和CyclinD1基因在20例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果：20例食管癌组织中Survivin基因的总阳性率为50%,相应癌旁组织中Survivin基因的总阳性率为20%,且其表达量均低于其对应的癌组织。在20例食管癌组织中有10例表达CyclinD1基因,阳性率为50%,而在20例癌旁组织中有13例表达,阳性率为65%,且癌组织的表达低于其对应的癌旁组织。结论：提示Survivin基因的异常表达引起的细胞凋亡抑制在哈萨克族食管癌的发生、发展过程中起到一定的作用。CyclinD1在哈萨克族食管癌中的作用与其在其它民族中的作用可能有所不同。     

Survivin和p16在食管癌中表达的临床意义

目的探讨食管癌Survivin基因和p16增殖基因之间的关系,证实此两种基因可作为食管癌早期诊断的指标基因。方法应用免疫组化(SP法)检测了60例食管癌组织、12例癌旁组织和12例正常食管组织中Survivin、p16的表达率,分析Survivin和p16在食管癌与癌旁组织及正常组织之间有何差异,探讨两种基因在不同组织中表达的相关性。结果食管癌患者survivin基因和p16的阳性表达水平分别为80.0%(48/60)和58.3%(35/60),明显区别于对照组(食管正常组织)(p<0.05)。两者间表达成显著负相关(r=-0.390,P<0.05)。结论不同性质食管组织中survivin和p16的表达水平不同,两者之间表达明显相关,可以作为食管癌临床诊断的可靠指标。     

食管鳞癌中Survivin和Smac/Diablo的表达及意义

目的:探讨Survivin和Smac/Diablo在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化SP法对80例经病理确诊为食管鳞癌的病例和相对应的30例病理确定为正常组织及30例癌旁组织进行Survivin蛋白和Smac/Diablo蛋白半定量免疫组化分析。结果:Survivin在食管鳞癌组织,癌旁组织,正常组织的阳性表达率分别为81.25%,10.0%,3.33%,有显著性差异(χ2=72.983,P<0.01)。Smac/Diablo在食管鳞癌组织,癌旁组织,正常组织的阳性表达率分别为61.25%,76.67%,93.33%,有显著性差异(χ2=11.518,P<0.01)。Survivin和Smac/Diablo表达与患者的年龄、性别、分化程度、浸润深度等均无明显关系(P>0.05)。但与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。在Smac阳性组中的表达率为23.21%(13/56),在Smac/Diablo阴性组中的表达率为16.67%(9/54),两者间有统计学差异(P<0.05),两者关联性较强,呈负相关。Survivin阳性率与淋巴结转移呈低度正相关(r=0.329,P<0.05),Smac/Diablo阳性率与淋巴结转移呈负相关(r=-0.733,P<0.05)。结论:Survivin蛋白和Smac/Diablo蛋白表达与食管癌的病理分期,淋巴结转移都有着密切的关系,Smac/Diablo在食管鳞癌组织中低表达,其表达和Survivin呈明显的负相关,两者可能在食管鳞癌细胞凋亡信号传导网络中发挥重要作用。     

survivin在食管癌的表达及其与Bcl-2相关性研究

目的:探讨食管癌中survivin和Bcl-2的表达及它们的相关性。方法:收集经病理证实的40例食管癌、12例癌旁食管组织及9例食管炎标本,免疫组织化学S-P法检测survivin和Bcl-2蛋白的表达。结果:82.5%食管癌组织survivin蛋白表达阳性,survivin蛋白在食管癌中的表达与在食管炎及癌旁食管组织中的表达差异有统计学意义(P<0.005),在不典型增生的食管炎中可检测到survivin蛋白的表达;survivin蛋白的表达与食管癌分化程度和年龄无明显关系(P>0.05);食管癌中survivin蛋白的表达与Bcl-2蛋白的表达有一定关系(P=0.030)。结论:食管癌组织中survivin表达上调,与肿瘤分化及病理分型无关,survivin蛋白的表达与Bcl-2蛋白的表达有一定关系;不典型增生食管炎中可检测到survivin蛋白的表达,提示survivin蛋白的表达可能参与食管癌的发病,并在癌前病变向食管癌的转化中发挥作用。     

食管癌发生发展过程中P33/ING1、Survivin蛋白的表达

目的探讨食管癌发生发展过程中P33/ING1、Survivin蛋白的表达及其与食管癌病理特征的关系.方法采用免疫组化SP法检测P33/ING1、Survivin蛋白在60例食管癌手术后大体标本中食管正常黏膜、单纯增生、不典型增生、原位癌及浸润癌组织的表达.结果P33/ING1蛋白从正常黏膜→单纯增生→不典型增生→原位癌→浸润癌呈渐进性低表达,而Survivin蛋白则呈渐进性高表达.正常黏膜与不典型增生、原位癌及浸润癌中P33/ING1、Survivin蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.05);P33/ING1蛋白表达情况与食管癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P＜0.05).食管浸润癌组织中P33/ING1蛋白的低表达与Survivin蛋白的高表达呈负相关(r=-0.480,P＜0.01).结论P33/ING1、Survivin 2种蛋白与食管癌的发生发展密切相关,可作为肿瘤诊断的标志物.     

乳腺癌组织中Survivin和nm23蛋白的表达及其与腋淋巴结转移的关系

目的：探讨凋亡抑制蛋白Survivin和转移抑制蛋白nm23在乳腺癌组织中的表达及与腋淋巴结转移和5年生存率的关系。方法：用免疫组织化学SP法检测80例乳腺癌组织中Survivin,nm23的表达,分析其与腋淋巴结转移和5年无病生存率之间的关系。结果：Survivin蛋白在乳腺癌中阳性表达率为68.75%（55/80）,与腋淋巴结转移呈低度正相关（r=0.263,P=0.019）,与5年无病生存率呈低度负相关（r=-0.255,P=0.024）;nm23阳性表达率为57.50%（46/80）,与腋淋巴结转移呈低度负相关（r=-0.253,P=0.024）,与5年无病生存率低度正相关（r=0.235,P=0.037）。Survivin和nm23蛋白表达与肿瘤病理类型、发病年龄、临床分期无明显相关性（P＞0.05）。结论：Survivin蛋白的抑制凋亡作用和nm23蛋白的抑制转移作用可能在乳腺癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测有助于判断乳腺癌的预后。     

Survivin在食管鳞癌中的表达及其意义

目的：探讨食管鳞癌中Survivin的表达及其临床病理学意义。方法：通过免疫组织化学sP法对80例食管鳞癌及20例正常食管组织中survivin的表达情况进行检测。结果：80例食管鳞癌sunrivin表达阳性率为65％,20例正常食管组织中未见survivin的表达。survivin表达阳性率与癌组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关（P〈0．05）。结论：Survivin在食管鳞癌中高表达,可能参与食管癌的发生、发展过程。     

凋亡抑制基因survivin在食管鳞癌中的表达及其病理学意义

目的: 研究凋亡抑制基因Survivin在食管鳞癌中的表达及其病理学意义 .方法: 应用原位分子杂交法检测65例食管鳞癌组织及癌旁正常组织Survivin mRNA的表达.结果: 食管鳞癌组织Survivin阳性表达率为72.31%,显著高于癌旁正常组织(9.23%)(P<0.01),低分化、中分化、高分化鳞癌组织阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论:凋亡抑制基因Survivin在食管鳞癌中高表达,但与鳞癌组织病理分级无关.     

Survivin和rac1蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

[摘要] 目的 探讨Survivin和rac1蛋白在正常胃和胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法 应用链酶亲和素-生物素过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化法检测65例胃癌及癌旁6cm处正常胃黏膜组织中Survivin和rac1蛋白的表达,并分析其与胃癌临床、病理参数之间的关系。结果 (1)Survivin蛋白在癌旁正常胃黏膜组织中染色均为阴性,在胃癌组织中52.3%染色阳性（P<0.01）;rac1蛋白染色阳性率在胃癌组织中(75.4%)显著高于癌旁正常胃黏膜组织（21.5%）（P<0.01）;（2）随胃癌组织分化程度的降低、浸润深度的增加、TNM分期的升高及淋巴结和远处转移的发生, Survivin和rac1蛋白的染色阳性率明显升高(P<0.05);(3) Survivin阳性胃癌组织中的rac1蛋白表达水平显著高于Survivin阴性者(P<0.01); 结论 Survivin和rac1的表达与胃癌的生物学行为密切相关,对胃癌组织中Survivin和rac1的联合检测有助于预测胃癌患者的预后。     

MTA1及nm23H1基因在新疆哈萨克族食管癌组织中的表达及临床意义

目的:研究肿瘤转移相关基因(MTA1)及nm23H1基因在哈萨克族食管癌组织中的表达及临床意义。方法:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测MTA1及nm23H1基因在20例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果:癌组织中nm23H1阳性表达占50.00%(10/20),有淋巴结转移的癌组织中nm23H1mRNA的阳性表达率为40.00%(4/10),无淋巴结转移的为60.00%(6/10);浸润至外膜层的肿瘤中阳性表达率为71.43%(10/14)。MTA1基因在癌组织中有5例(25.00%)表达,且均为T3期肿瘤,癌旁组织仅1例表达。结论:nm23H1及MTA1基因的表达可能与哈萨克族食管癌的发生及浸润深度有关,二者协同作用,共同促进食管癌的发生及发展。