Diagnostic multiplex polymerase chain reaction assay for the identification of Pseudomonas aeruginosa from the skin biopsy specimens in burn wound infections and detection of antibiotic susceptibility

OBJECTIVE: To identify Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) from the skin biopsy specimens in burn wound infections by multiplex polymerase chain reaction (M-PCR) and detection of antimicrobial susceptibility of isolates from culture. METHODS: We conducted this cross-sectional study in 140 patients with wound infections who admitted to the referral burn center of Motahari, Tehran, Iran, during a 12-month period from 2005-2006. Skin biopsy specimens were aseptically taken from each patient, one for PCR and one for bacterial culture. A M-PCR test based on the simultaneous amplification of 2 lipoprotein genes: oprI and oprL, was used to directly detect fluorescent pseudomonades and P. aeruginosa in skin biopsy specimens. The susceptibility of P. aeruginosa isolates to 16 antibiotics was determined using the disc diffusion method. RESULTS: Out of 140 biopsy specimens, M-PCR detected 66 (47.2%) isolates, while culture detected 57 (40.7%) isolates as P. aeruginosa. Positive results for both genes which observed only for P. aeruginosa, while only one gene, oprI, was amplified from other fluorescent pseudomonades n=12 and all other bacterial tested n=62 were negative by the amplification test. The most effective antibiotics against isolate of P. aeruginosa were cefepime (79%), azetreonam (76%), ticarcillin-clavulanic acid (68%), tobramycin (62%), and amikacin (61%). CONCLUSION: Multiplex PCR assay appears promising for the rapid and sensitive detection of P. aeruginosa from the burned skin biopsy specimens. Simultaneous amplification of 2 lipoprotein genes: oprI and oprL, could detect P. aeruginosa, and oprI gene only for other fluorescent pseudomonades.     

应用聚合酶链反应对泌尿生殖道沙眼衣原体感染的检测分析

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测了９７例尿道炎、前列腺炎、附睾炎、不育症或宫颈炎症患者的沙眼衣原体（Ｃｔ）感染情况，检出Ｃｔ３５例，总Ｃｔ检出率为３６．１％（３５／９７）。结果表明，泌尿生殖道沙眼衣原体的检出率颇高，因此，对这类病人进行Ｃｔ的ＰＣＲ检测，对于及早发现病原，针对病原治疗，控制性传播疾病是相当重要的。ＰＣＲ技术检测Ｃｔ感染具有特异性强，敏感性高，简便快速等优点。     

宫外孕组织沙眼衣原体感染的研究

建立检测沙眼衣原体的ＰＣＲ方法，计算机辅助设计的引物位于编码沙眼衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）的基因区内，扩增产物为１４４ｂｐ。该引物具有高度的特异性和敏感性，其最小检出量为５ｆｇ。应用该引物检测了５２份宫外孕组织中沙眼衣原体ＤＮＡ，测得宫外孕患者沙眼衣原体的阳性率为４０．４％，明显高于对照组的１２．５％（Ｐ＜０．０１），从ＤＮＡ水平证实在宫外孕组织内存在沙眼衣原体     

用PCR法检测女性泌尿生殖道炎症患者中性病的感染状况

用ＰＣＲ方法对妇科门诊中５８９９例拟诊为泌尿生殖道炎症的女性患者行淋病奈瑟菌（ＮＧ）的检测，阳性率为１８．５７％，其中淋病和尿道炎患者感染率最高，尖锐湿疣、阴道炎和宫颈炎患者次之（Ｐ〈０．０１）。可见这些疾病中均有不同程度的ＮＧ感染。另对８３２９例阴道炎患者进行解脲脲原体（ＵＵ）、沙眼衣原体（ＣＴ）、ＮＧ和人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的检测，阳性率为２０．０１％，其中以ＵＵ和ＣＴ最高，ＮＧ和ＨＰＶ次之（     

湖南省衡阳地区STD患者病原体检测

目的 了解衡阳地区性传播疾病(STD)患者病原体感染情况。方法 对2420例可疑STD患者进行检测：淋病奈瑟菌(NG)、解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)采用培养法；沙眼衣原体(CT)、人乳头瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)核酸采用聚合酶链反应(PCR)法；梅毒螺旋体(TP)采用快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和TP-PA法。结果 STD病原体阳性检出率为38．1％(922／2420)。在922例中UU占29．6％，CT20．8％，HPV17．8％，NG17．4％，MH6．3％，HSV4．2％，TP3．9％。结论 衡阳地区STD患者中UU感染率最高，CT和HPV次之，TP感染率最低。     

实时荧光定量PCR鉴别检测单纯疱疹病毒方法的建立

目的:建立快捷、灵敏、特异的单纯疱疹病毒(HSV)的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测及分型方法。方法:选择HSV1和HSV2的糖蛋白B基因设计一对通用引物和对应的探针组建2个FQ-PCR反应体系,应用克隆的质粒建立系列标准品制作标准曲线,进行重复性和敏感性试验,以其他种类的细菌、病毒、真菌进行特异性分析,并用于检测生殖器疱疹患者的HSV1和HSV2。结果:HSV1和HSV2两标准曲线的线性检测范围均为105到1011Copies/L,相关系数均大于0.99,其他种类的细菌、病毒、真菌均未出现特异性扩增;48例生殖器疱疹患者疱液中HSV1和HSV2的检出率分别为6.3%(3/48)和87.5%(42/48)。结论:实时FQ-PCR法鉴别检测HSV1和HSV2,具有快速、特异、灵敏、便捷的特点,有助于HSV感染的流行病学和病理机制的研究;生殖器疱疹患者以HSV2感染为主。     

难治性慢性前列腺炎的病原体(附30例报告)

[目的 ]检测难治性慢性前列腺炎的致病病原体 .[方法 ]采用聚合酶链反应技术检测 30例难治性慢性前列腺炎病人的前列腺液沙眼衣原体、解脲脲原体、淋球菌、肺炎支原体 .[结果 ]沙眼衣原体、解脲脲原体、淋球菌、肺炎支原体阳性 2 5例 ,阳性率为 84 % ,其中 ,沙眼衣原体和解脲脲原体各占 2 8% ,淋球菌占 2 4 % ,肺炎支原体占 2 0 % ,且两种病原体混合感染率占 2 8% ,3种以上病原体感染占 4 % .[结论 ]在难治性慢性前列腺炎病人病原体中沙眼衣原体、解脲脲原体感染最多见 ,多种病原体的混合感染仍占很高的比例 .     

中枢神经系统感染性疾病的病原学研究

目的 :探讨中枢神经系统感染性疾病的病原学特点。方法 :分别用双抗体夹心ELISA法和传统的细菌及真菌培养等方法检测患者血清IgM ,IgG抗体和脑脊髓液中病原体。结果 :82 3例中枢神经系统急症患者中有 12 6例 (15 .3%)单纯疱疹病毒IgM和 /或IgG阳性 ,其中 10岁以下年龄为高峰。 10 (1.2 %)例巨细胞病毒特异性IgM和 /或IgG阳性 ;8(0 .97%)例水痘 带状疱疹病毒特异性IgM和 /或IgG阳性 ;7(0 .85 %)例为结核性脑膜炎 ;6 (0 .72 %)例为新生隐球菌性脑膜炎 ;1(0 .12 %)例为脑膜炎球菌性脑膜炎。结论 :病毒 ,特别是单纯疱疹病毒 ,是中枢神经系统感染性疾病的常见病原 ;结核杆菌和新生隐球菌感染也占一定比例。     

中枢神经系统感染性疾病的病原学研究

目的：探讨中枢神经系统感染性疾病的病原学特点。方法：分别用双抗体夹心ELISA法和传统的细菌及真菌培养等方法检测患者血清IgM，IgG抗体和脑脊髓液中病原体。结果：823例中枢神经系统急症患者中有126例(15．3％)单纯疱疹病毒IgM和／或IgG阳性，其中10岁以下年龄为高峰。10(1．2％)例巨细胞病毒特异性IgM和／或IgG阳性；8(0.97％)例水痘-带状疱疹病毒特异性IgM和／或IgG阳性；7(0．85％)例为结核性脑膜炎；6(0．72％)例为新生隐球菌性脑膜炎；1(0.12％)例为脑膜炎球菌性脑膜炎。结论：病毒，特别是单纯疱疹病毒，是中枢神经系统感染性疾病的常见病原：结核杆菌和新生隐球菌感染也占一定比例。     

性病性尿道炎并发慢性前列腺炎—附84例报告

目的 :探讨性病性尿道炎并发慢性前列腺炎的病因学特点。方法 :对 84例性病性尿道炎并发慢性前列腺炎患者的前列腺按摩液 (EPS)进行病原体检测并分析结果。结果 :84例EPS细菌培养阳性 5 3例 ,阳性率 63 1% ,其中以淋球菌为主要致病菌 3 2例 ( 3 8 1% )。EPS支原体培养阳性 2 3例 ,阳性率 2 7 4% ,其中解脲支原体 2 1例 ( 2 5 % )。金标免疫层析法检测沙眼衣原体阳性 2 2例 ( 2 6 2 % )。检测出复合病原体 14例( 16 7% )。结论 :性病性尿道炎并发慢性前列腺炎的致病菌以淋球菌、支原体和衣原体为主。认为前列腺液病原体检测 ,对指导性病性尿道炎并发慢性前列腺炎的治疗具有重要临床意义。同时还应注意患者性病后的心理治疗     

Comparison of Tzanck smear, viral culture, and DNA diagnostic methods in detection of herpes simplex and varicella-zoster infection.

OBJECTIVE--To compare Tzanck smears, viral cultures, and DNA diagnostic methods using the polymerase chain reaction (PCR) in detection of herpes simplex virus (HSV) or varicella-zoster virus (VZV) infection in clinically suspected cases. DESIGN--A 12-month trial comparing PCR with viral cultures and Tzanck smears in patients with clinically suspected HSV or VZV infection. SETTING--Both ambulatory and hospitalized patients were recruited from a tertiary referral center and the Miami (Fla) Veterans Affairs Medical Center. PATIENTS--Convenience samples of patients clinically suspected to have HSV (n = 48) or VZV (n = 35). To be included in the final analysis patients needed to have a positive Tzanck smear, viral culture, or PCR result. Patients who were clinically suspected to have HSV but had VZV by viral culture or PCR were analyzed in the VZV group. Similarly, patients who were clinically suspected to have VZV, but had HSV by viral culture or PCR were analyzed in the HSV group. Seventy-seven patients were available for final analysis: HSV (n = 30), VZV (n = 32), and 15 control cases who did not have evidence of viral infection. RESULTS--For HSV, PCR detected HSV DNA sequences in 73% of stained smears and 83% of unstained smears. For VZV infection, VZV DNA sequences were detected in 88% of stained smears and 97% of unstained smears. Viral DNA sequences were not detected in the 15 control cases. Viral cultures were positive in 83% and 44% of HSV and VZV cases, respectively. The Tzanck smear was positive in 60% and 75% of HSV and VZV cases, respectively. CONCLUSIONS--PCR is a reliable method for detecting HSV and VZV DNA sequences from single stained and unstained Tzanck smears. It is clearly superior to viral culture in identifying VZV infection and is equivalent to conventional culture techniques in identifying cases of HSV.     

LAMP与RT-PCR法检测痰结核分枝杆菌的效果比较

目的 比较环介导等温扩增技术(LAMP)和实时荧光PCR技术(RT-PCR)检测结核分枝杆菌的效果.方法 可疑肺结核患者痰标本118份,分别采用痰涂片镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP、RT-PCR方法进行结核分枝杆菌检查.结果 结核分枝杆菌阳性检出率痰涂片镜检38%、罗氏固体培养基培养41%、LAMP 45%、RT-PCR 55%,4种方法阳性检出率比较差异有统计学意义(P＜0.05);以常规罗氏固体培养法为标准,LAMP法的灵敏性和特异性分别为92.0%(46/50)和86.8%(59/68),与罗氏培养法比较差异无统计学意义(P＞0.05),一致性强(Kappa=0.777);PCR法的灵敏性和特异性分别为86.0%(43/50)和66.2%(45/68),与罗氏培养法比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 RT-PCR检测法阳性率最高,但特异性低;LAMP法灵敏性和特异性较高,与传统培养法一致性好,操作简便易行、快速准确.     

国人细小病毒B19感染相关疾病谱

目的：探讨我国人细小病毒Ｂ１９感染引起的相关疾病谱。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术及原位杂交技术对６６例先天性心脏病（ＣＨＤ）心肌组织标本及１０８例血小板减少性紫癜（ＴＰ）、４７例急性再生障碍性贫血（ＡＡＡ）、５例传染性红斑（ＥＩ）及４０例缺铁性贫血（ＩＤＡ）患儿的外周血、骨髓标本进行了Ｂ１９－ＤＮＡ检测,并随机对其中２３例Ｂ１９－ＤＮＡ阳性标本作巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）、     

急性输卵管炎及输卵管性不孕妇女宫颈沙眼衣原体感染的检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测３０例急性输卵管炎和输卵管性不孕及３２例其他妇科疾病患者的宫颈内膜标本沙眼衣原体，以了解女性生殖道衣原体感染情况与一般细胞培养法相比较，结果表明：用ＰＣＲ法测得急性输卵管炎和输卵管性不孕的沙眼衣原体阳性率６０．０％，明显高于对照组１８．７％（Ｐ〈０．０１），并且敏感也较一般培养法高（Ｐ〈０．０１），提示ＰＣＲ法在检测沙眼衣原体感染方面较一般培养法更敏感，快速，早     

从剖宫者产羊水和宫颈标本中检出沙眼衣原体的研究

目的;三文通过检查配对母胎标本中的沙眼衣原体（Ｃｒ）,拟探讨Ｃｔ垂直传播的机制。方法：应用细胞培养,聚合酶链反应（ＰＣＲ）检查配对对母胎标本（宫颈、羊水、新生儿睑结膜）中的沙眼衣原体（Ｃｒ）。结果：１０２例剖宫产配对母胎标本中,宫颈、羊水、新生儿睑结膜均为阳性有２４例。宫颈阴性、羊水、新生儿睑结膜阳性共６例。宫颈阳性、羊水、新生儿睑结膜阴性共４例。宫颈、羊水、新生儿睑结膜均为阴笥有６８例。孕妇的Ｃ     

Study on vertical transmission of Chlamydia trachomatis using PCR and DNA sequencing

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｖｅｒｔｉｃａｌｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｒａｔｅｏｆＣｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（ＣＴ）ｉｎＣｈｏｎｇｑｉｎｇ,Ｃｈｉｎａ．ＭｅｔｈｏｄｓＳｐｅｃｉｍｅｎｓｔａｋｅｎｆｒｏｍ２７８ｗｏｍｅ...     

孕妇早产与病原生物感染的相关性

目的分析梅毒螺旋体（TP）、解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）及弓形体（Tox）、风疹病毒（RuV）、巨细胞病毒（CMV）、单纯疱疹病毒（HSV）（合称TORCH）系列病原生物感染与早产的相关性. 方法对315例早产妇女和100例正常育龄而无自然流产史妇女,采用酶联免疫法 （ELISA）进行梅毒螺旋体和TORCH系列病原体血清IgM抗体检测,同时采用胶体金快速检测法和培养法进行宫颈分泌物CT抗原检测和UU分离. 结果早产组血清TP、Tox、CMV、RuV、HSV IgM阳性率分别是8.57%、16.19%、23.65%、 20.00%、39.05%、对照组阳性率分别是0、2.00%、7.00%、4.00%、9.00%;宫颈分泌物UU、CT抗原检出率早产组分别为37.78%、13.65%,对照组分别为18%、5%,对照组与早产组差异显著（P＜0.05）. 结论 TP、 UU、CT及TORCH系列病原微生物感染是引起孕妇流产的一个不可忽视的重要原因,孕前及孕期进行相关病原微生物检测,对保证胎儿健康出生具有重要的临床意义.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌在结核性脑膜炎诊断中的价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌在结核性脑膜炎诊断中的价值。方法对181例临床确诊的结核性脑膜炎患者、可疑结核性脑膜炎患者和非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本采用涂片、实时荧光定量PCR 2种方法进行检测,对其结果进行对比分析。结果 181例脑脊液标本中,脑脊液涂片检测阳性率为2.21%(4/181),PCR检测阳性率为12.15%(22/181);脑脊液涂片、PCR法检测51例临床确诊的结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为5.88%(3/51)和25.49%(13/51);检测80例临床可疑结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为1.25%(1/80)和11.25%(9/80),2种方法的阳性检测率比较差异有统计学意义(χ2=10.654,P<0.05)。50例非结核性脑膜炎患者脑脊液标本涂片及PCR检测均为阴性。结论实时荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的临床价值,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。     

聚合酶链反应在沙眼衣原体感染患者随访中的意义

研究聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法在沙眼衣原体感染患者随访观察中的意义。方法对３０例患者进行治疗后随访。３０例患者在治疗前ＰＣＲ和直接免疫荧光法（ＤＦＡ）检测均阳性，其中１５例患者服用美满霉素１００ｍｇ，每日２次，连用１０日；１５例患者服用阿奇霉素１．０ｇ，一次顿服。结果停药１～２周后复查，３０例患者ＤＦＡ检测全部为阴性，３０例患者中ＰＣＲ检测９例仍阳性，２１例阴性。结论沙眼衣原体感染患者在服用抗生素后，ＰＣＲ阳性不能肯定为有活性的沙眼衣原体存在，因其死亡的ＤＮＡ片段可在体内存留１个月，只要有ＤＮＡ片段存在，ＰＣＲ检测均为阳性。     

不育症妇女宫颈沙眼衣原体和解脲脲原体检测及其治疗

用细胞培养法、ＰＣＲ和ＩＦＡ检测１４５例不育症育龄妇女及４５例正常育龄妇女宫颈拭子沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲脲原体，并以强力霉素和四环素治疗阳性病例。结果示，用细胞培养，ＰＣＲ、培养片ＩＦＡ及直接涂片ＩＦＡ检测不育症组宫颈ＣＴ，检出率分别为６２．７％、６６．８％、６４．８％和３６．５％，明显高于对照组（Ｐ〈０．０１），Ｕｕ分离率为３３．１％，ＣＴ与Ｕｕ合并感染率为１８．６％，两者均明显高于对照组（Ｐ