大鼠皮肤的冷冻干燥保存

背景：细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据。 目的：用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性。 设计、时间及地点：观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成。 材料：体质量150 g左右成年SD大鼠。海藻糖由Sigma公司提供。 方法：通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9 h)和温度[4 ℃、4~37 ℃(相转变)和37 ℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件。将负载海藻糖的皮肤置于含100 g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1 ℃/min的速率降温至-80 ℃后移入冷冻干燥机中进行冻干。将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照。以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植。 主要观察指标：海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况。冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况。 结果：海藻糖浓度小于800 mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P < 0.05),浓度大于800 mmol/L,海藻糖载入量差异不显著。孵育温度为37 ℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4 ℃组(P < 0.05),相转变组与37 ℃组差异无统计学意义。皮肤孵育4,7,9 h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5 h的载入量(P < 0.05),孵育时间为4,7,9 h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7 h后皮肤的海藻糖载入量不再增加。实验以海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37 ℃,孵育时间为7 h为优化的负载条件处理大鼠皮肤。冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状。水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别。冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤 (P < 0.05)。冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠,可存活长达13 d。 结论：海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存,海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37 ℃,孵育时间为 7 h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件。     

使用人骨钙素启动子实现在体研究成骨细胞特定基因的功能

目的:使用骨钙素启动子构建骨组织特异性小发卡状RNA表达载体.方法:实验于2003-11/2004-09在解放军第四军医大学全军骨科研究所和全军整形外科中心完成.以HEK293细胞基因组为模板,利用聚合酶链反应扩增人骨钙素启动子.将骨钙素启动子、针对虫荧光素酶的小发卡状RNA编码序列和多腺苷酸信号依次克隆至pGL3-control载体的相应酶切位点,经双酶切鉴定和DNA测序证实后命名为pGL3-OCP-shLuc.将pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control分别共转染人胚胎肾细胞HEK293和人骨肉瘤细胞MG-63,48 h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性.结果:使用特异性引物成功扩增出长度为830 bp的人骨钙素启动子聚合酶链反应产物.DNA测序结果证实pGL3-OCP-shLuc中的小发卡状RNA表达框与设计完全一致.pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control共转染HEK293细胞后,虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而共转染MG-63细胞后虫荧光素酶相对活性显降低,剔出效率约为69.8%.结论:成功使用人骨钙素启动子构建了小发卡状RNA表达载体,并实现了骨组织特异性RNA干扰,为将RNA干扰技术引入骨肉瘤基因治疗领域奠定了基础.     

全身结核死亡1例

患者,女,16岁,学生.主因消瘦、腹部不适半年入院.患者于半年前无明显诱因出现腹部不适、腹胀,呈持续性,伴有食欲不振,无恶心、呕吐,无咳嗽、咳痰,曾就诊于当地医院,超声示盆腔积液,胸片示肺结核,结核菌素试验阴性,诊断为"结核性腹膜炎",予抗结核治疗,症状有所好转出院.     

阿立哌唑与富马酸喹硫平治疗精神分裂症疗效观察

【目的】比较阿立哌唑与富马酸喹硫平治疗精神分裂症的疗效及不良反应。【方法】将80例精神分裂症患者随机分为阿立哌唑组与富马酸喹硫平组各40例。阿立哌唑剂量为10～30mg／d，富马酸喹硫平为400～800mg／d，疗程8周。采用阳性阴性症状量表（PANSS）评定疗效，采用副反应量表（TESS）和锥体外系副反应量表（RSESE）评定不良反应。【结果】阿立派唑有效率为87．5％，富马酸喹硫平有效率为85．0％，两组治疗效果无显著性差异。但副反应富马酸喹硫平组明显高于阿立哌唑组。【结论】阿立哌唑为一种安全有效且耐受性较好的抗精神病药。     

放-化疗联合治疗原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的疗效观察

目的：观察放-化疗联合治疗对原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的近期疗效。方法：52例确诊为原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者,随机分为治疗组与对照组。对照组接受单纯放疗治疗,治疗组接受放-化疗联合治疗。化疗加放疗1～2个疗程后,在放疗过程中,加用静脉注射左旋门冬酰胺酶每次20mg/m^2。两组患者治疗结束后1个月内评价疗效。结果：治疗组临床疗效明显好转,完全缓解率为73.1%,高于对照组（42.3%）,两组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：放-化疗联合治疗原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤近期疗效较好。     

高脂血症性胰腺炎临床特点分析及治疗方法探讨

目的 探讨高脂血症性胰腺炎的发病特点及诊治方法.方法 分析该科自2005年7月～2011年7月收治的高脂血症性胰腺炎患者的临床资料.结果 全组30例,年龄(33.7±13.4)岁,体质量指数男性(29.5±3.2),女性(23.4±5.6) ;反复发作10例 ;多伴有糖尿病、脂肪肝等疾病.其中轻型23例,重型7例,血三酰甘油平均值重型组较轻型组为高,经治疗后血TG降至5.65 mmol/L以下的平均时间及平均住院天数重型组较轻型组为长.其中有3例重型胰腺炎患者采取血液灌流治疗,其血TG降至5.65 mmol/L以下的时间及平均住院天数均明显缩短.结论 HAP有发病年龄轻、体型肥胖、可以反复发作的临床特点,且多有基础病.HAP在一般急性胰腺炎治疗基础上有其自身特点.     

RNA干扰技术简介

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double—stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。近几年来RNAi研究取得了突破性进展，被((Science))杂志评为2001年的十大科学进展之。一，并名列2002年十人科学进展之首。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。     

基因免疫接种技术与基因免疫苗

基因免疫接种和基因免疫苗是近几年来迅速发展的研究领域，在病毒性疾病和肿瘤防治中有着广阔的应用前景。本文阐述基因免疫接种诱发宿主免疫应答的机理，概述基因免疫接种方法及做为疫苗的可行性。     

构建MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1表达的腺病毒载体

目的：构建串联的MYC反应元件修饰人端粒酶逆转录酶（hTERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1表达的复制缺陷型腺病毒载体。方法：将串联的MYC反应元件修饰的hTERT核心启动子及下游酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1克隆到穿梭质粒pDC316上，上辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞获得重组复制缺陷型腺病毒并在HEK293细胞中扩增重组病毒。PCR法及斑形成实验鉴定重组腺病毒和病毒滴度。结果：成功获得由6倍和18倍MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的复制缺陷型腺病毒载体。结论：MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的腺病毒载体为进一步研究骨肉瘤转录靶向基因治疗奠定了基础。