miR-4458靶向STAT3对结直肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨miR-4458对人结肠癌细胞(H T-29)增殖、凋亡及上皮间质化(EM T)的影响及其作用机制.方法 体外培养HT-29细胞,分为对照组、miR-4458阴性对照(NC)组和miR-4458模拟物(mimics)组,另将人正常结肠上皮细胞(HCoEpiC)设置为正常组.逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测正常组、各组HT-29细胞、结肠癌组织及癌旁组织中miR-4458和信号转导与转录激活因子(STAT3)mRNA表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组HT-29细胞存活率变化;划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移和侵袭变化;Western blot检测各组HT-29细胞上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经性钙粘蛋白(N-cad-herin)和波形蛋白(Vimentin)表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-4458与STAT3的靶向关系.结果 与癌旁组织和正常组细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-4458均低表达,STAT3 mRNA均高表达.Targetscan human数据库预测miR-4458与STAT3 mRNA 3′UTR区有结合位点.与STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 NC组比较,STAT3-3′UTR-WT+miR-4458 mimics组荧光素酶活性降低(P<0.05).与对照组和miR-4458 NC组相比,miR-4458 mimics组细胞miR-4458表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),存活率、划痕迁移率、侵袭数量、STAT3 mRNA和蛋白表达、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05).此外,体内实验证实,过表达miR-4458可显著抑制HT-29移植瘤的生长.结论 miR-4458可能通过靶向抑制S T A T 3表达,抑制人结直肠癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质化行为.     

LSD1、E-钙黏蛋白及N-钙黏蛋白的表达对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的：探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（ LSD1）、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白的表达与结肠癌细胞侵袭转移的相关性。方法利用Transwell体外细胞侵袭实验检测结肠癌细胞株Lovo、SW620、HT-29、HCT-8、HCT-116和对照细胞（ HEK293）的侵袭性,再利用Real-time RT-PCR和Western blot实验方法检测LSD1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白在上述细胞中的表达,分析其与结肠癌细胞侵袭性的相关性。结果 SW620细胞中LSD1和N-钙黏蛋白的mRNA和蛋白水平明显高于其他4种结肠癌细胞和正常对照细胞（ F＝149.594,P＜0.05;F＝367.29,P＜0.05）,而E-钙黏蛋白mRNA和蛋白水平明显低于其他4种结肠癌细胞和正常对照细胞（ F＝51.23, P＜0.05）。 Transwell细胞侵袭实验显示SW620细胞的侵袭性明显高于其他4种结肠癌细胞和正常对照细胞（F＝300.15, P＜0.05）。相关性分析显示LSD1、N-钙黏蛋白的表达与结肠癌的侵袭性呈正相关, E-钙黏蛋白的表达与结肠癌的侵袭性呈负相关。结论 LSD1、N钙黏蛋白的表达与结肠癌细胞的侵袭性呈正相关,E钙黏蛋白的表达与结肠癌细胞的侵袭性呈负相关,三者可能在结肠癌的侵袭转移过程中发挥了重要作用。     

IBP通过上皮间质转化促进结肠癌细胞迁移和侵袭

目的 探讨干扰素调节因子4结合蛋白(interferon regulatory factor-4 binding protein,IBP)能否影响结肠癌细胞上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的发生,观察IBP在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭中作用.方法 干预结肠癌细胞中IBP的表达,构建IBP过表达的HT-29-IBP细胞株与IBP沉默的HCT116-shIBP细胞株;干预IBP表达后,采用Western blot检测结肠癌细胞EMT相关分子的蛋白表达;Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力的改变;MTT实验检测结肠癌细胞增殖能力的改变.结果 HT-29-IBP细胞中上皮相关分子E-cadherin和ZO-1表达水平降低,间质相关分子Fibronectin表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强(P＜0.05);HCT116-shIBP细胞则E-cadherin、ZO-1表达水平升高,Fibronectin及Snail表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力降低(P＜0.05).结论 IBP通过调节EMT促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭.     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在人结肠癌中的表达及其对HT-29细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)基因在人结肠癌组织中的表达及其对HT-29细胞增殖与凋亡的影响.方法 免疫组织化学方法检测磷酸化mTOR (p-mTOR),在郑州大学第一附属医院普通外科2009年10月至2010年6月50例结肠癌组织和50例正常结肠组织中的表达情况.体外合成mTOR小干扰RNA(siRNA),转染人结肠癌HT-29细胞为实验组,同时设空白对照组(不转染)及无义对照组(转染无义siRNA),Western印迹法检测各组HT-29细胞的mTOR蛋白表达;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖;原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 结肠癌组织中p-mTOR的表达高于对照组[60％(30例)比14％(7例),P＜0.05],mTOR的表达和淋巴结转移、肿瘤的分化程度相关(r=0.311、0.427,均P＜0.05).实验组HT-29细胞mTOR的表达和细胞增殖均低于空白对照组和无义对照组(0.39±0.25比1.18±0.05、1.46±0.09,0.275±0.033比0.460±0.028、0.450±0.037,均P＜0.05);细胞凋亡指数则均高于空白对照组和无义对照组(12.33±1.53比0.33±0.31、1.67±0.58,均P＜0.05).结论 在结肠癌组织中存在mTOR高表达,mTOR siRNA对HT-29细胞mTOR基因的表达有抑制作用,能抑制HT-29细胞的增殖并促进其凋亡.     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.     

环氧合酶-2小分子干扰RNA对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)小分子干扰RNA(siRNA)对COX-2高表达的人结肠癌细胞的增殖和凋亡的影响.方法 筛选出最佳的靶向COX-2 siRNA转染人结肠癌HT-29细胞,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果,四甲基偶氮唑蓝(MTT)和Hoechst染色检测COX-2表达被抑制后细胞增殖和凋亡的情况.结果 COX-2 siRNA能在mRNA和蛋白水平下调人结肠癌细胞株HT-29中COX-2基因的表达(P＜0.05),以转染72 h时最显著.COX-2表达被抑制后,转染后72 h时HT-29细胞生长受到明显抑制(P＜0.05),凋亡细胞显著增加.结论 COX-2与结肠癌细胞的生长和凋亡密切相关,抑制结肠癌细胞中COX-2表达可抑制结肠癌细胞生长,促进结肠癌细胞凋亡.     

柴胡皂苷D通过下调JAK2/STAT3通路抑制乳腺癌细胞的增殖并促进其凋亡

目的 探讨柴胡皂苷D通过JAK2/STAT3通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法 将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组(0μmol/L),低(5μmol/L)、中(10 μmol/L)和高(20 μmol/L)剂量柴胡皂苷D组,采用四甲基偶氮唑盐(tetramethylazolium salt,MTT)比色法测定各组MCF-7细胞活力;用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用免疫组化检测柴胡皂苷D对MCF-7细胞JAK2和STAT3表达情况;同时用免疫蛋白印迹法检测各组细胞JAK2、STAT3和Ki-67蛋白的表达.结果 对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞活力差异有统计学意义(F=5.099、38.908、159.680、234.885、344.866、386.914,P＜0.05).与对照组相比较,在12、24、36、48、60、72 h后,低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞活力均有显著降低(P＜0.05),且低剂量组细胞活力在24、36 h均高于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞活力在24、36 h均高于高剂量组(P＜0.05).对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞凋亡率比较差异具有统计学意义(x2=21.609,P＜0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组的细胞凋亡率均升高(P＜0.05),低剂量组细胞凋亡率低于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞凋亡率低于高剂量组(P＜0.05).免疫组化结果显示,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞JAK2、STAT3蛋白相对表达量比较差异具有统计学意义(F=44.343、46.389,P＜0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞JAK2、STAT3表达均降低(P＜0.05),且低剂量组细胞JAK2、STAT3表达均高于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞JAK2、STAT3表达均高于高剂量组(P＜0.05).Western blot检测结果显示,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞JAK2、STAT3和Ki-67蛋白相对表达量比较差异具有统计学意义(F=25.241、18.102、14.997,P＜0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组的细胞JAK2、STAT3和Ki-67相对表达量均降低(P＜0.05),低剂量组细胞JAK2、STAT3相对表达量均高于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞JAK2、STAT3相对表达量均高于高剂量组(P＜0.05).结论 柴胡皂苷D能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其作用机制可能与JAK2/STAT3通路有关.     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

曲古抑菌素A体外对结肠癌细胞凋亡及低氧状态下其缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)体外对结肠癌HT-29细胞凋亡及低氧状态下其缺氧诱导因子(HIF)-1α表达的影响.方法:体外培养结肠癌HT-29细胞,给予TSA 100、200、400、600、800 nmol/L分别处理12、24、48、72h,对照组加入同等体积的DMSO.MTT法检测各组HT-29细胞的存活率;Annexin V、TUNEL法检测HT-29细胞凋亡率;RT-PCR、免疫印迹法分别检测低氧状态下(37℃、1%O2)HT-29细胞HIF-1α mRNA及蛋白的表达.结果:MTT法检测结果发现,与对照组相比,TSA处理组HT-29细胞活力明显降低(P＜0.05),随着浓度的增大、时间的延长,其抑制作用逐渐增强.Annexin V、TUNEL法检测结果发现,TSA能诱导HT-29细胞的早期凋亡,TSA(200、400、600、800 nmol/L)处理组凋亡率明显高于对照组(P＜0.05).低氧条件下,TSA抑制HT-29细胞HIF-1α蛋白的表达,随着浓度的增大,其抑制作用逐渐增强;而对HIF-1α mRNA的表达无影响.结论:TSA体外可能通过抑制低氧条件下HT-29细胞HIF-1α蛋白的表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖.     

hERG1钾通道在结直肠癌中异常表达及红霉素诱导HT-29细胞凋亡的机制

目的:旨在检测hERG1钾通道蛋白在结直肠癌患者术后组织中的表达,分析其表达与临床病理特点的关系,并以其阻断药红霉素干预,以了解hERG1蛋白对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:免疫组化检测76例结直肠癌的癌组织与配对癌旁正常组织中hERG1蛋白表达。不同浓度红霉素干预HT-29细胞,MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、Boyden小室法检测细胞侵袭力的变化、Western印迹检测hERG1、P53和Bax蛋白表达。结果:免疫组化发现hERG1蛋白在正常大肠组织中无表达,在大肠癌组织异常表达(阳性率83%),其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期有关(P<0.05)。红霉素以浓度和时间依赖的方式抑制HT-29细胞增殖,可诱导细胞凋亡。递增剂量的红霉素刺激HT-29细胞,可逐渐减弱其侵袭力(P<0.05),下调hERG1蛋白表达、上调P53和Bax蛋白表达(P<0.05)。结论:hERG1蛋白在正常结肠组织中无表达,在结直肠癌中异常表达,可能参与了结直肠癌的恶性生物学行为。红霉素作为hERG1钾通道阻断药,能抑制结肠癌HT-29细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与阻断hERG1钾通道、上调P53和Bax的表达有关。     

甲状旁腺切除术对甲状旁腺机能亢进性骨病的远期疗效

为了评价甲状旁腺切除术对原发性甲状旁腺机能亢进（ＰＨＰＴ）所致骨病的远期疗效，回顾分析了１６例术后平均５．１（１．０～１０．５）年患者的临床表现、骨结构和骨密度恢复情况，结果表明手术虽能明显改善患者骨病，但在随访终点有１０／１６例（６２．５％）骨病恢复不全，其中骨病重的Ｙ１组比骨病轻的Ｙ２组恢复不全比例更高（Ｐ＜０．０５），１４／１６例血骨钙素（ＢＧＰ）和尿吡啶并啉（Ｐｙｒ）浓度处于中青年对照组范围内，这意味着其成骨与破骨处于平衡状态。这些结果提示：ＰＨ－ＰＴ患者应尽早诊断治疗，术后应对患者密切随访，重视对骨病恢复不全者的后续治疗     

胰十二指肠切除术后住院时间影响因素分析-回顾性研究

Background. Postoperative hospital stay after pancreaticoduodenectomy (PD) was relatively longer than other gastrointestinal operations, The aim of current study was to investigate the risk factors of postoperative hospital stay after PD. Methods. Patients who were performed PD in Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (CHCAMS) between December 2008 and November 2012 were selected for the retrospective study. The clinical and pathological data was collected and analyzed. The primary outcome was postoperative hospital stay. Normal discharge or recovery was defined as postoperative hospital stay no more than 10 days, otherwise it was defined as delayed discharge or recovery (including hospital death). Results. Finally, 152 patients were enrolled in present study. Postoperative hospital stay was 19.7±7.7 (7-57 d). 67 of 152 patients were normal discharge, and 85 of 152 patients were delayed discharge. The overall morbidity of complications was 62.5% (95/152), and the mortality rate was 3.29% (5/152). Multiple factors analysis showed that complication morbidity (adjusted OR=10.40, 95%CI=3.58-30.22), age (adjusted OR=4.09, 95%CI=1.16-14.39), BMI (body mass index) (adjusted OR=4.40, 95%CI=1.19-16.23), surgical procedure (adjusted OR=26.14, 95%CI=4.94-153.19), blood transfusion (adjusted OR=7.68, 95%CI=2.09-28.27) and fluid input (adjusted OR=3.47, 95%CI=1.24-11.57) were significantly associated with delayed discharge. Conclusions. Postoperative complications affects the postoperative hospital discharge. Furthermore, age, BMI, transfused red blood, surgical procedure and input might prolong LOS (length of hospital stay). Studies with more patients were needed in future.     

甲磺酰胺苯乙胺类化合物抗心律失常活性的定量构效关系研究(Ⅰ)

以ＰＯＬＹＧＥＮ软件中的ＣＨＡＲＭｍ程序和集团坐标轮换法，对合成的１２个甲磺酰胺苯乙胺类化合物的结构进行计算机分子模拟。根据所得化合物的能量最低构象，计算了其ＶＤＷ体积、偶极矩、总键能、总键角能、总非正则能以及氮原子电荷等值，并对这些化合物进行ＣＮＤＯ／２法量化计算，这些计算结果作为结构参数分别与１２个化合物抗心律失常活性进行相关分析，以逐步回归法建立了两个相关性较好的方程：ｌｇｌ／ＭＥＣ＝６．９９９１－０．３８４２Ｘ２＋３．６７９６Ｘ５［ｎ＝１２，ｒ＝０．８５５９７５，ｓ＝０．１８９６７２，Ｆ＝１２．３３４６４＞Ｆ１－０．０５（３，９）＝３．８６］；ｌｇｌ／ＭＥＣ＝１４．７０３８－２１３．２６９２Ｘ４－１０．４８２９Ｘ５［ｎ＝１２，ｒ＝０．９３１９１９，ｓ＝０．１３３０４７，Ｆ＝２９．７１３５４＞Ｆ１－０．０１（３，９）＝６．９９］。结果提示，这类化合物的抗心律失常活性与分子中的原子轨道杂化程度和氮原子对分子ＨＯＭＯ和ＬＵ－ＭＯ的贡献有关，可以看出，氮上的取代不同会引起抗心律失常活性的不同     

欧洲刺柏（Juniper）

活性成分与药理作用欧洲刺柏药用部位是其浆果，具有促水排泄、防腐、抗胃肠胀气和抗风湿作用，还可改善胃功能。用作促水排泄药可增加尿量（水丢失），但不增加钠排泄。成分萜品烯-4-醇可增加肾小球滤过率，但刺激肾。欧洲刺柏浆果对单纯疱疹病毒体外显示抗病毒活性，并具抗真菌活性。动物实验显示，欧洲刺柏浆果提取物具有堕胎、抗生育、抗炎、抗胚胎植入、降血压、升血压和降血糖作用。欧洲刺柏浆果油具有兴奋子宫的活性，以及利尿、胃肠道抗菌和刺激作用，该油对平滑肌有阻止解痉作用。     

基于网络药理学探讨独活-羌活-细辛治疗膝骨关节炎的作用机制*

目的 基于网络药理学的方法分析和预测独活-羌活-细辛治疗膝骨关节炎可能的作用机制。方法 利用TCMSP数据库获取独活、羌活、细辛的活性成分及靶点,与CTD、NCBI等数据库获取的膝骨关节炎疾病基因靶点映射,构建药物-活性成分-疾病靶点网络。进行MCODE聚类分析,通过Omicshare云平台和DAVID数据库GO、KEGG通路富集分析。结果 从3味药中共筛选出了36个活性成分及205个靶点,主要有山柰酚、 β-谷甾醇、芝麻脂素、异紫花前胡苷等关键成分,AKT1、ESR1、JUN、CASP3等为关键靶点,核心基因有NOS3、ESR1、COX1、NR1I2,关键的生物进程和通路有类固醇激素反应性、活性氧代谢过程、AGE-RAGE通路和TNF通路。结论 独活-羌活-细辛可能通过多成分、多靶点网络来治疗膝骨关节炎。     

矮身材儿童血铅镉锌钙铁铜镁水平分析

目的探讨血铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平对儿童生长发育的影响。方法通过采用钨舟原子吸收光谱仪测定我院儿保门诊53例矮身材儿童（矮身材组）及53例正常儿童（对照组）末梢静脉血中铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平,并对其与儿童生长发育关系进行分析。结果矮身材儿童血铅明显高于正常对照组,锌、钙、铁明显低于正常对照组（P〈0．05）。而血镉、铜、镁与对照组则无明显差异。矮身材组血铅男童明显高于女童（P〈0．05）。结论矮身材儿童的生长发育迟缓可能与高血铅,低血锌、钙、铁密切相关。儿童铅中毒防治和合理的膳食结构是降低儿童矮身材发生率的重要措施。