氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表达的影响

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以阐明二者在动脉粥样硬化发生中的作用。方法在巨噬细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮＡ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析的方法检测巨噬细胞ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达，用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ－１蛋白的含量。用微孔滤膜法进行单核细胞的趋化试验。结果当巨噬细胞分别暴露于ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ２４小时后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达明显增加，同时单核细胞迁移距离的明显增加。而当巨噬细胞分别暴露于ＬＤＬ和ＶＬＤＬ２４小时，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达只有轻微的增加，单核细胞迁移距离亦无明显的增加。结论巨噬细胞能表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白，ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ能诱导该细胞更强地表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白     

ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用

【目的】 构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体,研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞,ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ,ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,转染后 ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ ＜ ０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ ＜ ０．０５）, 细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少 （Ｐ ＜ ０．０５）。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞Ｓ期的比例增加,转染组增殖抑制明显（Ｐ ＜ ０．０５）,Ｓ期比例降低（Ｐ ＜ ０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期,下调ＥＲ靶基因蛋白表达,ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

慢性阻塞性肺病急性期IL－1活性变化

通过支气管肺泡灌洗术（ＥＡＬ）获取肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）．用大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导及胸腺细胞增殖反应法，检测２８例慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）患者ＰＡＭ释放白细胞介素１（ＩＬ－１）活性，并与１２例健康非吸烟者对照。结果，经ＬＰＳ刺激和未经刺激ＣＯＰＤ组的ＰＡＭ产生ＩＬ－１活性均明显高于对照组，ＣＯＰＤ组中，经ＬＰＳ刺激后ＰＡＭ产生ＩＬ－１活性，肺心病组＞肺气肿组＞慢支组。提示，ＩＬ－１在ＣＯＰＤ的发生和发展中起重要作用。     

地塞米松和阿斯匹林对猪肺血管内巨噬细胞环氧合酶II型的作

目的：探讨地塞米松（ＤＥＸ）和阿斯匹林（ＡＳＡ）对脂多糖致猪肺血管内巨噬细胞（ＰＩＭ）环氧合酶－－ＩＩ（ＣＯＸ－ＩＩ）表达及活性的影响。方法：改良分离,培养猪ＰＩＭ,分为：（１）对照组;（２）ＬＰＳ组：予ＬＰＳ刺激,以反转录聚合酶链反应和免疫组化染色法检测ＣＯＸ－ＩＩ ｍＲＮＡ及酶蛋白的改变,放射免疫分析法测定细胞上清ＰＧＥ２浓度,间接表示ＣＯＸ活性。结果：ＬＰＳ组ＰＩＭ ＣＯＸ－ＩＩ ｍＲＮＡ和     

内皮素－1诱导肺动脉平滑肌细胞的趋化反应

本实验发现ＥＴ－１可诱导肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的趋化反应，１０~（－１２）～１０~（－９）ｍｏｌ／ＬＥＴ－１可剂量依赖地促进ＰＡＳＭＣ的趋化反应，而高浓度的ＥＴ－１（１０~（－８）～１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的趋化作用减弱，内皮素Ａ型受体的特异拮抗剂ＢＱ１２３可抑制ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应，此外还观察到缺氧可促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应。提示ＥＴ－１可能对缺氧性肺血管结构重组中平滑肌细胞及其前体的迁移具有重要作用。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM—1,ELAM…

目的；探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多表核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法；采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ：将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９０孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响，ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达，测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化     

人单核细胞趋化蛋白1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插入融合表达载体ｐＧＥＸＩＮ,１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后获得高效表达。结果：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明与ｈｕＭＣＰ－１单克隆抗体有明显交叉反应。结论     

烧伤患者血清对培养人血管内皮细胞粘附分子ICAM-1 和PECAM-1表达的影响

目的：探讨烧伤早期血管内皮细胞损伤机理,方法：以培养脐静脉血管内皮细胞（ＥＣ）模型与烧伤患者早期血清（ＥＢＰＳ）共同孵育１,４,１２及２４ｈ,应用免疫细胞化学和图像分析技术检测ＥＢＰＳ对培养ＥＣ细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）、血小板内皮细胞粘附分子－１（ＰＥＣＡＭ－１）表达的影响．以相应浓度的正常人血清和小牛血清作对照．结果：ＥＢＰＳ能迅速上调ＥＣ粘附分子ＩＣＡＭ－１,ＰＥＣＡＭ－１的表达,其表达效应与ＥＢＰＳ浓度及作用时间相关,２００ｍＬ／ＬＥＢＰＳ作用２４ｈ,阳性细胞率和阳性细胞粘附分子的表达最高．结论：ＥＢＰＳ可促进ＥＣ粘附分子的表达．ＥＣ粘附分子表达增强,能促进循环ＷＢＣ与ＥＣ粘附,越血管迁移和向组织中浸润,可能是介导烧伤早期血管内皮细胞损伤的重要原因．     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATPase活性改变及其影响因素

目的探讨非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ及Ｃａ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ活性改变的影响因素。方法测定７７例ＮＩＤＤＭ患者和５０例正常人血糖、总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、糖化血红蛋白（ＨｂＡｌｃ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰＸ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性。ｔ检验、直线相关分析和多元逐步回归分析。结果ＮＩＤＤＭ组血糖、ＨｂＡｌｃ、ＴＣ、ＴＧ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＬＰＯ显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＳＯＤ、ＧＳＨＰＸ、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性低于对照组（除ＧＳＨ的Ｐ＜０．０５外，其他Ｐ＜０．０１）；不同ＨｂＡｌｃ、ＴＣ／ＨＤＬＣ、ＧＳＨ、ＬＰＯ、ＴＣ组的红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性有显著性差别。红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１２．８０＋０．２７（ＧＳＨ）－０．１２（ＬＰＯ）－０．０９（ＴＣ／ＨＤＬＣ），红细胞胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性＝１０８．２０＋１．     

Interleukin-1β,Tumor Necrosis Factor-α and Lipopolysaccharide Induce Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Calf Aortic Smooth Muscle Cells

The focal influx and accumulation of lipoprotein at arterial lesion--prone sites and the recruitment of blood monocytes to those sites are two early key events in atherogenesis. After entering thesubendothelial space of the arterial wall, monocytes undergo activation--differentiation to becomemacrophages which subsequently internallze oxidatively modified lipoproteins through scavenger receptors and become foam cells. Therefore, tostudy the mechanism of the recruitment of bloodmonocytes to the…     

Interleukin-1β, tumor necrosis factor-α and lipopolysaccharide induce expression of monocyte chemoattractant protein-1 in calf aortic smooth muscle cells

Summary To investigate whether interleukin-1β(IL-1β), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and lipopolysaccharide (LPS) induce expression of monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) mRNA and protein in calf aortic smooth muscle cells (SMCs), calf aortic SMCs were cultured by a substrate-attached expiant method. The cultured SMCs were used between the third to the fifth passage. After the cells became confluent, the SMCs were exposed to 2 ng/ml IL- 1β, 20 ng/ml TNF-1α and 100 ng/ml LPS respectively, and the total RNA of SMCs which were incubated for 4 h at 37 C were extracted from the cells by using guanidinium isothiocyanate method. The expression of MCP-1 mRNA in SMCs was detected by using dot blotting analysis using a probe of γ-³²P-end-labelled 35-mer oligonucleotide. After a 24-h incubation, the media conditioned by the cultured SMCs were collected. The MCP-1 protein content in the conditioned media was determined by using sandwich ELISA. The results were as follows: Dot blotting analysis showed that the cultured SMCs could express MCP-1 mRNA. After a 4-h exposure to IL-1β, TNF-α and LPS, the MCP-1 mRNA expression in SMCs was increased (3.6-fold, 2.3-fold and 1.6-fold, respectively). ELISA showed that the levels of MCP-1 protein in the conditioned media were also increased (2. 9-fold, 1.7-fold and 1.1-fold, respectively). The results suggest that calf aortic SMCs could express MCP-1 mRNA and protein. IL-1β and TNF-α can induce strong expression of MCP- 1 mRNA and protein, and the former is more effective than the latter. This project was supported by a grant from National Natural Science Foundation of China (No. 39470289).     

隐孔菌多糖对脂多糖诱导人肺上皮细胞生成单核细胞趋化蛋白-1的作用

目的：研究隐孔菌多糖（CP）对脂多糖（LPS）诱导人肺上皮细胞株A549生成单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响。方法：在有或无CP条件下用LPS诱导A549细胞株，分别采用ELISA和RTPCR法，测定MCP-1蛋白浓度和MCP-1 mRNA的表达。结果：LPS 1000μg／L诱导A549细胞24h明显增加MCP1的生成。CP 100μg／L或地塞米松1μmol／L对A549细胞株的生长和活力无明显影响。CP100μg／L或地塞米松1μmol／L能明显抑制LPS诱导A549细胞株的MCP-1蛋白含量和mRNA的表达。结论：结果证明，CP能调节MCP-1的生成，可能是其抗肺部炎症的作用机制之一。     

康宁克通A对大鼠肾小球系膜细胞增生及单核细胞趋化蛋白—1表达的作用

目的：探讨康宁克通A（TA）抑制大鼠肾小球系膜细胞（GMCs)增生及单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）的表达影响及机制。方法：在体外培养的大鼠GCMs株中加入脂多糖（LPS）后,再分别加入不同浓度的TA,共设3组：①GMC组,②LPS组,即GMCs LPS,③TA组,即GMCs LPS TA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）掺入法,于24h,48h观察3组中GMCs增生水平,选择药物的最佳GMCs增生抑制浓度及时间段。采用免疫组织化学方法观察3组GMCs涂片中MCP－1及核转录因子－κB(NF-κB)的表达,采用ELISA方法观察其培养的上清液中MCP－1的浓度。结果：①TA组GMCs增生水平明显低于LPS组及GMC组（均P＜0.01)。②TA组GMCs中MCP－1的表达明显低于LPS组和GMC组（均P＜0.01)。③TA组GMCs中NF－κB表达明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。④TA组GMCs培养上清中MCP－1浓度明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。结论：TA可能系通过抑制GMCs中NF－κB的激活而抑制大鼠GMCs增生,下调GMCs中MCP－1的异常表达及分泌。     

姜黄素对脂多糖诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白1基因及蛋白表达的影响

目的：进一步探讨姜黄素对LPS诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法：采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞，分别收集上清液及细胞，应用ELISA的方法测定上清液中MCF-1蛋白表达量，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法测定系膜细胞MCP-1基因的相对表达量。结果：LPS可显著上调系膜细胞MCP-1基因表达，同时刺激系膜细胞分泌MCP-1蛋白；姜黄素则呈浓度依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞MC-1基因及蛋白表达。结论：姜黄素能抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞MCP-1基因和蛋白的表达。     

脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。     

右美托咪定对LPS诱导星形胶质细胞MCP-1分泌的影响

目的 研究右美托咪定对脂多糖(LPS)诱导大鼠星形胶质细胞MCP-1 mRNA分泌的影响.方法 培养原代大鼠星形胶质细胞,待诱导分化成熟,免疫组化检测α-2A肾上腺受体的表达;不同浓度LPS刺激星形胶质细胞,观察LPS浓度与MCP-1 mRNA表达的量效关系;随后将细胞随机分为6组:对照组(control组)、LPS(200 ng/ml)刺激组(LPS组)、右美托咪定(DEX)500 ng/ml孵育组(DEX组)、DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS(200 ng/ml)组[DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS组],荧光实时定量PCR检测各组MCP-1 mRNA的表达.结果 α-2A肾上腺受体在星形胶质细胞表达,与细胞标志物GFAP完全共标;不同浓度LPS刺激可引起MCP-1剂量依赖性的表达增加(F(6,41)=289.35,P<0.001),LPS刺激引起MCP-1 mRNA表达量增加的ED50为150.8 ng/ml,ED95为344.1 ng/ml,r=0.86;与LPS组相比,不同浓度右美托咪定均可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞MCP-1 mRNA升高(F(5,21)=454.15,P<0.001).结论右美托咪定可抑制LPS刺激大鼠星形胶质细胞MCP-1 mR-NA的表达,该作用可能是其减轻疼痛的机制之一.     

福辛普利拉对脂多糖诱导的单核细胞TLR4表达的抑制作用

目的 研究福辛普利拉（Fos）对人白血病单核细胞系THP1 Toll样受体4（TLR4）表达的抑制作用.方法 培养THP1细胞,并将其浓度调整为1×10~＋/mL,分为8组：对照组（正常THP1细胞）、脂多糖（LPS）刺激组（THP1细胞＋LPS）、DMSO组（THP1细胞＋LPS＋DMSO）及Fos干预组（THP1细胞＋LPS＋Fos,Fos质量浓度分别为0.25、0.5、1、5、10 μmol/L）.分别采用Real-time PCR法检测THP1细胞TLR4 mRNA的表达;Western blotting检测TLR4和NF-kB蛋白的表达;流式细胞仪检测TLR4蛋白的表达.结景LPS刺激组THP1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达均高于对照组（P〈0.05）;Fos干预组TLR4 mRNA和蛋白的表达均低于LPS刺激组,其中1、0.5 p.mol/L的Fos作用最明显.LPS刺激组NF-kB蛋白表达明显高于各Fos干预组（P〈0.05）.结论 Fos能有效下调LPS诱导的THP1细胞中TLR4的表达,并可有效抑制NF-kB的活性.     

异丙酚预处理对脂多糖（LPS）诱导的人肺微血管内皮细胞（HPMVCs）血管紧张素转化酶（ACE）的表达与活性的影响

 目的 在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVCs)损伤模型中,观察异丙酚预处理对血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)的影响,探讨异丙酚肺保护作用的可能机制。方法 以体外培养的HPMVCs 3~5代作为实验对象,将细胞随机分为4组(n=8)：对照组(C组)、异丙酚组(P组)、LPS组(L组)和异丙酚预处理组(P+L组)。药物终浓度：LPS 5 μg/mL,异丙酚50 μmol/L。按上述分组,加入LPS前1 h加入异丙酚。于37℃、5％CO₂培养箱中进行培养。分别培养12、24、48、72 h后采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法测细胞活力。细胞孵育12 h后,采用改良分光光度法检测各组培养液和细胞中的ACE活性,real-time PCR检测ACE、TNF-α、IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平,同时ELISA测定细胞培养液中TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量。结果 (1)各组细胞在72 h内的细胞活力无显著差异(P>0.05);(2)与C组相比,P组各检测指标均无显著差异(P>0.05);(3)与C组相比,L组TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量及其基因表达水平均显著升高,分泌型ACE活性增加,细胞ACE活性降低,ACE mRNA表达下调(P<0.05);(4)与L组相比,P+L组分泌的TNF-α、IL-1β和MCP-1及其mRNA表达显著降低,细胞ACE活性增加,ACE mRNA表达上调(P<0.05),分泌型ACE活性不变(P>0.05)。结论 异丙酚在转录水平调节HPMVCs中ACE的表达,可能是异丙酚保护HPMVCs的作用机制之一。     

洛伐他汀对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-10表达的影响

目的：观察洛伐他汀(LVT)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-10 (IL-10)表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：体外常规培养HUVECs,分为对照组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液培养;TNF-α处理组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液+TNF-α (20 μg/L) 处理;应用活性氧检测试剂盒检测活性氧含量;LVT干预组,用含10% FBS的 RPMI 1640 培养液+TNF-α (20 μg/L)+LVT (10 μmol/L) 处理。实时定量RT-PCR方法检测各组细胞MCP-1和IL-10 mRNA的表达;Western blotting方法检测各组HUVECs内MCP-1、IL-10和NF-κB蛋白表达。结果：与对照组相比较,TNF-α处理组ROS含量明显增高 (P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组ROS含量明显降低(P<0.05);与对照组比较,TNF-α处理组MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组细胞MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：LVT抑制HUVECs中TNF-α诱导的MCP-1 mRNA和蛋白上调,增强IL-10蛋白表达。LVT可能通过NF-κB途径对抗炎症反应从而防止AS的形成。
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