缺硒饲养ICR小鼠加快肠道病毒71型在体内的复制研究

目的观察硒蛋白对手足口病病原体肠道病毒71型（EV71）在感染动物体内复制的影响情况。方法将30只雌性ICR小鼠分为常规饲料组、缺硒饲料组和加硒饲料组,各种饲料饲养小鼠6周后,通过电感耦合等离子体质谱仪（ICP—MS）测定小鼠外周血中硒的含量以及荧光定量PCR方法测定动物体内肠道病毒EV71的载量．然后用病毒空斑实验测定病毒滴度并用酶促法来测定主要硒蛋白酶的活性。结果通过测定外周血中硒的含量发现,缺硒饲料组的ICR小鼠硒含量为0．081μg／g,显著低于常规饲料组0．135μg／g和加硒饲料组的0．128μg／g,差异有统计学意义（P〈0．01）;用荧光定量PCR方法测定EV71载量,加硒饲料组ICR小鼠体内EV71核酸扩增Ct值,明显高于缺硒饲料组（P〈0．05）;ICR小鼠体内主要硒蛋白酶（GPX1）的活力在缺硒饲料组的动物体内显著低于加硒饲料组：病毒空斑实验结果表明,缺硒饲料组的ICR小鼠体内EV71病毒复制活力显著高于其他两组。结论缺硒可能导致硒蛋白GPX1合成减少或其活力降低从而加快EV71在宿主内的复制。     

亚硒酸钠对脑胶质瘤细胞生长及线粒体膜电位的影响

目的:研究亚硒酸钠对人脑胶质瘤细胞生长抑制效应及线粒体膜电位的影响。方法:使用不同浓度的亚硒酸钠(0.004、0.020、0.100及0.500μmol/L)对人脑胶质瘤细胞SHG-44进行侵染,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测亚硒酸钠对SHG-44增殖的影响,提取细胞线粒体后通过激光扫描共聚焦显微镜下观察SHG-44的荧光强度,分析SHG-44的线粒体膜电位。结果:亚硒酸钠对人脑胶质瘤细胞生长具有明显的抑制作用,且随亚硒酸钠浓度的增加抑制作用逐渐加强,0.100及0.500μmol/L染硒组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),0.004及0.020μmol/L染硒组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);0.100、0.500μmol/L染硒组线粒体膜电位显著降低(P<0.05),0.004及0.020μmol/L组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:亚硒酸钠能抑制人脑胶质瘤细胞SHG-44生长,并且降低其线粒体膜电位。     

亚硒酸钠对亚砷酸致HepG2细胞DNA损伤的影响

目的 观察硒对砷致HepG2细胞DNA损伤的影响.方法 以人肝肿瘤细胞HepG2为靶细胞,分别以亚硒酸钠(2.5、5.0和10.0 μmol/L)和亚砷酸(1.56、3.125、6.25、12.5和25.0 μmol/L)为受试物处理HepG2细胞,再以亚硒酸钠与亚砷酸联合处理HepG2细胞,应用单细胞凝胶电泳试验检测亚硒酸钠、亚砷酸单独及联合染毒对HepG2细胞DNA的损伤作用.结果 与溶剂对照相比,10.0 μmol/L亚硒酸钠使HepG2细胞DNA的Olive尾矩显著增加(P＜0.05),2.5、5.0 μmol/L亚硒酸钠使Olive尾矩有减少的趋势,但差异无显著性意义.6.25、12.5和25.0 μmol/L亚砷酸均使HepG2细胞DNA的Olive尾矩显著增加(P＜0.01或P＜0.05),且呈现剂量依赖关系.25.0 μmol/L亚硒酸钠与12.5 μmol/L亚砷酸联合作用与12.5 μmol/L亚砷酸单独作用相比,Olive尾矩减小,差异有极显著性意义(P＜0.01).5.0 μmol/L亚硒酸钠与25.0 μmol/L亚砷酸联合作用与25.0 μmol/L亚砷酸单独作用相比,Olive尾矩增加,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 亚硒酸钠对亚砷酸诱导的HepG2细胞DNA损伤的减弱或增强作用与亚硒酸钠和亚砷酸浓度有关.     

亚硒酸钠对人增生性瘢痕成纤维细胞体外增殖的影响

目的：观察亚硒酸钠对人增生性瘢痕成纤维细胞体外增殖的影响。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取第4代细胞用CCK‐8检测成纤维细胞的增殖情况,分为试验组和对照组,试验组分为6组（A、B、C、D、E、F组）,分别加入等量含2．5、5．0、10．0、20．0、40．0、80．0μmol／L浓度亚硒酸钠的10％胎牛血清培养基;对照组加入等量的10％胎牛血清培养基,分别在24、48、72、96 h用CCK‐8试剂盒检测细胞增殖情况;Live／dead试剂检测加入不同浓度亚硒酸钠24 h后细胞的存活情况;细胞免疫组织化学法检测加入不同浓度亚硒酸钠24 h后,细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达情况。结果（1）亚硒酸钠在2．5～80．0μmol／L浓度范围内,在同一时间内随着浓度的增加,对成纤维细胞的抑制率逐步增加（P＜0．05）;（2）在相同浓度作用下随着时间的延长,亚硒酸钠对成纤维细胞的抑制率逐渐增加（P＜0．05）;（3）Live／dead试剂检测结果显示,随着亚硒酸钠浓度的增加,凋亡细胞数逐渐增加;（4）随着亚硒酸钠的浓度增加,成纤维细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达逐渐减弱。结论亚硒酸钠在体外能抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并且可以降低成纤维细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。     

硒代蛋氨酸对小鼠巨噬细胞增殖及硒蛋白K的影响

目的探究硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se-Met)对小鼠巨噬细胞的增殖及巨噬细胞中硒蛋白K(Selenopro-tein K,Sel K)的影响,并观察Sel K在小鼠巨噬细胞中的定位。方法加硒代蛋氨酸(Se-Met)培养巨噬细胞,用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测Se-Met对小鼠巨噬细胞中Sel K m RNA和Sel K蛋白表达的影响;用细胞免疫荧光法观察Sel K在巨噬细胞中的位置。结果 Se-Met能促进巨噬细胞的增殖,其中浓度为1μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞24 h和48h后,能显著性地促进巨噬细胞的增殖(P0.01);1μmol/L Se-Met能使巨噬细胞中Sel K的m RNA含量显著增加(24 h处理组,P0.05;48 h处理组,P0.01),另外,Sel K蛋白的含量也有所增加(48 h处理组,P0.05)。浓度为100μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞48 h后,能极显著性地抑制巨噬细胞增殖(P0.01)。结果还显示Sel K蛋白与内质网标志物KDEL都存在于巨噬细胞内的相同位置上。结论 Se-Met在促进巨噬细胞增殖的同时,使存在于内质网上的Sel K增加。     

亚硒酸钠对单个直肠腺癌细胞DNA含量影响的研究

1.7μmol/L浓度的亚硒酸钠对人体直肠腺癌细胞系HR8348作用48小时,用萤光半定量方法测定单个细胞的萤光位。细胞群体萤光值的频率分布提示:G_1期细胞增多,S期、G_2期和M期细胞减少,可能该浓度亚硒酸钠抑制G_1期细胞的代谢而使DNA的合成减少。     

亚硒酸钠对HepG2.2.15细胞凋亡的影响

目的 研究亚硒酸钠对体外培养的HepG2.2.15细胞株凋亡的影响.方法 采用体外培养的方法,流式细胞仪分析细胞DNA水平及细胞周期,并测定细胞凋亡情况.结果 2.0mmol/L亚硒酸钠作用72h,HE切片可见核固缩、染色质边集等改变;4mmol/L亚硒酸钠作用72h,G0/G1期和S期细胞明显减少,在细胞周期G1前期可见典型的细胞凋亡峰.结论 高剂量亚硒酸钠可诱导HepG2.2.15细胞株发生凋亡.     

腺嘌呤核苷酸转位酶1在亚硒酸钠抑制脑胶质瘤中的作用机制

目的:研究腺嘌呤核苷酸转位酶1(ANT1)在亚硒酸钠抑制脑胶质瘤生长中的作用机制.方法:将不同浓度的亚硒酸钠(0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)侵染人脑胶质瘤细胞SHG44,MTT比色法检测亚硒酸钠对SHG44的增殖的影响;PCR法检测ANT1的表达;提取细胞线粒体后通过观察线粒体的荧光强度,检测SHG44的线粒体膜电位和膜通道开放程度.结果:亚硒酸钠对人脑胶质瘤细胞具有明显的抑制作用,2.0及4.0 μmol/L染硒组差异均有统计学意义(P＜0.05),ANT1的表达在各染硒组均出现显著性增加(P＜0.05);线粒体膜电位在2.0及4.0μmol/L染硒组显著降低(P＜0.05),线粒体膜通道转运孔开放程度在1.0、2.0及4.0μmol/L组显著增高(P＜0.05).结论:亚硒酸钠能抑制人脑胶质瘤细胞SHG44地生长,并伴随线粒体膜电位降低和线粒体膜通道转运孔开放程度增加,ANT1可能参与了其作用机制.     

硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响

目的研究在体外染毒条件下硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响。方法用0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞24h,用流式细胞术检测凋亡,用RT-PCR检测p53,bcl-2和bax表达。结果 0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞后,随硒剂量升高细胞凋亡率增高,相关系数r=0.987 9(P<0.01),并且在1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠剂量组的凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。亚硒酸钠可以抑制镉转化16HBE细胞p53和bcl-2的表达(P<0.05或P<0.01),bax表达虽有所增强但P>0.05。进行相关性分析,细胞凋亡与p53和bcl-2表达呈负相关,相关系数r分别为-0.923 6(P<0.01)和-0.862 1(P<0.05),而细胞凋亡与bax表达呈正相关,相关系数r=0.781 8(P<0.05)。p53表达和bcl-2表达呈正相关,相关系数r=0.894 1(P<0.05)。p53、bcl-2表达和bax表达之间呈显著负相关,相关系数分别为-0.822 2(P<0.05)和-0.961 3(P<0.01)。结论亚硒酸钠处理镉转化16HBE细胞,通过使p53和bcl-2表达下调、bax表达上调,诱导细胞凋亡从而起到抑制细胞恶性转化的作用。     

亚硒酸钠对移植性Lewis肺癌的抑制作用

用组化、免疫组化,扫描及透射电镜观察亚硒酸钠对C57BL/6小鼠免疫功能及肿瘤细胞超微结构的影响,以研究亚硒酸钠对移植性Lewis肺癌的抑制作用。ip亚硒酸钠0.75mg/kg对生长肿瘤的抑瘤率为34.1％。给药组小鼠淋巴结中边缘窦及髓窦内充满巨噬细胞,成淋巴细胞应答反应增加。给药组瘤细胞表面平滑,细胞内有自噬泡,变性的内质网较多,染色质颗粒较细较少。结果提示亚硒酸钠抗癌机理主要是加强机体对肿瘤免疫监视作用及其细胞毒作用。     

不同硒源对高碘致小鼠氧化性损伤的干预作用

目的：比较纳米硒和亚硒酸钠对高碘致小鼠氧化性损伤的干预作用。方法：48只雄性昆明小鼠被随机分为：适碘组（50μg/L KIO3）;高碘组（3 000μg/L KIO3）;亚硒酸钠干预组（3 000μg/L KIO3＋0.193 mg/kg Se Na2SeO3）;纳米硒干预组（3 000μg/L KIO3＋0.193 mg/kg Se NANO-Se）。4周后处死,分离血清、取肝和肾脏组织。检测谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）等指标。结果：与适碘组比较,高碘组的肝中MDA含量下降,肝、肾、血清中GSH-PX活性均明显下降,肝、肾组织脏器系数均增加（P〈0.05）。与高碘组比较,亚硒酸钠干预组的肾中MDA含量明显增加,肝、血清中GSH-PX活性明显增加,肝组织脏器系数下降;纳米硒干预组的肝、血清中MDA含量均明显下降,但肾中明显增加,肝、肾、血清中GSH-PX活性均明显增加,肾组织脏器系数下降（P〈0.05）。与亚硒酸钠干预组比较,纳米硒干预组肝、血清中MDA含量均下降,肾中GSH-PX活性增加,肝组织脏器系数增加（P〈0.05）。结论：本实验条件下,3 000μg/L的高碘摄入致小鼠氧化性损伤,应用0.193 mg/kg Se的亚硒酸钠和纳米硒干预后,对高碘致氧化性损伤均具有拮抗作用,纳米硒的干预效果明显高于亚硒酸钠。     

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4~＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化的影响

目的：观察三氧化二砷（ATO）对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化的影响。方法：免疫磁珠法分选16～18周MRL/lpr狼疮小鼠和C57BL/6J正常对照小鼠脾脏CD4＋T细胞,PHA-p（20μg/mL）和IL-2（1 000 IU/mL）刺激48 h后分为以下不同药物处理组：①PBS组：空白对照;②ATO组：1μmol/L ATO作用24 h;③ATO＋5-氮杂胞苷（5-AzaC）组：1μmol/L 5-AzaC作用72 h后1μmol/L ATO作用24 h。CD4＋T细胞经过以上处理后抽提基因组DNA,亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子,产物凝胶回收,克隆入pMD-19T载体,转化入E.coli DH5α,筛选阳性克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析。结果：①MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子呈低甲基化水平。②1μmol/LATO作用24 h后MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平明显增高。③1μmol/L ATO作用24 h能使经过5-AzaC干预后的MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平明显增高。结论：1μmol/L ATO作用24 h能在一定程度上有效逆转活化状态下MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子低甲基化。     

COPD合并肺心病急性加重期患者红细胞、单个核细胞及多形核粒细胞钾、钠含量的变化

[目的]了解慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并肺心病急性加重期患者红细胞、单个核细胞及多形核粒细胞内钾（K）、钠（Na）含量的变化。[方法]选取住院COPD合并肺心病患者40例,健康对照组36例。采用密度-梯度法分离血细胞,以原子吸收分光光度计测定细胞的K、Na含量。[结果]患者组红细胞K（65.97±12.80）mmol/L、Na（7.93±1.33）mmol/L明显降低（P〈0.05）,单个核粒细胞K（11.93±3.34）μmol/10^9cells、Na（27.32±18.76）μmol/10^9cells无明显改变（P〉0.05）,多形核粒细胞K（27.32±18.76）μmol/10^9cells、Na（15.84±12.53）μmol/10^9cells,高于对照组,差异有显著性意义（P〈0.05）。单个核细胞K与多形核粒细胞K、Na及PaCO2呈正相关（相关系数分别为0.567,0.34,0.31,P〈0.05）。[结论]COPD合并肺心病患者存在体K的缺失,多形核粒细胞及单个核粒细胞并不能很好地反映体内K、Na的慢性改变。     

亚急性氟中毒小鼠抗氧化能力及肾功能的变化

目的探讨亚急性氟中毒小鼠抗氧化能力及肾功能的变化。方法实验时间为10d,将40只昆明种小鼠随机分对照组10只和中毒组30只,雌雄各半。对照组小鼠腹腔注射生理盐水13ml/（kg.d）,中毒组小鼠腹腔注射氟化钠溶液（1.0g/L）13ml/（kg.d）。第10天剪尾取血测定血浆中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量、尿素（Urea）含量和肌酐（Cr）含量。结果中毒组与对照组相比血浆MDA含量明显升高[（7.39±1.67）vs（5.89±0.81）,t=3.52,P〈0.01],GSH-Px活性和Urea含量、Cr含量三项指标比较,差异无统计学意义[（426.40±50.92）vs（422.0±52.24）,（7.32±1.60）vs（6.87±2.14）]。结论本实验结果证明,亚急性氟中毒小鼠抗过氧化能力明显下降,尚未见到对肾排泄功能的严重影响。     

小檗碱对体外血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:观察小檗碱对体外血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和凋亡的影响。方法:培养兔主动脉平滑肌细胞至8～10代,根据小檗碱作用时间不同分成24h、72h组,每一时间组据小檗碱浓度不同分为5组:0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L组。用台盼蓝活细胞计数法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMCs增殖的影响。用Boyden小室法检测穿膜细胞数,观察小檗碱对VSMCs迁移的影响。用TUNEL法及流式细胞仪检测小檗碱对VSMCs凋亡的影响。结果:台盼蓝活细胞计数显示小檗碱作用24h、72h后,随小檗碱浓度增加,活细胞数减少(P<0.05)。MTT法检测显示小檗碱作用24h、72h后,随小檗碱浓度增加,生长抑制率增高,随小檗碱干预时间延长,细胞生长抑制率增加(P<0.01)。Boyden小室法检测显示随小檗碱浓度增加,穿膜细胞数减少(P<0.05)。TUNEL检测显示各组施加干预48h后,对照组和各实验组的凋亡阳性率分别为13.15%、12.04%、10.62%、9.73%和9.72%(P>0.05)。流式细胞仪检测小檗碱作用48h后,对照组、50μmol/L和100μmol/L浓度小檗碱组的细胞凋亡率分别为20.4%、18.7%和17.2%。结论:小檗碱对VSMCs的增殖和迁移有显著抑制作用,而小檗碱对VSMCs的凋亡无促进作用。     

三氧化二砷对MRL／1pr狼疮小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ表达及其mRNA的影响

目的：观察三氧化二砷（ATO）对MRL／1pr狼疮小鼠脾脏CD4＋T细胞分泌IFN-γ及其mRNA的影响。方法：免疫磁珠分别分选18—20周MRL／1pr狼疮小鼠和C57BL／6J正常对照小鼠脾脏CD4＋T细胞,采用流式细胞术鉴定细胞纯度。PHA-P（20μg／mL）和IL-2（1000IU／mL）常规刺激48h后进行如下实验：（1）不同浓度ATO（0.5、1.0和2.0μmol／L）作用24h;（2）1μmol／LATO作用不同时间（12、24和48h）;（3）不同药物处理组：①PBS组：空白对照;②ATO组：lumol／LATO;③5-氮杂胞苷（5-AzaC）组：1μmol／L 5-AzaC;④ATO＋5-AzaC组：1μmol／LATO＋1μmol／L 5-AzaC。酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液IFN-γ的表达量;实时荧光定量PCR法检测不同药物处理组中IFN-γ mRNA的表达情况。结果：①1.0μmol／LATO作用24h对细胞存活率无明显影响。②1mmol／l AT0作用24h能抑制MRL／1pr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ的转录和翻译水平。③经5-AazC处理后MRL／1pr和C57BL／6J小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ的转录和翻译水平升高,1mmol／L ATO作用24h能抑制其异常活化状态。④MRL／1pr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ的分泌和表达水平均较CS7BL／6J小鼠明显升高。结论：1mmol／L ATO作用24h能在一定程度上有效抑制活化状态下MRL／1pr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-g的异常分泌,下调其mRNA表达水平而不影响其存活率。     

红细胞锌浓度与IgG亚类在预测手足口病患儿病情中的作用

目的分析不同病毒感染类型的手足口病（HFMD）患儿红细胞锌浓度及免疫球蛋白IgG亚类的表达变化及相互关系,为患儿病情进展预测提供依据。方法选取2011年3月-2013年3月在湖北省孝感市中心医院诊治的手足口病患儿1756例作为研究对象,按病情分为3组,普通病例组（普通组）、病情加重组（加重组）及重型病例组（重症组）,检测红细胞锌浓度、血免疫球蛋白IgG亚类浓度及所感染病毒类型,分析红细胞锌浓度、血免疫球蛋白IgG亚类浓度在预测不同病毒感染类型的手足口病（HFMD）患儿病情发展中的作用。结果普通组、加重组与重型组的红细胞锌浓度分别为（117．9±61．7）／μmol／L、（93．2±40．6）μmol／L与（85．2±41．7）μmol／L,IgGl浓度分别为（5．81±1．54）g／L、（4．16±1．27）g／L与（4．02±1．13）g／L,经方差分析,差异均有统计学意义（P〈0．05）;加重组患儿,EV71组在入院时的红细胞锌、IgG1浓度分别为（113．5±51．5）μmol／L、（5．73±1．52）g／L,而病情转变为重症后,浓度分别为（85．0±36．5）μmo／／L、（3．78±1．23）g／L,经t检验,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论血浆中红细胞锌浓度和免疫球蛋白IgGl联合检测可以对EV71型病毒引起的HFMD患儿病情的进展起一定预测作用,及时检测可以发现不良预后趋势。     

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向心肌细胞分化的研究

目的探讨体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌细胞分化的方法。方法分离2周龄小鼠胫骨、股骨，冲洗出骨髓，利用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心和贴壁培养的方法获得MSCs。取传2代细胞培养48h，分为4组：A组加入心肌组织块条件培养液、B组加10μmol／L 5-氮胞苷（5-aza）、C组为二者的混分液、D组不加任何诱导剂以作对照组。应用免疫细胞化学方法检测各组心肌特异性蛋白α-actin的表达。结果免疫细胞化学染色结果显示，A组细胞培养3周时可检测到α-actin阳性细胞，阳性细胞较多；B组培养1周可见弱阳性细胞，随时间延长，阳性着色增强且阳性细胞数增多，3周时呈强阳性表达；C组2周即可检测到细胞呈强阳性着色。对照组MSCs胞浆内未检测到α-actin的表达。4个组的阳性细胞率进行两两比较均有统计学意义（P〈0.05）。结论心肌组织块条件培养液和5-aza联合应用可促进MSCs体外分化为心肌样细胞。