线粒体通透性转换孔在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨线粒体通透性转换孔（MPTP）的开放对内吗啡肽-1后处理减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。方法将45只雄性SD 大鼠随机分为5组（n=9/组）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、线粒体通透性转换孔开放剂苍 术苷后处理组（Atr组）和内吗啡肽-1+苍术苷后处理组（EM50+Atr组）。建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型,通过经颈动脉插管至左 心室实时监测血流动力学,记录各组大鼠的血流动力学指标,再灌结束后采集大鼠血浆,检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、 白介素-6、肿瘤坏死因子-α,氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛,细胞色素C等生化指标,大鼠心肌组织HE染色,采用Evans blue 和TTC双染色法检测心肌梗死面积,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达。结果与S 组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌 钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细胞色素C含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（P< 0.05）;心肌梗死面积减少（P<0.05）;Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达量升高（P<0.05）;与EM50组 比较,EM50+Atr组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细 胞色素C含量或活性增加（P<0.05）,超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;心肌梗死面积增加（P<0.05）;Bax和cleaved caspase-3蛋白 表达量升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达量降低（P<0.05）。结论内吗啡肽-1后处理可能通过抑制MPTP的开放,减少线粒体中Cyt-C 的释放,下调凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,发挥心肌保护作用。     

内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用及其对Erk1/2信号通路的影响

目的 探讨在大鼠心肌缺血再灌注过程中,内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用对细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)信号转导通路的影响.方法 构建在体大鼠心肌缺血再灌注模型,分假手术组、缺血再灌注组、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、PD98059后处理组(PD组)、内吗啡肽-1+PD98059后处理组(EM50+PD组).实时记录各组大鼠血流动力学指标,采集复灌结束后大鼠血清,检测超氧化物歧化酶、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白等心肌酶学及生化指标,大鼠心肌组织HE病理染色,TTC双染色法测定心肌梗死面积,Western-blot检测各组心肌组织中P-Erk1/2及凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心率和血压降低(P<0.05);与缺血再灌注组比较,EM50组心率和血压有所增高(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量下降;超氧化物歧化酶活性增加(P<0.05);心肌梗死面积减少(P<0.05);P-Erk1/2表达增加(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05).与EM50组比较,EM50+PD组心率和血压降低(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量增加,超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);心肌梗死面积增加(P<0.05);P-Erk1/2表达降低(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达增加.结论 内吗啡肽-1后处理可能通过改善心功能、抑制炎症反应、抑制氧化应激发挥保护作用;内吗啡肽-1改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程中,存在Erk1/2信号通路的激活.     

下调SIK2可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤：基于mTOR-ULK1信号通路的下调与细胞自噬的减少

目的 探究盐诱导激酶2（SIK2）对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及机制。方法 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、SIK2抑制剂组,5只/组（造模前24 h左股静脉注射博舒替尼10 mg/kg）。超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌细胞自噬情况,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中SIK2和LC3B、Beclin-1、p62等自噬相关蛋白以及p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1相关通路蛋白含量。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心肌组织病理损伤严重,自噬小体数量增加（P<0.05）,同时SIK2蛋白表达增多（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组SIK2蛋白表达减少（P<0.01）,心肌组织病理损伤较轻,自噬小体数量减少（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LVEF、FS值降低（79.33±3.40 vs 38.67±2.49,59.33±5.25 vs 19.33±1.25,P<0.001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LVEF、FS值升高（38.67±2.49 vs 59.33±3.40,19.33±1.25 vs 30.67±3.40,P<0.05）,3组IVSDd、LVPWDd无明显差别（P>0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达增多,p62蛋白表达减少（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达减少,p62蛋白表达增多（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组p-ULK1（Ser757）蛋白表达增多（P<0.01）,p-mTOR蛋白表达减少（P<0.0001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组p-ULK1（Ser757）蛋白表达减少（P< 0.01）,p-mTOR蛋白表达增多（P<0.05）;各组mTOR、ULK1无明显差异（P>0.05）。结论 SIK2可能通过mTOR/ULK1信号通路促进细胞自噬,对SIK2进行抑制,可以减少异常自噬,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞体外生长的影响

目的 探讨百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用CCK-8法检测细胞相对活性,Hoechst染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、XI-AP）、半胱天冬酶（cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9）、PTEN、Akt及phospho-Akt蛋白的表达.结果 百里醌呈浓度依赖性地抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡.吉西他滨组（GEM）、百里醌组（TQ）、百里醌联合吉西他滨组（TQ＋GEM）、百里醌与吉西他滨序贯给药组（TQ-GEM）相对细胞活性分别为83.7％±4.1％、51.8％±6.0％、48.25％±6.50％、33.3％±3.9％;早期凋亡率分别为12.2％±3.8％、30.4％±4.3％、43.5％±5.7％、58.3％±6.1％;各组相对细胞活性均明显低于对照组（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著增高（P＜0.05）;与GEM组比较,TQ-GEM组与TQ＋ GEM组相对细胞活性明显下调（P ＜0.001）,凋亡率明显上调（P ＜0.001）;TQ-GEM组较TQ＋ GEM组出现更明显的增殖受抑（P ＜0.001）,更高的细胞凋亡率（P＜0.001）.百里醌-吉西他滨序贯给药作用于胰腺癌BxPC-3细胞后,BxPC-3细胞中Bax蛋白表达明显下调,而Bcl-2、XIAP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达明显上调.百里醌可显著上调BxPC-3细胞PTEN的表达,明显抑制Akt磷酸化.结论 百里醌可明显增强吉西他滨对体外胰腺癌细胞生长抑制作用,可能是通过上调PTEN,Akt去磷酸化,促使Bcl-2、XIAP表达上调及Bax表达下调,活化caspase-3、caspase-9诱导细胞凋亡而实现。     

肾缺血预处理对兔未成熟心肌Bcl-2, Bax,Fas蛋白表达的影响

目的:探讨肾缺血预处理(RIP)对兔未成熟心肌细胞凋亡和Bcl-2, Bax, Fas蛋白表达的影响. 方法:24只幼兔采用Langendorff离体心脏灌注模型,随机分为正常对照组(C)、心脏缺血/再灌注组(I/R)和肾缺血预处理组(RIP),每组8只,测定各组未成熟心肌细胞凋亡和Bcl-2, Bax, Fas蛋白表达. 结果:RIP组与I/R组比较,心肌细胞凋亡率明显减少[(4.19±1.13)% vs (12.30±2.10)%, P<0.01],DNA片段梯光密度明显减少(57 350±1765 vs 135 200±3370, P<0.01), Bcl-2表达增多(33 525±1026 vs 12 385±860, P<0.01), Bax(8640±768 vs 32 472±1128, P<0.01)和Fas(8936±912 vs 32 100±1260, P<0.01)表达明显减少. 结论:RIP可减少缺血再灌注后兔未成熟心肌细胞凋亡和影响Bcl-2, Bax, Fas蛋白的表达.     

白藜芦醇苷对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障的 保护作用研究

目的:观察白藜芦醇苷（PD）对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障的保护作用及对紧密连接蛋白的影响。方法:CD-1 小鼠 （102 只）应用线栓法制作短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型。随机将实验动物分成4 组:假手术组（28 只）、缺血再灌注 组（28只）、白藜芦醇苷低剂量组（30 mg/kg,18只）,白藜芦醇苷高剂量组（60 mg/kg,28只）。于缺血再灌注后24 h 进行行为学评 分、TTC 染色、干湿重测定、伊文思蓝染色,应用Western 印迹、免疫荧光检测内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子-1（CD- 31）、紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白-5（Claudin-5）的表达情况。结果:（1）与缺血再灌注 组相比,白藜芦醇苷高剂量组改善了缺血再灌注小鼠行为学评分、减少了脑梗死体积[（33.76%± 13.27%）vs.（57.47%±9.53%）, P<0.05]、减轻了缺血再灌注小鼠脑水肿程度[（75.62%±7.95%）vs.（85.72%±6.20%）,P<0.05]、降低了伊文思蓝渗出量[（1.49±0.47） vs.（2.13±0.44）,P<0.05]。（2）Western印迹结果显示白藜芦醇苷上调了ZO-1、Occludin、Claudin-5（均P<0.05）的表达水平。（3）免 疫荧光结果显示:白藜芦醇苷组上调了CD-31 在皮层缺血半暗带区的表达,且可见微血管形态相较缺血再灌注组更加光滑、完 整,同时白藜芦醇苷减少了ZO-1、Claudin-5 的破坏。结论:白藜芦醇苷的干预对缺血再灌注损伤小鼠起到了保护血脑屏障的作 用,上调了紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 的表达水平。     

重组人促红细胞生成素对缺血后处理大鼠心脏保护作用及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(Erythropoietin,rhEPO)对大鼠心肌再灌注损伤心脏功能的影响及对PI3K/Akt信号通路影响。方法:将42只SD雄性大鼠随机分为7组:①假手术组(Sham组);②缺血/再灌注组(I/R组);③缺血后处理组I-PostC组;④渥曼青霉素+缺血后处理组(Wort+I-PostC)组;⑤rhEPO组;⑥Wort+rhEPO组;⑦rhEPO+I-PostC组。术中监测心电变化,于再灌注结束后采用伊文氏蓝-TTC法测定心肌梗塞面积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测各组心肌组织中Akt mRNA、p70s6k mRNA水平,Akt、p70s6k蛋白表达水平。结果:(1)心肌梗塞面积:I-PostC组、rhEPO组和rhEPO+I-PostC组心肌梗塞面积较I/R组明显减少(P<0.05),组间无统计差别;I-PostC+Wort组和rhEPO+Wort组较I-PostC组和rhEPO组心肌梗塞面积显著增大(P<0.05)。(2)心肌组织中Akt mRNA、p70s6k mRNA、Akt、p70s6k蛋白表达:各组大鼠心肌组织均有Akt mRNA、p70...     

Correlation between protective effect of low pH solution reperfusion on myocardial ischemia/reperfusion and expression of Bcl-2 and Bax in rabbits

目的 探讨低pH液复灌对体外循环(extracorporeal circulation,ECC)下兔缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌的保护作用与Bcl-2、Bax表达的关系.方法 成年新西兰大白兔30只,完全随机分为5组(n=6):对照组(C组)不停跳,体外循环180min;缺血再灌注组(I/R组)全心缺血40 min,再灌注120 min;pH =7.4组与pH =6.9组于再灌注前2 min予37℃的95％ O2+ 5％ CO2饱和的pH值为7.4或6.9的K-H液灌注;缺血后处理组(P组)再灌注的前2 min给予缺血后处理.体外循环结束后,光镜观察心肌形态学变化;ELISA测定血清肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)浓度;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 与I/R组比较,pH =6.9组和P组心肌组织损伤较轻,cTnI浓度较低(P＜0.05),pH =6.9组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显增高[(1.058 1±0.165 7)vs (0.648 2 ±0.070 8),(0.233 1±0.022 5) vs (0.156 5±0.019 2),P＜0.05],Bax mRNA和蛋白表达水平明显降低[(1.353 3±0.138 1)vs(1.901 7±0.198 1),(0.173 5±0.015 1)vs(0.247 1 ±0.021 3),P＜0.05];pH =6.9组和P组之间Bcl-2、Bax表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外循环下再灌注初短暂低pH(pH =6.9)液复灌可以模拟缺血后处理的心肌保护作用,其保护机制与调节Bcl-2、Bax的表达有关.     

牛蒡甙元对老年大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探究牛蒡甙元对老年大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响.方法 建立老年大鼠肾缺血再灌注损伤模型,采用随机数字表法将大鼠随机分为6组:假手术组(Sham组)、牛蒡甙元组(ACR组)、肾缺血再灌注模型组(RIRI组)、RIRI+ACR(10 mg/kg)组、RIRI+ACR(20 mg/kg)组和RIRI+ACR(50 mg/kg)组进行后续实验.试剂盒检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肾组织病理损伤;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平;蛋白免疫印迹检测肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt蛋白表达水平.加入PI3K/Akt通路抑制剂LY294002后,将大鼠随机分为5组:Sham组、RIRI组、RIRI+ACR(50 mg/kg)组、RIRI+LY294002组和RIRI+ACR+LY294002组.West-ern blot检测各组大鼠PI3 K、p-PI3 K、Akt、p-Akt蛋白表达水平;试剂盒检测Scr、BUN水平;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8水平.结果 与RIRI组相比较,RIRI+ACR(20、50 mg/kg)组大鼠Scr、BUN水平降低,病理损伤程度改善,KIM-1、NGAL蛋白水平降低,凋亡细胞数减少,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平降低,TNF-α、IL-6、IL-8水平降低,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值升高.结论 牛蒡甙元对老年大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用.     

电刺激大鼠小脑顶核对缺血-再灌注视网膜的保护作用实验研究

目的探讨电刺激大鼠小脑顶核（cerebellar fastigial nucleus,CFN）对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制.方法大鼠随机均分为三组,缺血-再灌注损伤组、缺血-再灌注治疗组和假手术组.用TUNEL试剂盒检测视网膜神经节细胞凋亡率;用免疫组织化学染色法检测视网膜细胞Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达.结果缺血-再灌注损伤可使视网膜神经节细胞发生凋亡（P〈0.05）,同时视网膜细胞Bcl-2蛋白表达逐渐减弱（P〈0.05）,Bax蛋白表达逐渐增强（P〈0.05）;而使用电刺激小脑顶核的治疗组上述改变较轻（P〈0.05）.结论电刺激大鼠小脑顶核对视网膜缺血-再灌注损伤具有保护作用,其机制可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达来减少视网膜细胞的凋亡.     

依达拉奉对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及机制研究

目的 探讨依达拉奉对心肌梗死（MI）大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、依达拉奉小剂量、中剂量及大剂量组5组。除假手术对照组外,其他4组大鼠均结扎冠状动脉左前降支复制MI模型。依达拉奉小剂量、中剂量及大剂量组分别腹腔注射依达拉奉1、3和6?mg/kg,假手术对照组和模型对照组大鼠注射同体积生理盐水。各组大鼠模型复制2?h后开始给药,连续给药14?d后进行相关检测,采用高分辨小动物超声仪测定大鼠心脏结构和功能,取腹主动脉血检测血清心肌酶（cTnT、CK-MB、LDH）和抗氧化标志物（SOD、MDA、GSH-Px）,采用TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数,采用RT-PCR法检测心肌PI3K、Akt、Bcl-2及Bax mRNA表达,采用Western blotting检测心肌PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白的表达。结果 依达拉奉呈剂量依赖性降低MI大鼠左心室舒张末期内径（LVESD）和左心室收缩末期内径（LVEDD）水平（P?<0.05）,升高左心室射血分数（LVEF）和左室短轴率（LVFS）水平（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性降低MI大鼠血清cTnT、CK-MB和LDH水平（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性升高大鼠血清SOD和GSH-Px水平（P?<0.05）,降低MDA水平（P?<0.05）;依达拉奉剂量依赖性抑制MI大鼠心肌细胞凋亡指数（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性升高MI大鼠心肌PI3K、Akt和Bcl-2 mRNA的表达（P?<0.05）,降低Bax mRNA的表达（P?<0.05）;依达拉奉呈剂量依赖性升高MI大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt及Bcl-2蛋白的表达（P?<0.05）,降低Bax蛋白的表达（P?<0.05）。结论 依达拉奉对MI大鼠心脏具有保护作用,可降低心肌细胞的凋亡,改善心肌抗氧化能力,并且调控PI3K/Akt信号通路。     

VitaePro抑制线粒体通路对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的：探讨VitaePro对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为四组：正常对照组(H9c2)、缺氧损伤模型组(Hypoxia+H9c2)、红花油组(Safflower oil+hypoxia+H9c2)和VitaePro组(VitaePro+hypoxia+H9c2)。MTT和流式细胞术分别检测心肌细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达,包括B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X (BAX)、凋亡蛋白-3(Caspase-3)和裂解后的Caspase-3(Cleaved caspase-3);试剂盒检测各组心肌细胞硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。最后,Western blot检测心血管损伤标志蛋白的表达,包括心肌肌钙蛋白T (cTnT)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)。结果缺氧损伤模型组与对照组比较,细胞增殖显著下降,凋亡率显著增高(4.2%~14.6%,P<0.05),Bcl-2蛋白的表达明显降低,Bax和Cleaved caspase-3的表达显著升高(P<0.05),TBARS水平和MDA含量升高(P<0.05),SOD活性从44.9 U/mg降低到13.2 U/mg,心血管损伤标志蛋白cTnT、Mb、CK-MB和LDH的表达显著升高(P<0.05)。VitaePro组与缺氧组相比,细胞的增殖升高(P<0.05),凋亡率降低到6.4%,Bcl-2的表达升高,Bax和Cleaved caspase-3的表达明显降低(P<0.05),TBARS水平和MDA含量明显降低(P<0.05),SOD活性增大到41.0 U/mg,cTnT、Mb、CK-MB和LDH的表达显著降低(P<0.05)。结论 VitaePro可以通过抑制线粒体凋亡通路和通过抗氧化作用减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

参附注射液对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax与c-fos基因蛋白表达的影响

目的 观察大鼠急性缺血再灌注损伤与凋亡相关基因Bcl-2、c-fos和Bax蛋白表达的关系及参附注射液(SF)的影响.方法 采用整体缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)模型,35只大鼠分为假手术组(C组)、生理盐水30 min对照组(IR 30)、生理盐水120 min对照组(IR 120)、SF 30 min组(SF 30)和SF 120 min组(SF 120),心肌缺血40 min再灌注30 min或120 min后,用免疫组化法检测Bcl-2、Bax和c-fos在心肌中的表达量.结果 与C组比较,IR组心肌Bcl-2、Bax和c-fos蛋白表达显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著下降(P＜0.01);与IR组比较,SF组Bcl-2蛋白表达显著升高(P＜0.01),Bax和c-fos蛋白表达显著降低(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著升高(P＜0.01).结论 SF对IR心肌保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达、抑制Bax与c-fos蛋白表达、增加Bcl-2/Bax比值,从而抑制心肌细胞凋亡有关.     

盐酸右美托咪定预处理对缺血-再灌注损伤大鼠心肌Bax和Bcl-2表达的影响

目的研究盐酸右美托咪定对大鼠心肌缺血-再灌注损伤时心肌凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将21只健康SD大鼠随机分为3组:假手术组(sham组,n=7)、缺血-再灌注组(I/R组,n=7)、缺血-再灌注+盐酸右美托咪定组(DEX组,n=7)。采用结扎左冠状动脉前降支的方法制备在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型。采用RT-PCR、免疫组化方法检测Bcl-2和Bax mRNA、蛋白的表达,TUNEL法检测凋亡细胞TTC染色测定心肌梗死面积。结果与sham组比较,I/R组Bcl-2和Bax mRNA和蛋白表达增加(P<0.05);与I/R组比较,DEX组Bcl-2mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),凋亡细胞明显减少(P<0.01),心肌梗死面积减小(P<0.05)。结论盐酸右美托咪定预处理可上调心肌缺血-再灌注损伤大鼠心肌Bcl-2mRNA和蛋白表达,下调Bax mRNA和蛋白表达,表明盐酸右美托咪定在心肌缺血-再灌注损伤中有抗凋亡的作用。     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

硫化氢预处理晚期对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax蛋白表达及CK-MB水平的影响

目的研究硫化氢预处理晚期对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及其机制。方法将30只健康成年雄性S-D大鼠随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）和硫化氢预处理组（HS组）,每组10只。Sham组仅分离左冠前降支,不阻断血流150 minI,R组阻断左冠前降支30 min,再灌注120 min,HS组静脉注射硫化氢供体NaHS 50μg/kg,24 h后同IR组处理。于实验结束时抽取动脉血检测肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平;取左室免疫印迹法测Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果与IR组比,HS组CK-MB水平下降,Bcl-2蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少（均P〈0.05）。结论硫化氢预处理晚期通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达和减少CK-MB释放来减轻缺血再灌注损伤发挥心肌保护作用。     

低pH液复灌对兔心肌缺血再灌注的保护作用与Bcl-2、Bax表达的关系

目的探讨低pH液复灌对体外循环(extracorporeal circulation,ECC)下兔缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌的保护作用与Bcl-2、Bax表达的关系。方法成年新西兰大白兔30只,完全随机分为5组(n=6):对照组(C组)不停跳,体外循环180 min;缺血再灌注组(I/R组)全心缺血40 min,再灌注120 min;pH=7.4组与pH=6.9组于再灌注前2 min予37℃的95%O2+5%CO2饱和的pH值为7.4或6.9的K-H液灌注;缺血后处理组(P组)再灌注的前2 min给予缺血后处理。体外循环结束后,光镜观察心肌形态学变化;ELISA测定血清肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)浓度;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与I/R组比较,pH=6.9组和P组心肌组织损伤较轻,cTnI浓度较低(P<0.05),pH=6.9组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显增高[(1.058 1±0.165 7)vs(0.648 2±0.070 8),(0.233 1±0.022 5)vs(0.156 5±0.019 2),P<0.05],Bax mRNA和蛋白表达水平明显降低[(1.353 3±0.138 1)vs(1.901 7±0.198 1),(0.173 5±0.015 1)vs(0.247 1±0.021 3),P<0.05];pH=6.9组和P组之间Bcl-2、Bax表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外循环下再灌注初短暂低pH(pH=6.9)液复灌可以模拟缺血后处理的心肌保护作用,其保护机制与调节Bcl-2、Bax的表达有关。     

维生素K3诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤中Bcl-2和Bax表达的变化及意义

目的：探讨Bcl-2、Bax在维生素K3 (VK3)诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤过程中的变化,为研究VK3诱导肝癌细胞损伤的机制提供参考。方法：体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为对照组和不同浓度VK3处理的实验组（20、40和60 μmol•L^-1）,MTT法检测各组SMMC-7721细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;RT-PCR检测Bcl-2及Bax mRNA表达水平;Western blotting检测Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果：与对照组比较,20 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率、LDH释放率、Bcl-2和Bax mRNA表达量及其蛋白表达量未见明显变化;与对照组比较,40和60 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01);LDH释放率增加(P<0.05或P<0.01);Bcl-2 mRNA表达率降低(P<0.05);Bax mRNA表达量率升高(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);Bax 蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论：40 μmol•L^-1剂量的VK3能够诱导SMMC-7721细胞损伤,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。