法尼酯X受体上调肝细胞中成纤维细胞生长因子21的表达

目的研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor,FGF21)表达的影响。方法用FXR特异性激动剂终浓度为0、50、100μmol/L的CDCA和0、1、5μmol/L的GW4064分别处理人肝癌细胞株HepG2和人胚胎肝细胞L02细胞后,用逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)检测FXR特异性靶基因小异源二聚体配体(small heterodimer parterner,SHP)和FGF21 mRNA的表达变化,再用Western blot法检测FGF21蛋白表达水平的变化。结果用FXR特异性激动剂CDCA和GW4064刺激后,分别比较HepG2和L02细胞SHP与β-actin mRNART-PCR产物光密度比值,比值均明显增高(P<0.05),反应HepG2和L02细胞内SHP mRNA水平均明显升高,表明FXR在2种细胞中被激活;分别比较HepG2和L02细胞FGF21与β-actin RT-PCR产物光密度比值以及FGF21与β-actin蛋白光密度比值,比值均明显升高(P<0.05),表明FGF21 mRNA和蛋白水平均明显升高。结论激活的FXR可以上调FGF21的表达。     

Oxidative modification of high density lipoprotein induced by cultured human arterial smooth muscle cells

Objective: To observe the oxidative modification of high density lipoprotein (HDL) induced by culturedhuman arterial smooth muscle cells (SMCs). Methods: HDL cocultured with SMCs at 37℃ in 48 h was subjected,and native HDL (N-HDL) served as control. Oxidative modification of HDL was identified by using agarose gel electro-phoresis. Absorbances of conjugated diene (CD) and lipid hydroperoxide (LOOH) were measured with ultravioletspectrophotometry at 234 and 560 nm respectively, and fluorescence intensity of thiobarbuturic acid reaction substance     

抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达

目的：制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段（ScFv）。方法：从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA，RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因（VH和VLDNA），经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1，转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后，获得重组噬菌体。以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行2轮筛选后，经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆。取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151，用于表达可溶性ScFv。经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定，经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性。结果：所获得的VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。对重组哓菌体经2轮亲和筛选后，经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆。源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32000u，且浓集于细菌周质腔中，可溶性ScFv具有抗原结合活性，其结合位点与亲本单抗MC5相同。结论：针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备，为人结肠癌的体外（乃至体内）研究提供了新的靶向载体分子。     

一种简单、高效的小分子量DNA沉淀法

沉淀是浓缩核酸最常用的方法。通过核酸沉淀可以改变核酸的溶解缓冲液 ,重新调节核酸在溶液中的浓度 ,还可以去除溶液中某些盐离子与杂质 ,达到纯化核酸的目的[1] 。　　大分子量核酸样品的沉淀方法很多 ,操作简单、效果比较好。而小分子量ＤＮＡ(特别 <5 0ｂｐ的寡聚核苷酸 )的沉淀方法往往依赖于高速或超速冷冻离心机 ,且操作步骤繁锁 ,一般实验室难以满足实验条件[2 ] 。本文介绍一种简单、有效的小分子量ＤＮＡ沉淀方法 ＺｎＣｌ2 沉淀法 ,具体操作步骤如下 :①准确测量ＤＮＡ样品的体积 ;②加入 0 .0 5倍ＤＮＡ样品体积的 1ｍｏｌ/Ｌ…     

人可溶性APRIL（sAPRIL）基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 克隆并表达人可溶性增殖诱导配体(sAPRILA探索其在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用。方法 从GENBANK中查找人APRIL蛋白(编号：075888)序列，取其部分胞外(sAPRIL)序列设计引物，用RT-PCR从扁桃体总RNA中扩增出人sAPRIL基因，测序后将克隆载体经酶切并构建表达载体，在大肠杆菌中表达，纯化蛋白后进行细胞学实验。结果 经克隆测序后进行同源比较，证实所克隆的基因即为sAPRIL在大肠杆菌中表达量达43．6％，获得纯化蛋白，3H-TdR掺入实验表明sAPRIL有明显刺激肿瘤细胞增殖的作用。结论 APRIL有明显促进肿瘤的形成及肿瘤细胞的增殖与存活的作用，该基因的克隆与表达为深入研究sAPRIL的功能奠定了基础。     

橙皮甙抗LDL氧化及对MCP-1 mRNA转录的影响

目的研究橙皮甙体内外抗脂质氧化作用及其对兔食饵性动脉斑块中单核细胞趋化蛋白-1 mRNA转录的影响.方法①采用一次性密度梯度超速离心法制备正常人低密度脂蛋白,Cu2 诱导其氧化,测定不同药物浓度和作用时间体系中丙二醛含量.②采用高脂饮食加免疫损伤的方法建立家兔动脉粥样硬化模型:将18只家兔随机化分为正常对照组、模型组、橙皮甙组.每组6只,分别给予普通饲料(正常对照组)和高脂饲料(模型组)喂养,橙皮甙组在喂高脂饲料的同时,加橙皮甙(2g/d)一同喂养.建模10周末耳缘静脉采血,检测各组动物血清中丙二醛和一氧化氮的含量.而后处死动物,取胸主动脉,用逆转录聚合酶链反应技术检测动脉壁细胞中单核细胞趋化蛋白-1 mRNA的转录水平.结果体外实验中,橙皮甙显著抑制丙二醛的生成,并呈一定浓度依赖关系(P＜0.05,P＜O.01,P＜0.001).体内实验中,橙皮甙明显降低血浆丙二醛的含量(P＜0.01)和一氧化氮的水平(P＜0.001);并对胸主动脉壁细胞单核细胞趋化蛋白-1 mRNA的转录有明显抑制作用(P＜0.05).结论橙皮甙在体内外均有抗氧化作用,其下调单核细胞趋化蛋白-1 mRNA转录的机制可能部份与此有关.     

人全长TALL-1在大肠杆菌中的表达

目的在克隆人TALL-1(TNF- and apoptosis ligand-related leukocyte expressed ligand 1)全长 cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性.方法采用RT-PCR技术,从HL-60细胞中扩增编码人TALL-1的cDNA,克隆于高效原核表达载体pQE-80L中,以IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,进行生物学活性检测.结果 RT-PCR扩增得到了858 bp的DNA片段,测序结果与GenBank中报道的编码TALL-1的cDNA序列一致,并在大肠杆菌中获得了高效表达,活性检测发现它能抑制U937细胞的生长.结论成功克隆了人TALL-1全长cDNA,并获得了高效表达及纯化,纯化产物具有生物学活性,这为进一步的功能研究及临床应用奠定了基础.     

人mBAFF在原核系统的可溶性表达及功能鉴定

目的利用含重组质粒pQE80L-mBAFF的DH5α大肠杆菌，优化表达B细胞活化因子的突变蛋白（mBAFF）。方法研究mBAFF的体外诱导条件，包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度对表达量的影响。对表达条件进行优化后进行大量表达，经Ni^2＋ NTA亲和层析和SepharcryL S200凝胶过滤层析纯化。流式检测突变蛋白与细胞结合的能力以及MTT检测突变蛋白的生物学活性。结果最佳表达条件是诱导时间4h，诱导温度37℃，IPTG终浓度0．2mmol／L。mBAFF占菌体总蛋白的35％，蛋白纯度达98％以上，所获突变蛋白能与淋巴细胞表面受体结合，但不能刺激淋巴细胞增殖。结论优化可溶性表达后能提高mBAFF蛋白质在DH5α大肠杆菌表达，并经Ni^2＋ NTA亲和层析和Sephareryl S200凝胶过滤层析得到纯度高的表达产物，所获结果为进一步研究创造了条件。     

NAD~ 的超微量测定法

本文报导一种简便的、测定组织中NAD~ 含量的超微量法。此法是利用循环的NBT、PMS、乳酸及LDH混合物来测定NAD~ 。这种测定方法简单、快速、灵敏度高,最低可测1×10~(-11)Mole/ml。     

生物化学与分子生物学课程必须适应现代化要求

在教学内容、培养学生创新能力、运用多媒体及实验教学等方面采取了一系列改革措施。其目的是提高生物化学与分子生物学教学质量。学生普遍反应良好。