立体培养条件下人皮肤成纤维细胞的生物学特性

目的 观察人皮肤成纤维细胞在立体培养条件下的生长、增殖及代谢情况。方法 以人纤维蛋白凝胶为载体，将人皮肤细胞中的成纤维细胞接种于其中，以单层培养为对照，观察细胞对纤维蛋白胶的作用及其在生长增殖、DNA合成及胶原合成等方面的生物学变化。结果 成纤维细胞在纤维蛋白胶中具有良好的细胞形态、正常的生长增殖、DNA合成及胶原合成等生物学功能并能引起纤维蛋白凝胶的明显收缩。结论 该培养系统可用于成纤维细胞的体外培养且能较好地模拟其在创面愈合中的生物学行为。     

烧伤病人动、静脉留置针输液的护理

动、静脉留置针输液是近几年兴起的一种新的输液方法。它选择血管广泛，不易引起刺破血管形成血肿，能多次使用同一血管，维持输液时间长，短时间内可输入大量液体，是烧伤休克期、烧伤手术及术后维持输液的理想方法。其输液方法是常规消毒皮肤后进针部位用１％普鲁卡因或利多卡因浸润麻醉，进针方法同一般静脉穿刺，见回血后将留置针外管沿血管方向推进，退出针芯，接通输液。作者就采用动、静脉留置针输液时血管的选择、穿刺方法、留置时间及护理作了阐述。认为采用此方法输液简便实用，且国产动、静脉留置针购货容易、价格低廉。     

端粒酶活性对人表皮干细胞分化影响的实验研究

目的：通过重建端粒酶活性延长人表皮干细胞寿命，为组织工程皮肤修复提供理想种子细胞。方法：用差速黏附法分离获得人表皮干细胞（human epithemal stem cells，hESCs），以TRAPeze ELISA法分别检测新鲜的不同传代次数的hESCs端粒酶活性（RTA），同时把含外源性人端粒酶逆转录酶的质粒导入hESCs，比较转染细胞与非转染细胞体外培养时端粒酶活性及生存情况。结果：非转染细胞随传代次数的增多RTA逐渐减弱，到12-16PD时出现细胞衰老、死亡、增殖停止；转染细胞到26PD时细胞形态无明显改变，细胞继续生长，RTA仍未减弱。结论：人表皮干细胞在体外培养过程中，仍具有端粒酶活性，但不足以抑制该细胞的衰老。重建端粒酶活性可延长人表皮干细胞寿命并维持自我更新，为建立组织工程标准细胞系提供了新的实验手段。     

神经激肽1受体非肽类拮抗剂对严重深Ⅱ度烫伤大鼠早期炎性神经递质P物质免疫活性物质含量的影响

目的:探讨静脉给予L-703,606后严重烫伤大鼠P物质免疫活性含量的变化规律。方法:实验于2003-03/2004-01在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。选择SD大鼠76只,按随机数分为正常对照组(4只),烫伤对照组(24只),L-703,606组(24只),β-七叶皂甙钠组(24只),运用放射免疫测定方法,动态检测经尾静脉给予神经激肽1受体非肽类拮抗剂L-703,606(250nmol/kg)后深II度烫伤大鼠(20%TBSA)烫伤后早期72h创周及空肠P物质免疫活性物质含量的变化。结果:76只大鼠进入结果分析。①与正常对照组相比,L-703,606组、β-七叶皂甙钠组大鼠创周及空肠P物质免疫活性物质含量同烫伤对照组具有类似规律。烫伤后早期(1h)P物质免疫活性物质含量明显升高,(P<0.01),但均低于烫伤对照组(P<0.01);而后逐渐下降。与烫伤对照组相比,L-703,606组P物质免疫活性物质含量的病理性改变明显较轻,且轻于β-七叶皂甙钠组。结论:神经激肽1受体非肽类拮抗剂L-703,606能抑制严重烫伤大鼠早期P物质免疫活性物质含量的变化,为减轻严重烧伤后早期包括血管通透性增加、血浆蛋白外渗等炎症反应及局部和全身水肿形成提供新的思路。     

组织工程皮肤构建中胎儿皮肤标本玻璃化冻存的实验

目的：建立一种用于细胞培养的皮肤标本新的保存方法。 方法：实验于2004-05-01／2-31在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室进行。①分别取流产胎儿头部及躯干部全层皮片（家属知情同意），按照标本保存方法不同分为常规组（4℃保存2h）、冻存1组（-196℃液氮保存1周组）、冻存2组（-196℃液氮保存1个月组）和冻存3组（-196℃液氮保存6个月组）。采用抗冻液4℃下预处理20min后直接快速置于-196℃液氮中的玻璃化冻存方法进行冻存。②分别进行胎儿角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞的原代培养，进行细胞形态学观察，并采用锥虫蓝染色法、四唑盐比色法和克隆形成实验观察培养的第2代角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞的活力。 结果：①与常规组同种细胞相比，冻存1组、冻存2组和冻存3组的胎儿角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞的形态学特点基本相同。②与常规组相比，冻存1组、冻存2组和冻存3组角质形成细胞、成纤维细胞和毛乳头细胞活细胞率、细胞存活率及克隆形成率差异均无显著性意义（P〉0．05）。 结论：利用液氮玻璃化保存用于细胞培养的皮肤标本不会影响细胞活力，是保持组织活性的一种有价值的组织标本保存方法，对组织工程皮肤的建立，乃至构建组织细胞库有着重要意义。     

大鼠烫伤后不同时间、不同厚度皮片移植对p53基因表达的影响

目的:了解大鼠深Ⅱ度烧伤后不同时间、不同厚度皮片移植对细胞增殖的抑制因子-抑癌基因p53基因表达影响。方法:实验于2002-07/2003-08在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室及基础部生物化学实验室完成。每只大鼠背部两处1%深Ⅱ度烫伤,行自体刃厚、全厚皮片移植,移植时间分别为:伤后即刻、伤后1周、伤后2周,在皮片移植术后的1,2,3,4周时间点取材,每个时间点5个标本。提取标本组织总mRNA,行p53基因及内参照PCR扩增,电泳后比较各时间点总光密度值。结果:在伤后即刻、伤后1周及伤后2周皮肤移植p53基因表达量为0.82±0.12,0.72±0.09,0.65±0.07,刃厚、全厚皮片移植后p53基因表达量为0.63±0.06,0.85±0.11,在不同移植时间组及刃厚与全厚皮片组间比较差异均有非常显著性意义(P<0.01),p53基因在大鼠的创伤愈合中表现出了与尽早皮片移植及移植物厚度上的正相关性。结论:p53参与了大鼠烧伤后皮肤移植后的创伤愈合,尽快及尽可能厚的皮肤移植有助于p53表达的增高,可能与减少瘢痕形成有关。     

组织工程新技术：胚胎干细胞滋养层细胞的培养及其预处理条件

背量：人胚胎干细胞的培养及相关研究一直是近年来国内外科学家关注的热点，而胎鼠成纤维细胞作为滋养层细胞则是胚胎干细胞培养中不可或缺的条件。目的：探讨胎鼠成纤维细胞作为滋养层细胞在培养、传代及预处理等方面的条件。设计：分组实验研究。地点和对象：解放军第四军医大学西京医院烧伤科完成，对象为一级昆明小鼠，孕龄12d左右，由该校实验动物中心提供。干预：用胰蛋白酶消化法培养胎鼠成纤维细胞，观察细胞在增殖、传代、冻存及复苏等方面的条件；用不同浓度的丝裂霉素对细胞进行预处理，利用MTT法测定细胞的生长曲线，筛选最佳浓度及作用时间。主要观察指标：胎鼠成纤维细胞的培养和预处理。结果：胎鼠成纤维细胞的增殖速度较快，在第4代以后细胞开始变形并趋于衰老；以20mg／L丝裂霉素处理细胞2h，可明显抑制细胞的增殖而不引起细胞的死亡。结论：作为滋养层细胞，胎鼠成纤维细胞应选择第4代以前的细胞，丝裂霉素处理条件为20mg／L作用2h。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕的作用

目的：探讨碱性成纤维性细胞生长因子（bFGF)对移植至裸鼠皮下的人增生性瘢痕的作用。方法：将烧伤患者手术切除的增生性瘢痕移植到裸鼠背部皮下，动物随机分为5组：对照组，bFGF组，胶原酶组， FGF 胶原酶组和玻璃酸钠组，瘢痕块移植后2周分别用上述不同药物局部注射至瘢痕内共3次，每次间隔3d，后观察疤痕大小的1／2－1／3且软，能使粗大密集的胶原束变松散成团，其结构大部分消失，bFGF 胶原酶组所移植的瘢痕组织块有2／3消失，结论：增生性瘢痕局部应用bFGF可以降低瘢痕胶原，瘢痕中粗大的胶原束结构大部分消失。     

强化胰岛素治疗拮抗严重烫伤大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的 了解强化胰岛素治疗对重度烫伤大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及机制.方法 将18只SD大鼠分为3组,每组6只.烫伤组及强化组大鼠背部脱毛后造成30%TBSA的Ⅲ度烫伤.强化组伤后静脉注射胰岛素等渗盐水(15 mU·kg-5·min-1)和100 g/L葡萄糖;烫伤组给予等渗盐水(2 mL·kg-1·1%TBSA-1·8 h-1);假伤组模拟烫伤,伤后给予生理量的液体.记录3组大鼠伤后6 h的左心室压力最大上升/下降速率(±dp/dt max);采用原位末端标记法和DNA梯带法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Bcl-2的表达水平.结果 假伤组、强化组、烫伤组大鼠+dp/dt max值分别为(5.5±0.5)x 103、(3.4±0.4)×105、(2.5±0.5)×103mm Hg/s(1 mm Hg=0.133 kPa);-dp/dt max值分别为(4.55±0.34)× 103、(2.94±0.22)× 103、(2.05±0.19)× 103mm Hg/s.烫伤组大鼠±dp/dt max均低于强化组(P＜0.01).烫伤组大鼠心肌细胞凋亡指数[AI,(13.1±3.4)%]明显高于假伤组[(0.6±0.4)%,P＜0.01];强化组AI为(6.7±1.8)%,明显低于烫伤组(P＜0.01).假伤组大鼠心肌组织未见DNA断裂条带,烫伤组可见明显的DNA断裂形成梯带,而强化组梯带形成不明显,表示其凋亡细胞明显少于烫伤组.烫伤组心肌组织内p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平明显低于强化组.结论 强化胰岛素治疗通过上调Akt活性,增加Bcl-2的表达,可能是其抗心肌细胞凋亡、保护心功能的机制之一.     

特重度烧伤后伴多处严重畸形的功能重建

To explore new measures for functional reconstruction of multiple severe deformities as a result of extensive deep burn( total burn surface area ≥90% TBSA, including deep burn ≥ 70% TBSA)in late stage. Twelve severe bum patients with above-mentioned deformities were hospitalized in our ward during 1960 ～ 2005,the sears resulted from bums were distributed from head to foot with 173 deformities, including 27 scar ulcers. All patients lacked of self-care ability, among them some could not stand. Due to inadequate skin source, deformities were corrected by skin from matured scars expanded with subcutaneous balloon at late postburn stage. Following our former clinical experience, anatomic investigation and experimental re search, we chose the following methods to correct deformities and restore functions: application of split-thickness scar skin after expansion(88 wounds) ; use of sear skin flap/scar-Achilles tendon flaps (59 wounds) ; combination of thin split-thickness skin grafts from scar and allogeneic acellular dermal matrix (composite skin,40 wounds).All grafts survived, the appear ance and function were improved obviously without complica tions. Follow-up 1～ 40 years, all patients could take care them selves with satisfactory function and appearance, and among them 8 patients returned to work ( one had worked for 40 years),2 pa tients married and had children. The above-mentioned measures are safe, reliable and effective for functional reconstruction of deformities.