人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

一种简便实用的肿瘤体外侵袭模型

1　材料和方法1.1　材料　侵袭细胞 ,鸡胚 ,培养基 ,琼脂小牛血清 ,胰蛋白酶 ,HIPES恒温培养箱 ,CO2 孵箱 ,倒置显微镜等 .1.2　方法　 1细胞球体的制备 :用弯头吸管将长满瓶壁的瘤细胞层横割划成面积约 1cm2的方块 ,倒出培养液 ,加入适量 2 g· L- 1 的胰蛋白酶 (不含 EDTA)消化液 ,在倒置显微镜下边消化边观察 ,当划痕处出现细胞层卷起后立即终止消化 ,倒出消化液 ,加入含 15 0 g· L- 1 小牛血清的 RPMI 16 40培养液 3～ 5 m L ,吹打细胞使其呈小片状脱落 ,将细胞小片连同培养液一起移入底部铺有 2 0 g·L- 1琼脂的培养瓶内 ,置 …     

牛坐骨神经内源性抑制物对体外培养DRG细胞分化的影响

目的　在新生牛坐骨神经提取对背根神经节 (dorsalrootganglia,DRG)细胞存活和突起生长有抑制活性的物质 .方法　原代培养 DRG细胞 ,实验组分别以不同浓度加入前一实验证实对 PC12细胞有抑制活性 ,Mr5 0 0 0～ 10 0 0 0之间的新生牛坐骨神经提取液 ,对照组中加入培养液 . 48h后进行MTT细胞活性测定、总蛋白含量测定以及观察细胞突起生长情况 .结果　实验组加入提取液蛋白浓度为 2 0 m g· L- 1 ,40mg· L- 1时 ,DRG细胞的活性、总蛋白含量以及突起的生长无明显变化 ;当提取液的浓度为 80 mg· L- 1 ,16 0 mg· L- 1时 ,DRG细胞胞体皱缩 ,突起生长缓慢、停滞 ,细胞活性和总蛋白含量明显减低 .对照组的 DRG细胞生长良好 .结论　新生牛坐骨神经内存在一种对体外培养的 DRG细胞存活及突起生长有抑制作用的物质 .     

胰蛋白酶预处理在人角质形成细胞传代培养中的应用

1　材料和方法1.1　材料　 1KC的培养 :无菌条件下手术取人包皮 ,尽量剪除皮下组织 ,置于 1.5 g· L- 1 Dispase液中 4℃ 18～ 2 4h.将真表皮分离 ,取表皮分别置于 2 .5 g· L- 1胰蛋白酶 0 .1g·L- 1二乙胺四乙酸二钠 (EDTA)及含 10 0 m L· L- 1血清的DMEM中吹打成单细胞悬液 ,离心 30 0 g· m in- 1 ,10 min,弃悬液 ,KC无血清培养基 (Gibco BRL )重悬细胞 ,调整细胞数至1× 10 3· L- 1 ,接种至 6孔培养板 ,2 4h后换液 .当细胞生长至 80 %～ 90 %汇合时 1∶ 2传代 .1.2　方法　 1分组 :KC传代时分为两组 ,预处理组 :细胞约80 %…     

异搏定对非p-gp高表达细胞株的增敏及耐药逆转作用

目的 :观察异搏定 (verapamil ,Ver)对非p -gp高表达细胞株的增敏及耐药逆转作用。方法 :使用二甲氧唑黄比色法 (XTT法 )检测药物敏感性 ,观察Ver对鬼臼乙叉甙 (etoposide ,VP16)的增敏及耐药逆转作用。结果 :单独Ver对HL 60和HL 60 /Adr细胞株的IC50 分别为 2 6.13mg·L-1和 3 9.0 0mg·L-1,单独VP 16对HL 60细胞的IC50 为 2 47.17μg·L-1,而加用Ver 5mg·L-1预处理 1h后 ,VP16对HL 60细胞的IC50 值下降为原来的 1/1.73 ;单独VP 16对HL -60 /Adr细胞的IC50 为872 .97μg·L-1,而加用Ver 5mg·L-1预处理 1h后 ,IC50 下降至 2 0 8.45 μg·L-1,为原来的 1/4.19,与VP16对HL 60敏感株的IC50 接近。结论 :Ver对非p gp高表达细胞株具有增敏及耐药逆转作用     

人增生性瘢痕组织中微血管内皮细胞的分离、纯化和培养

目的　微血管内皮细胞 (MEC)增殖和血管发生存在于很多生理和病理过程中 ,为体外重建人增生性瘢痕组织微血管内皮细胞 (HSMEC)生长模型 .方法　正常人包皮和增生性瘢痕经 1.2 5 g· L- 1 dispase和 1.2 5 g· L- 1 胰蛋白酶依次消化 4℃ 2 4h后 ,机械挤压分离组织内 HSMEC和人真皮微血管内皮细胞 (HDMEC) ,经 5 0 0 0 U· L- 1 b FGF,2 0 0m L· L- 1胎牛血清的 DMEM内培养和 0 .1g· L- 1胰蛋白酶 ,0 .15 mmol· L- 1 EDTA的 TE分离、纯化 ,组织学 HE染色和 因子相关抗原免疫组化染色 ,观察 MEC的阳性细胞百分数 .结果　 MEC在含 b FGF培养基中增殖旺盛 ,少量混生的成纤维细胞经 TE分离 MEC而被基本遗弃 ,3代 MEC能获得 97.0 %～ 98.0 %的纯度 ,明显高于原代培养 (P<0 .0 1) ,HSMEC形态学与 HDMEC无明显差异 .结论　低浓度b FGF和 TE细胞分离液分别对 MEC的培养和纯化有可靠作用 ,HSMEC的培养成功为烧伤创面愈合和瘢痕增生机制的研究扩展了空间 .     

原代培养猴骨髓基质细胞与骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的 :原代培养猴骨髓基质细胞与骨髓间充质干细胞 ,比较两种原代培养细胞形态、生长状况的差异性 .方法 :以骨髓悬液直接贴壁培养的方法获取骨髓基质细胞 ,以Per coll细胞分离介质 (质量浓度 10 73g·L-1)分离出骨髓悬液中的骨髓间充质干细胞 ,用含 10 0mL·L-1胎牛血清的DMEM培养液分别进行培养 ,观察细胞的生长状况 .结果 :原代培养的骨髓基质细胞增殖迅速 ,扩增细胞基本都呈形态均一成纤维样细胞 ,接种 1wk后细胞已长满 ,3wk后可形成钙化结节 .原代培养的骨髓间充质干细胞增殖缓慢 ,细胞增殖情况和增殖细胞形态不均一 ;有一些细胞在 4wk的培养时间内未见明显增殖 ,这些增殖不明显的细胞有的未见明显的伸张 ,呈圆形 ,有的伸展充分 ,成片状 ,偶见有神经元样的细胞出现 ;在培养 2wk后也可见一些出现明显增殖的细胞 ,分别形成克隆团状或条带状的细胞群 .结论 :非诱导条件下原代培养扩增的骨髓基质细胞与骨髓间充质干细胞不同 ,前者种类均一 ,可自发向成骨方向发展 ;后者则表现出间充质干细胞的多向分化潜能 .     

表皮细胞生长因子对培养表皮角朊细胞DNA合成的影响

目的 :选择培养表皮角朊细胞时添加表皮细胞生长因子 ( EGF)及小牛血清的最适浓度。方法 :添加不同浓度的 EGF及小牛血清 ,测定 3 H- Td R掺入量。结果 :添加 2 0μg· L-1EGF时3 H- Td R掺入量明显高于添加 5和 1 0 μg·L-1EGF时。结论 :2 0 μg·L-1EGF、2 0 %小牛血清为培养表皮角朊细胞的最适浓度。     

表皮生长因子和牛垂体提取物对无血清培养的人垂体腺瘤细胞的作用

目的　观察表皮生长因子 (EGF)和牛垂体提取物(BPE)在人垂体腺瘤细胞培养中的作用 .方法　将不同浓度的EGF和BPE作用于体外培养的人垂体腺瘤细胞 ,用MTT及3 H TdR掺入法测定细胞增殖及DNA代谢的变化情况 ,并用TUNEL和台盼蓝染色观察细胞凋亡和死亡情况 .结果　不同浓度的EGF和不同浓度的BPE对体外无血清培养的人垂体腺瘤细胞均表现出明显的刺激作用 ,并呈一定的剂量效应关系 .同时 ,EGF和BPE均可降低体外无血清培养的人垂体腺瘤细胞的死亡及凋亡数量 .以含 10 0mL·L-1血清的DMEM培养液组的A490nm 值和cpm值为 10 0 % ,无血清的DMEM组的A490nm值和cpm值为 (8.6± 5 .2 ) %和 (9.4±5 .4 ) % ;含 2 0mg·L-1EGF和 1mg·L-1BPE的无血清DMEM培养液组的A490nm 值和cpm值为 (98.7± 5 .3) %和(10 2 .4± 5 .5 ) % ,而凋亡指数 (AI)仅为 3.5± 0 .9,提示EGF和BPE之间具有协同作用 .结论　EGF和BPE具有明显改善人垂体腺瘤细胞体外无血清培养条件的作用 ,EGF和BPE对离体培养的垂体腺瘤细胞增殖具有促进作用     

氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞增殖抑制及促细胞凋亡样改变

目的 :探讨氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞 (ASMCs)增殖抑制和促凋亡作用及在哮喘发生、发展中的机制 .方法分离大鼠气道平滑肌 ,在含有 10 0mL·L -1胎牛血清的DMEM中培养 ,第 4～ 6代细胞用于实验 ,细胞用不同浓度氨茶碱 (0 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 ,30 0 ,4 0 0mg·L -1)诱导培养12～ 72h ;用光学显微镜观察其形态学凋亡改变 ;用琼脂糖电泳分析DNA片段 .结果 :①氨茶碱以时间和浓度依赖的方式降低存活的细胞数 ;②当氨茶碱浓度 >5 0mg·L -1时 ,光镜下可见细胞核皱缩、碎裂 ,随着药物浓度增加 ,凋亡小体形成 ;③当氨茶碱浓度 >5 0mg·L -1时 ,琼脂糖电泳显示了典型的梯状条带 .结论 :实验表明氨茶碱可以诱导体外大鼠ASMCs发生凋亡样改变     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

内毒素对睾丸功能影响的研究进展

众所周知生殖道感染、炎症和其他疾病可抑制雄性生殖功能,但对系统性炎症和疾病引起男性不育的具体机制却所知甚少。内毒素是一种高效炎症激活物,可诱导炎症感染、内毒素血症、败血症休克及多组织器官损伤等,虽然内毒素广泛用于其他系统的炎症研究,但对其在生殖系统炎症的研究较少,因而深入了解内毒素对睾丸功能的影响,有助于进一步理解内毒素所致疾病对雄性生殖功能的影响。本文就内毒素的结构和生物学功能及其对睾丸生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞功能的影响进行了相关研究。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的研究莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法用MTT法测定莪术醇对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测莪术醇对SGC7—901细胞周期和细胞凋亡的影响。结果10、30、100μg／mL莪术醇均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;莪术醇能使S和G2／M期肿瘤细胞比例减少,G0／G1期肿瘤细胞比例增加,其中100μg／mL浓度的莪术醇作用最强（F=88．14,P〈0．01）;莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,其中100μg/mL浓度的莪术醇凋亡作用最强（F=34．14,P〈0．01）。结论莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。