烷基化白蛋白的合成、表征以及对难溶性抗肿瘤药物的负载

对牛血清白蛋白进行烷基化修饰,合成一系列两亲性的十二烷基白蛋白(DSA)衍生物,并采用¹H NMR、元素分析以及热重分析法对其进行结构确证;以芘作为荧光探针,测定了它们的临界胶束浓度;采用透析法制备一系列紫杉醇烷基白蛋白(PTX-DSA)纳米胶束,以载药量、包封率、粒径和Zeta电位作为评价指标,研究了取代度对紫杉醇载药能力的影响,然后采用透射电子显微镜(TEM)和广角X线衍射(WAXD)技术分别对载药胶束进行了表征。研究结果表明,取代度在7.72%~31.71%之间的DSA能在水溶液中自组装形成纳米胶束,其紫杉醇的载药量和包封率分别高达（32.14±4.13）%和（87.25±16.18）%,而其粒径和Zeta电位分别为（135.83±2.47） nm和－（31.07±0.51）mV;TEM显示该聚合胶束呈现出球形或类球形结构;WAXD研究结果表明,紫杉醇均匀分散在聚合物胶束中。DSA可作为难溶性抗肿瘤药物的载体,具有载药量高、稳定性好等优点。     

一种新型季胺盐壳聚糖纳米载药体系的制备与性能

在制备壳聚糖衍生物N,N,N-三甲基壳聚糖盐酸盐(TMC)的基础上,通过将两种性质相反的电解质溶液进行共混,制备了一种新型的 TMC/CMC(羧甲基壳聚糖)纳米载药颗粒体系.用激光散射仪和透射电镜表征了空白颗粒和载药颗粒的粒径、粒径分布、Zeta 电位和形态结构.栽药体系纳米颗粒的粒径在 200～600 nm 范围,表面可带正或负电荷,且 Zeta 电位具有可调性.研究表明:牛血清蛋白(BSA)的包封率与起始的 TMC、BSA 浓度相关;纳米载药颗粒对 BSA 的释放表现为,先爆释而后缓释并可保持 40 h 以上的释放.     

环孢素A壳聚糖衍生物胶束的制备及其大鼠口服生物利用度

目的:制备环孢素A(CyA)壳聚糖衍生物胶束(CyA-CDM),研究其在大鼠体内的口服生物利用度,并与其上市制剂进行比较。方法:采用水溶性壳聚糖衍生物以自乳化溶剂挥发法制备环孢素A聚合物胶束,测定其载药量、包封率和粒径。以市售制剂GengrafR○为参比,对大鼠灌胃给药,用HPLC测定全血药物浓度,考察二者的药代动力学特征和相对生物利用度。结果:壳聚糖衍生物胶束载药量为(23.39±0.24)%,包封率为(91.99±2.85)%,粒径为(260.7±5.01)nm。与GengrafR○相比,壳聚糖衍生物胶束的相对生物利用度为97.07%,峰浓度略大(P<0.05),分布和消除过程与对照品没有显著性差异(P<0.05)。结论:环孢素A壳聚糖衍生物胶束具有良好的载药性能,口服吸收良好,在大鼠体内显示与GengrafR○相近的生物利用度。     

基于透明质酸-紫杉醇前药的载药胶束的制备及大鼠体内药代动力学

以两亲性透明质酸-紫杉醇高分子前药(HA-PTX)为载体,制备包载PTX的高载药量纳米胶束;分别使用HPLC、动态光散射法(DLS)、透射电子显微镜(TEM)、原子力显微镜(AFM)和X线粉末衍射法(XRD)等手段对其载药量、包封率、粒径分布和胶束形态等进行测定或表征;采用荧光芘探针法测定HA-PTX的临界胶束浓度(CMC);以市售紫杉醇注射剂(Taxol)为对照,通过大鼠体内药代动力学实验考察载药胶束的体内过程。载药胶束PTX-HA-PTX化学偶联药物和物理包载药物总量高达41.8%,包封率高达95.4%,平均粒径为213.2 nm,Zeta电位为-15.5 mV;XRD结果确证药物以分子状态或无定型状态存在于胶束内部;TEM和AFM显示胶束呈类球形;大鼠药代动力学结果显示,相对于Taxol,PTX-HA-PTX胶束组的血药浓度时间曲线下面积(AUC)显著提高(P<0.01),而清除率(CL)显著下降(P<0.05),说明PTX-HA-PTX胶束可延缓PTX在体内的消除,延长滞留时间,提高药效。结果表明HA-PTX可作为优良的增溶载体,具有良好的应用前景。     

姜黄素半乳糖化十六酰壳聚糖聚合物胶束的制备

目的 制备姜黄素半乳糖化棕榈酰壳聚糖聚合物胶束,并考察其制备工艺对包封率和载药量的影响。方法 以半乳糖化十六酰壳聚糖（GHC）为载体材料,采用乳化-溶剂挥发法制备姜黄素聚合物胶束;应用正交试验考察药物：载体质量比、油相：水相体积比、超声时间对载药聚合物胶束包封率和载药量的影响,以对制备工艺进行优化;以透射电镜（TEM）和动态光散射粒度分析仪（DLS）对聚合物胶束的形态、粒径和Zeta电位进行测定。结果 药物：载体质量比对胶束的包封率和载药量影响最大,其次为油相：水相体积比和超声时间。最佳条件为药物：载体质量比为1：15,油相：水相体积比为1：7,超声时间为30 min。制备的载药胶束的形状为球形,大小均匀,平均粒径为179.7 nm,Zeta电位约为76.46 mV,包封率为96.3%,载药量为9.1%。结论 本文所采用的乳化-溶剂挥发法制备工艺适于制备姜黄素聚合物胶束。     

载紫杉醇pH敏感嵌段共聚物胶束的制备和体外药效

目的 制备载紫杉醇pH敏感嵌段共聚物胶束,评价抗肿瘤细胞药效.方法 用ATRP和click反应合成聚己内酯-聚甲基丙烯酸-N,N-二乙氨基乙酯-聚乙二醇嵌段共聚物(PDC),制备聚合物胶束,测定不同pH条件下胶束粒径和zeta电位;包载紫杉醇,测定包封率和载药量;透析法考察胶束的体外释药行为;MTT法评价胶束对人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性.结果 聚合物胶束的粒径和zeta电位随pH增大而减小.紫杉醇的包封率为92.0％,载药量为8.36％.中性环境中胶束粒径为100.3 nm,zeta电位接近零.在低pH值(pH 6.5)环境中胶束的释药速率比中性环境中快,累积释放率高,对肿瘤细胞生长抑制效果好.结论 pH敏感嵌段共聚物胶束有良好的pH敏感释药特点和抗肿瘤细胞药效,有望成为理想的抗肿瘤药物靶向载体.     

Box-Behnken效应面法优化黄芩素纳米胶束制备工艺研究

目的?采用Box-Behnken效应面法优化工艺,制备黄芩素-聚乙二醇12羟基硬脂酸酯-磷脂纳米胶束,以改善其溶解性。方法?采用薄膜分散法制备黄芩素-solutol HS15-磷脂复合纳米胶束（BA-Sol-Pls）,分别以乙醇用量（X₁）、solutol质量浓度（X₂）、磷脂质量（X₃）浓度为考察因素,采用B-B试验进行设计,粒度测定仪考察纳米胶束粒径和Zeta电位,超速离心法考察胶束的包封率及载药量;效应面法筛选载药纳米胶束的最佳处方。结果?优化处方制备的载药纳米胶束粒径分布均匀,平均粒径为(410±5.98)nm,Zeta电位为-(21±0.92) mV,包封率为90.38%,载药量为5.35%。结论?采用Box-Behnken效应面法优化黄芩素纳米胶束制备工艺是有效可行的。      

具有肿瘤靶向及穿膜效应的壳聚糖胶束的制备

在壳聚糖(CS)表面修饰疏水基团辛基形成辛基壳聚糖(OC),然后再修饰亲水基团聚乙二醇(PEG)、肿瘤靶向配体氨基葡萄糖(DG)和穿膜肽九聚精氨酸(9R),形成DG和9R共同修饰的、同时具有肿瘤靶向性及穿膜效应的壳聚糖纳米胶束(DG/9R-PEG-OC)。核磁共振光谱分析及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果证实了DG/9R-PEG-OC的成功制备;测得壳聚糖纳米胶束的粒径为151.8 nm左右、Zeta电位约为16.5 mV;透射电子显微镜照片显示该壳聚糖纳米胶束为均匀的球形结构;紫外分光光度法测定该载体的荧光素载药量约为28.2%,包封率约为75.0%,释药实验表明壳聚糖胶束具有良好的缓释作用;荧光显微镜观察显示,该DG/9R-PEG-OC胶束对肿瘤细胞尤其是葡萄糖受体高表达的肿瘤细胞HepG2具有较好的靶向性及细胞穿膜效应。故DG/9R-PEG-OC胶束可作为脂溶性抗肿瘤药物的载体用于肿瘤的靶向化学治疗。     

两亲性氨基酸嵌段共聚物的合成、表征和载药性能

采用N-羧酸-α-氨基酸-环内酸酐开环聚合的方法合成两亲性氨基酸嵌段共聚物(苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物,PPA-PAA),并以难溶性药物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)为模型药考察该聚合物的载药性能。采用FT-IR与1H NMR对合成的PPA-PAA结构进行表征,计算聚合度,采用芘荧光探针法测定两亲性氨基酸嵌段共聚物临界胶束浓度(CMC),动态光闪射法测定胶束粒径。结果 PPA-PAA的CMC为95 mg/L,形成胶束的粒径为235 nm,载药量和包封率分别为27.1%和74.1%。PPA-PAA有望成为难溶性药物的给药载体。     

N-辛基-O,N-羧甲基壳聚糖自组装纳米粒的制备、理化性质及安全性评价

目的:制备两亲性壳聚糖衍生物N-辛基-O,N-羧甲基壳聚糖(OCC)自组装纳米粒,并对其理化性质及安全性进行评价。方法:以透析法制备OCC自组装纳米粒;利用动态光散射(DLS)、Zeta电位仪、透射电镜对其形态、结构进行表征;通过体外溶血实验及小鼠尾静脉注射急性毒性实验评价其安全性。结果:OCC自组装纳米粒粒径为165.6 nm,多分散指数为0.191。由于纳米粒表面羧甲基基团的存在,纳米粒表面带负电荷,其表面电势为-30.2 mV。透射电镜结果显示该自组装聚合体为规则球形结构,粒径分布均匀。溶血实验和急性毒性实验结果表明,OCC溶血性远远小于Tween 80,与Cre-mophor EL相当;OCC小鼠尾静脉注射的LD50及95%可信限为560.2(523.0~600.0)mg/kg。结论:OCC自组装纳米粒可初步推断为安全可靠的静脉注射用纳米药物载体。     

叶酸修饰壳聚糖纳米载药胶束的制备及其体外抗肿瘤效果研究

目的: 设计并合成叶酸修饰酸碱度响应壳聚糖纳米胶束,考察材料及其载药胶束对肿瘤细胞的体外生物活性。方法: 醛基化的壳聚糖与亲水性的胺类化合物经还原胺化反应得CHI-DMA,进一步与月桂酸（LA）经缩合反应得CHI-DMA-LA;叶酸（FA）修饰后得FA-CHI-DMA-LA;包载阿霉素（DOX）后得载药纳米胶束FA-CHI-DMA-LA/DOX。采用氢核磁共振测定材料结构;透射电子显微镜考察材料形态;动态光散射法测定粒径和表面电位;紫外分光光度法测定材料中叶酸的接入率、载药胶束的载药率和包封率;荧光分光光度法测试不同酸碱度下载药胶束体外释放药物的性能;MTT法检测胶束对KB细胞的毒性;荧光显微镜和流式细胞仪考察载药胶束在KB细胞中的吞噬情况。结果: 合成了叶酸修饰的壳聚糖胶束材料FA-CHI-DMA-LA,后续用于实验的FA-CHI-DMA-LA-1和FA-CHI-DMA-LA-2胶束的粒径分别为（73±14）nm和（106±15）nm,表面电位分别为（15.59±1.98）mV和（21.20±2.35）mV。其载药胶束FA-CHI-DMA-LA-1/DOX和FA-CHI-DMA-LA-2/DOX的载药率分别为（4.08±1.12）%和（4.12±0.44）%,体外药物在酸碱度5.0下累积释放分别达37%和36%,是酸碱度7.4下的1.5倍左右。FA-CHI-DMA-LA在1.25~125 μg/mL浓度下作用24 h后KB细胞存活率均在70%以上。FA-CHI-DMA-LA/DOX载药胶束的细胞摄取较CHI-DMA-LA/DOX增强,且在无叶酸培养基孵育下细胞摄取比含叶酸培养基孵育下增强。与游离阿霉素和CHI-DMA-LA/DOX比较,FA-CHI-DMA-LA/DOX对KB细胞杀伤力更高,其中FA-CHI-DMA-LA-2/DOX给药孵育24 h后细胞存活率约17%。结论: 成功制备了作为药物输送载体的叶酸修饰壳聚糖纳米胶束材料,其生物相容性良好,具有适应肿瘤微环境酸碱度的药物释放和肿瘤靶向效果。     

木香内酯DSPE-PEG纳米胶束的制备、表征及对胶质瘤细胞凋亡的诱导作用

目的：制备木香内酯（MCL）聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺（MCL@DSPE-PEG）纳米胶束,并对其进行表征和诱导胶质瘤细胞凋亡的研究。方法：采用薄膜水化法制备MCL@DSPE-PEG纳米胶束,观察其外观特征,检测其粒径、多分散系数（PDI）、载药量、包封率。比较MCL原料药和MCL@DSPE-PEG纳米胶束在pH 7.4枸橼酸盐缓冲液中的药物释药情况。将U87 和U251胶质瘤细胞分为模型组和MCL@DSPE-PEG纳米胶束组;观察U87和U251胶质瘤细胞生长抑制情况和细胞内凋亡相关Caspase3、Caspase8、Bcl-2蛋白表达水平变化情况。结果：所制备的MCL@DSPE-PEG纳米胶束呈现大小比较均一的椭球形,其粒径为（123.8±0.5）nm,PDI为0.236±0.005,载药量为8.96%±0.56%,包封率为85.49%±3.66%,144 h的累积释放度为73.30%,而MCL原料药在48 h内已基本释放完全。 MCL@DSPE-PEG纳米胶束可抑制U87和U251胶质瘤细胞生长及细胞克隆形成。与模型组比较,MCL@DSPE-PEG纳米胶束组U87和U251胶质瘤细胞的Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase3、Caspase8 蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结论：成功制得MCL@DSPE-PEG纳米胶束,其具有诱导U87和U251胶质瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤生长的作用。     

紫杉醇长循环纳米胶束联合vMIP-ⅡN端肽逆转乳腺癌细胞耐药的研究

目的探讨紫杉醇长循环纳米载药胶束联合病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ（vMIP-Ⅱ）N端肽（NT21MP）对乳腺癌紫杉醇耐药细胞株（MCF-7/PR）耐药性的影响。方法采用磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR的存活率;细胞划痕及Transwell实验检测紫杉醇纳米载药胶束联合NT21MP对乳腺癌耐药细胞迁移、侵袭能力的影响;流式细胞术分析细胞凋亡、周期;Western blotting实验检测细胞凋亡、耐药及上皮间充质转化相关蛋白水平表达。结果相对于紫杉醇组,紫杉醇纳米胶束更有效地抑制细胞增殖、迁移和侵袭,凋亡蛋白Bax、caspase3的蛋白表达水平上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下调,且耐药相关蛋白MRP、P-gp和EMT相关蛋白Vimentin、Slug表达水平下调,E-cadherin表达上调（P < 0.01）;相对于紫杉醇纳米胶束组,紫杉醇纳米胶束与NT21MP联合组对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期的抑制,以及抗凋亡和逆转耐药作用更明显（P < 0.01）。结论紫杉醇纳米胶束可有效发挥逆转乳腺癌细胞耐药性的作用,且以紫杉醇纳米胶束联合多肽药物NT21MP作用更明显。     

新型姜黄素纳米胶束丝素凝胶的制备及其质量表征

目的：采用自主合成新材料VES-g-PLL制备姜黄素纳米胶束（CUR-NMs）并评价其质量,结合丝素水凝胶制备成CUR-NMs丝素凝胶,为治疗银屑病的姜黄素药物新制剂开发提供参考。方法：应用注入法制备包载姜黄素的VES-g-PLL纳米胶束,测定其微观形态、粒径、Zeta电位、包封率、载药量及释放度等质量评价指标后与丝素蛋白溶液混合超声处理形成CUR-NMs丝素凝胶。通过扫描电镜、HPLC及激光共聚焦显微镜测定CUR-NMs丝素凝胶的微观形态、体外药物释放度及皮肤渗透性。结果：载药纳米胶束呈标准的椭球形、分散均匀、粘连少;粒径为（31.14±7.86）nm、Zeta为（16.70±1.45）mV,包封率高达（82.21%±4.32%）。CUR-NMs丝素凝胶的微观形态为3D网状结果,CUR-NMs以絮状物形式黏附于凝胶3D结构表面,体外药物释放度实验结果显示78 h后CUR-NMs药物累计释放约49%,而CUR-NMs丝素凝胶的药物累计释放约为30%;同时在体皮肤渗透试验显示相比于姜黄素溶液凝胶,应用CUR-NMs丝素凝胶能够显著增加药物的透皮渗透性能。结论：应用新材料VES-g-PLL制备的载药纳米胶束结合丝素凝胶能够实现难溶性药物姜黄素的缓释及透皮吸收,有望成为治疗银屑病等慢性皮肤炎症疾病的一种新方法。     

透明质酸修饰纳米胶束用于靶向肿瘤治疗及药物释放行为的研究进展

透明质酸(HA)是一种具有良好生物相容性、生物可降解性的天然线性多糖,通过细胞表面分化簇44(CD44)受体靶向肿瘤。其作为抗肿瘤药物传递载体广泛应用于肿瘤治疗领域,已成为肿瘤靶向给药系统研究的热点。CD44是透明质酸高亲和性的受体,因其在肿瘤细胞过表达,可以作为肿瘤标志物或靶向受体。许多肿瘤都表现出CD44受体的过度表达,如乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌和胰腺癌等。CD44配体通过与纳米药物载体结合,可以提高纳米载体对肿瘤细胞的亲和力。HA结构中因含有CD44配体具备有效的肿瘤靶向效应而闻名,通过HA-CD44受体介导的内吞作用途径可以增强肿瘤细胞的摄取。本文对HA纳米胶束在临床肿瘤治疗中的进展以及其药物释放行为进行了综述,并表明HA的纳米胶束在肿瘤治疗中的巨大潜力。体内外研究表明,基于HA的纳米胶束是药物和基因特异性靶向肿瘤的传递方式,在临床肿瘤治疗中具有良好的应用前景。     

Effects of connective tissue growth factor antisense oligonucleotides on the proliferation and collagen synthesis of the cultured human keloid fibroblasts in vitro

Keloid ,akindofcommonlyseenpathologicalscarinclinicalpractice ,characterizedascontinuousinfiltratinggrowthwithhighpostoperativerecurrencerate ,isakeyre searchtopicinthefieldofplasticsurgery .However,thepathogenesisofkeloidisnotclear.Connectivetissuegrowthfactor (CTGF)isthecytokinethatplaysaveryim portantroleinthecourseoffibrosis ,anditsexcessiveex pressionmaybeinvolvedinsomefibroticdiseasessuchasscleroderma ,renalfibrosis ,pulmonaryfibrosis,arterio sclerosis[1] .Inourstudy ,weusedantisensest…     

应用蛋白质芯片检测骨性关节炎患者基质金属蛋白酶-13的初步研究

目的:探讨应用蛋白质芯片技术检测骨性关节炎(OA)患者关节液和血清中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的方法.方法:应用低密度蛋白质芯片方法同时检测32例OA患者关节液和血清中MMP-13表达水平,24例正常关节作为对照组,进行蛋白质芯片荧光强度的对比研究.结果:OA患者关节液和血清中的MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于对照组关节液的荧光强度(P<0.001).OA患者关节液中MMP-13在蛋白质芯片上的荧光强度明显高于其血清的荧光强度(P<0.001).结论:OA患者关节液和血清中MMP-13表达明显高于对照组.应用低密度的蛋白质芯片技术检测OA患者关节液及血清中MMP-13的水平具有一定临床应用价值.     

Angiopep-2修饰的脑靶向多肽胶束的制备及体外评价

目的 构建angiopep-2修饰的硫辛酸-聚精氨酸组氨酸（LHRss）多肽纳米胶束并包载抗肿瘤药物多柔比星（DOX）的脑胶质瘤靶向纳米给药系统（LHRss-An/DOX）。方法 采用超声乳化法制备包载化疗药物DOX的多肽胶束LHRss-An/DOX,检测复合物的粒径、zeta电位和外观形态;测定载药量和包封率,并对其体外释放特性进行考察;通过体外血脑屏障（BBB）模型考察载药胶束的跨膜转运效率,使用激光扫描共聚焦显微镜观察DOX胞内的分布情况及对脑胶质瘤的靶向性。结果 胶束LHRss-An/DOX呈球形,平均粒径为（100.9±8.7） nm,聚合物分散性指数为0.232,电位为（28.8±3.3） mV,最佳药载比为40%,载药量为15.8%,包封率为55.3%,在pH 7.4、pH 5.5和pH 5.5+10 mmol/L DL-二硫苏糖醇（DTT）环境下72 h内的累积释放率分别为（60.3±2.6）%、（84.1±3.9）%和（96.6±2.7）%;LHRss-An/DOX的跨BBB效率分别是LHRss/DOX和游离DOX的2.04和4.27倍,差异有统计学意义（P<0.05）;脑胶质瘤细胞U251摄取LHRss-An/DOX的荧光强度强于LHRss/DOX和游离DOX的荧光强度。结论 经过angiopep-2修饰的载药纳米胶束的跨BBB能力及脑胶质瘤的靶向性显著增强,是一种潜在高效的靶向胶质瘤给药系统。     

多巴胺诱导白血病细胞系K562凋亡的作用机理研究

目的:探讨多巴胺诱导白血病细胞系K562凋亡的作用机制。方法:先用与多巴胺受体相结合的带荧光的配基DP2785处理K562细胞后,分别采用紫外分光光度计和荧光分光光度计检测以及荧光显微镜观察,三方面证实K562细胞上是否存在多巴胺受体;进而检测细胞内cAMP水平;再通过受体阻断实验进行多巴胺受体亚型分析。结果:紫外分光光度计和荧光分光光度计检测结果以及荧光显微镜下观察结果显示,K562细胞上存在多巴胺受体;多巴胺可升高细胞内cAMP含量;受体阻断实验结果显示多巴胺作用于K562细胞,D1和D2受体均起作用。结论:多巴胺通过作用于K562细胞上D1和D2多巴胺受体,进而升高细胞cAMP含量起作用。     

Oxidative modification of high density lipoprotein induced by cultured human arterial smooth muscle cells

Objective: To observe the oxidative modification of high density lipoprotein (HDL) induced by culturedhuman arterial smooth muscle cells (SMCs). Methods: HDL cocultured with SMCs at 37℃ in 48 h was subjected,and native HDL (N-HDL) served as control. Oxidative modification of HDL was identified by using agarose gel electro-phoresis. Absorbances of conjugated diene (CD) and lipid hydroperoxide (LOOH) were measured with ultravioletspectrophotometry at 234 and 560 nm respectively, and fluorescence intensity of thiobarbuturic acid reaction substance