新藤黄酸诱导脑胶质瘤细胞U87自噬的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法 倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝法检测细胞的存活率,单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine,MDC）染色法检测自噬泡的形成,吖啶橙（acridine orange,AO）染色流式细胞仪观察酸性囊泡细胞器的数量变化,Westernblot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3）- Ⅱ/LC3- Ⅰ以及Beclin- 1的表达变化。结果 GNA在1~32 μmol/L浓度范围抑制U87细胞的增殖;MDC染色表明GNA促进U87细胞内自噬泡的形成;AO染色表明GNA增加U87细胞内酸性囊泡细胞器的数量;Western blot结果显示,GNA作用U87细胞后,LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ比值增大,Beclin- 1的表达增加,提示细胞内自噬活性增强。结论 GNA在一定剂量和时间范围内抑制脑胶质瘤细胞U87细胞的增殖可能与诱导U87细胞自噬的发生有关。     

大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞自噬的影响

目的 基于cGAS/STING信号通路研究大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)自噬的潜在作用。方法 采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖的结果,并根据细胞存活率筛选出药物的浓度,并加入自噬抑制剂3-MA进一步验证大黄素对自噬的影响;采用MDC法检测MH7A细胞自噬情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测cGAS、STING、p-STING、LC3-I、LC3-II、P62和Beclin-1的蛋白表达水平。结果 MDC染色结果提示,大黄素能够增强MH7A细胞自噬;Western blot结果提示,大黄素可降低MH7A细胞自噬相关蛋白cGAS、STING、p-STING和P62的表达,增加LC3-II和Beclin-1的表达。加入自噬抑制剂3-MA后,MH7A细胞P62蛋白表达升高,LC3-II和Beclin-1蛋白表达降低。结论 大黄素可能通过下调cGAS/STING信号通路加速自噬,抑制MH7A细胞增殖。     

自噬在子宫肌瘤中作用研究

目的 研究子宫肌瘤细胞中自噬的程度,探讨自噬对子宫肌瘤的影响.方法 随机选取2013年7月至2014年6月该院因子宫肌瘤住院的患者20例,取子宫肌瘤组织和同一病例正常子宫平滑肌.其中各取10例组织消化为细胞,利用单丹黄酰尸胺(MDC)染色后检测荧光度,检测自噬囊泡数量.另取10例组织提取蛋白,利用Western blot检测自噬相关蛋白Ⅱ型微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)、Beclin-1和P62表达水平.结果 肌瘤细胞中自噬囊泡荧光度明显低于正常子宫平滑肌细胞(P<0.05),肌瘤细胞中LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62蛋白水平也明显低于正常子宫平滑肌细胞(P<0.05).结论 子宫肌瘤细胞中自噬水平明显降低,自噬抑制可能为子宫肌瘤发生的原因之一.     

ABT-737对M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞SKOV3自噬性凋亡与干性特征的影响

探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞（TAM）来源外泌体（Exo）处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。 方法 利用佛波酯（PMA）与重组人白细胞介素-4（IL-4）诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM，流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达；差速离心法提取外泌体，透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布，Western blot检测外泌体标志蛋白表达，Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况；实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组，采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率，双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平，Western blot检测细胞自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62）与凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3）表达，肿瘤细胞成球实验检测细胞干性，Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白（CD133、OCT4、SOX2）表达。 结果 经PMA与IL-4诱导后，THP-1细胞形态发生改变，M1型巨噬细胞标记物CD86表达比例降低而M2型巨噬细胞标记物CD206表达比例升高（P＜0.05）。分离的颗粒物为球形囊泡，大小均匀，粒径峰值约为140 nm，外泌体标志蛋白Alix、CD63、TSG101表达明显，由此判断成功分离到M2型TAM来源Exo，且其能被SKOV3摄取。与对照组比较，Exo组SKOV3细胞凋亡率减少，GFP与mRFP的荧光斑点减少，细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均下调，p62与Bcl-2表达均上调，此外，细胞成球数量增加，CD133、OCT4及SOX2表达均上调，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。与Exo组比较，Exo+ABT-737组SKOV3细胞凋亡率增加，GFP与mRFP的荧光斑点也增加，细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均上调，p62与Bcl-2表达均下调，细胞成球数量减少，且CD133、OCT4及SOX2表达均下调，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 ABT-737 能够在M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞中发挥促自噬性凋亡的作用，并且可以抑制卵巢癌肿瘤干性特征     

羟氯喹逆转慢性髓性白血病细胞K562/IMA对伊马替尼耐药的作用机制研究

目的探讨羟氯喹逆转慢性髓性白血病细胞K562/IMA对伊马替尼（IMA）耐药的作用机制。方法体外培养人慢性髓性白血病细胞K562/IMA（对10滋mol/L的IMA耐药）,将细胞分为对照组（Con组）、IMA干预组（IMA组）、羟氯喹+IMA干预组（HCQ+IMA组）,并在含相关药物的培养基中继续培养。采用CCK-8法检测细胞增殖率的变化,AnnexinV-FITC/PI染色后流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,免疫荧光法染色检测细胞自噬激活标志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ的表达,MDC染色检测细胞自噬酸性囊泡的产生,Westernblot法检测细胞自噬相关蛋白p62、Beclin-1及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的表达。结果IMA组细胞增殖率明显高于HCQ+IMA组（P＜0.05）,细胞凋亡率明显低于HCQ+IMA组（P＜0.05）。HCQ+IMA组细胞侵袭能力明显低于IMA组（P＜0.05）。HCQ+IMA组细胞LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达下调,酸性囊泡形成水平降低,与IMA组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。HCQ+IMA组细胞p62蛋白表达水平高于IMA组（P＜0.05）,而Beclin-1蛋白表达水平低于IMA组（P＜0.05）,同时凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于IMA组（均P＜0.05）,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达水平低于IMA组（P＜0.05）。结论羟氯喹可以逆转IMA耐药CMLK562细胞对IMA的敏感性,其作用机制或与抑制细胞自噬有关。     

肠道病毒71型能诱导THP-1巨噬细胞的自噬和凋亡

目的 探讨肠道病毒71型（EV71）诱导THP-1巨噬细胞自噬和凋亡及其相关信号通路。方法 设置EV71处理组和DMEM对照组,EV71处理组是用感染复数0.1感染THP-1巨噬细胞2、8和16 h,对照组是用DMEM培养基作为阴性对照即是0 h组。CCK-8检测EV71对THP-1巨噬细胞增殖和毒性的影响;荧光定量PCR法检测EV71在细胞内病毒核酸变化情况;透射电镜观察THP-1巨噬细胞内超微结构变化;Hoechst 33342染色法和AnnexinV/PI 双染法检测EV71诱导THP-1巨噬细胞凋亡的情况; 免疫印迹法分析EV71诱导THP-1巨噬细胞自噬和凋亡相关蛋白水平的变化;用3-MA和Ac-DEVD-CHO抑制剂分别检测EV71对THP-1巨噬细胞自噬和凋亡的影响。结果 EV71作用THP-1巨噬细胞2、8和16h的细胞存活率逐渐下降（P<0.05）;细胞内病毒核酸拷贝数逐渐增多（P<0.01）;可见细胞内自噬小体和病毒颗粒;总细胞凋亡率逐渐增加（P<0.01）;与对照组比较,EV71处理组LC3转化量（LC3-II/LC3-I）逐渐增多,而p62蛋白逐渐减少,cleaved caspase 3蛋白增多,Bcl-2和caspase-3蛋白减少（P<0.01）,而cleaved caspase-8无差异（P>0.05）;与PBS对比,在8 h时3-MA明显抑制EV71诱导THP-1巨噬细胞自噬,LC3-II/LC3-I比值减少,而p62蛋白增多（P<0.01）;与DMSO对比,Ac-DEVD-CHO明显抑制EV71诱导THP-1巨噬细胞凋亡,凋亡率分别为15.5%和7.7%（P<0.01）。结论 EV71能感染THP-1巨噬细胞并在其中复制,且能诱导自噬和凋亡,其可能与激活LC3/p62自噬途径和caspase凋亡途径有关。     

自身免疫调节因子促进THP-1细胞的自噬性凋亡

目的 探讨自身免疫调节因子(AIRE)对THP-1单核细胞凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 将THP-1细胞以佛波醇酯(PMA)诱导分化后,进行瞬时转染.免疫荧光和Western blot法检测转染效率.通过Annexin Ⅴ-FITC、PI双染色法和流式细胞仪检测过表达AIRE的THP-1细胞凋亡率.通过间接免疫荧光染色和Western blot检测自噬蛋白LC3B的表达.结果 PMA诱导后,THP-1细胞贴壁生长,形态多样,胞质内可见空泡、吞噬细胞碎片等典型成熟分化形态.转染48 h后,THP-1细胞的AIRE蛋白呈现明显高表达.对比空载体转染和阴性对照,过表达AIRE使THP-1细胞的凋亡率上升;同时,Western blot显示LC3B-Ⅱ的蛋白水平也较空载体转染组增高,且间接免疫荧光染色提示单个细胞的阳性LC3B-Ⅱ斑点数目较空载体转染组明显增加(P＜0.05).结论 AIRE可能通过上调THP-1细胞的自噬促进其凋亡.     

多西紫杉醇诱导前列腺癌PC-3细胞自噬的研究

目的：观察多西紫杉醇是否诱导前列腺癌PC-3细胞产生自噬,并初步探讨其可能机制。方法：实验应用MTT法测定细胞的增殖率;透射电镜观察细胞超微结构的变化;免疫荧光和Western blot分别定性和定量检测自噬相关蛋白Ⅱ型微管相关蛋白轻链3蛋白（microtubule-associated protein 1 light chain 3 typeⅡ,LC3-Ⅱ）、底物蛋白（sequestosome 1/SQSTM1,P62）表达水平,RT-PCR检测自噬相关基因Beclin-1 mRNA。结果：MTT结果显示多西紫杉醇能有效抑制PC-3细胞增殖（F=58.684,P=0.000）;10-6 mol/L多西紫杉醇处理PC-3细胞24 h,即可发生明显的自噬,透射电镜观察到自噬体双层膜结构的形成。免疫荧光和Western blot结果显示多西紫杉醇处理PC-3细胞后P62表达降低（P=0.003、P=0.000、P=0.000）,LC3-Ⅱ表达增强（P=0.002、P=0.000、P=0.000）,RT-PCR结果显示多西紫杉醇处理PC-3细胞后可引起细胞Beclin-1 mRNA水平的上调（P=0.000、P=0.000、P=0.000）。结论：多西紫杉醇可以有效抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖并诱导自噬,其发生可能与通过上调Beclin-1的mRNA水平有关。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

eIF5A-2下调对人肺癌细胞株A549/DDP耐药及自噬的影响

目的 探讨沉默真核翻译起始因子5A-2（eIF5A-2）对人肺癌细胞株A549/DDP耐药及自噬的影响。方法 体外培养人肺癌细胞株A549、A549/DDP,转染细胞A549/DDP,细胞分为eIF5A-2 SiRNA组、阴性对照组（NC组）及空白对照组,另以A549细胞为正常对照组。病毒感染72 h后,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中eIF5A-2-mRNA表达水平,MTT法检测细胞DDP作用下A549/DDP细胞的耐药性,流式细胞术检测细胞的凋亡率,单酰戊二胺(MDC)染色检测细胞自噬水平,蛋白免疫印记（Western blot）法检测eIF5A-2、LC3Ⅱ及Beclin-1蛋白相对表达水平。结果 与正常对照组相比,空白对照组、NC组A549/DDP细胞eIF5A-2 mRNA相对表达水平显著升高（均P＜0.05）;与空白对照组、NC组相比,eIF5A-2-SiRNA组细胞凋亡率显著升高,细胞IC50、自噬小体数目、eIF5A-2、LC3Ⅱ及Beclin-1蛋白相对表达水平显著降低（均P＜0.05）。〖HTH〗结论eIF5A-2下调可降低人肺癌细胞株A549/DDP耐药性,可能与下调LC3Ⅱ、Beclin-1表达,抑制自噬作用有关。     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。     

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应

目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。     

脂肪因子chemerin促进巨噬泡沫细胞形成

目的观察脂肪因子chemerin是否调节巨噬泡沫细胞形成,以及对巨噬泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达和炎症因子释放的影响。方法 100nmol/L佛波酯(phorbolmyristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随机分组,Chemerin不同浓度和作用时间下联合相同浓度(50μg/mL)氧化型低密度脂蛋白与THP-1源性巨噬细胞共孵育。油红O染色观察细胞内脂滴变化,Western blot和实时PCR检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA法检测培养液中炎症因子———肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的浓度,酶法检测细胞内胆固醇含量。结果Chemerin诱导巨噬细胞内脂滴蓄积,下调CD36和ABCA1mRNA及蛋白的表达,增加培养液中促炎因子TNF-α的释放而降低抗炎因子IL-10的释放,提高细胞内胆固醇的含量,且有浓度和时间依赖性。结论 Chemerin通过下调CD36和ABCA1基因的mRNA及蛋白的表达,诱导THP-1巨噬细胞内脂滴蓄积和泡沫细胞形成;ABCA1表达下调可能与促炎因子TNF-α释放增加和抗炎因子IL-10释放减少有关。     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

厄贝沙坦对巨噬细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)基因及蛋白表达的影响

目的研究不同浓度厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人单核/巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmoL/L佛波酯诱导分化后,将细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、厄贝沙坦干预组,干预组分别加入不同浓度厄贝沙坦孵育2 h后,再加入AngⅡ1×10-6moL/L孵育24 h,用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测(LOX-1)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,Ang II可明显上调THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度厄贝沙坦均能抑制(LOX-1)蛋白表达(P<0.05),并且随着厄贝沙坦浓度降低,抑制作用减低,即两者呈浓度依赖性。结论厄贝沙坦以浓度依赖方式抑制AngⅡ诱导的THP1细胞(LOX-1)mRNA和蛋白表达,减少巨噬细胞通过(LOX-1)途径的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)摄入,影响泡沫细胞的发生、发展,发挥其抗动脉粥样硬化(AS)作用。     

游离脂肪酸对THP-1巨噬细胞NALP3炎性通路的影响

目的：探讨NALP3 炎性小体在非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH) 的炎症发 生发展中的可能作用。方法：选择THP-1 构建体外巨噬细胞模型,用不同浓度的棕榈酸干预24 h;用不同浓度 的N- 乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC) 预处理细胞后加入高浓度的棕榈酸孵育24 h。分别用活性氧(reactive oxygen species,ROS) 指示剂结合流式细胞仪检测THP-1 中ROS 的变化;ELISA 检测细胞上清液中IL-1 的浓 度;免疫荧光技术检测NALP3,caspase-1 蛋白的表达;荧光定量PCR 检测NALP3 蛋白复合体各组分(NALP3, ASC,caspase-1)mRNA 的表达水平。结果：与空白组相比,各棕榈酸组细胞内ROS 增加,NALP3 和caspase-1 蛋 白表达及其分泌IL-1 水平均增加(P<0.05),并随棕榈酸浓度增加而增强;NAC 预处理后,与单纯棕榈酸组相比, 各NAC 组THP-1 产生ROS 水平均下降,同时NALP3 和caspase-1 蛋白表达水平,NALP3 复合体各组分mRNA 水 平及其分泌IL-1 的能力均降低(P<0.05),此抑制作用随NAC 浓度增加而增强。结论：游离脂肪酸可通过产生 ROS 调节巨噬细胞NALP3 炎性小体信号通路的活化引起炎症因子分泌,该通路可能是NASH 的发病机制之一。     

巨噬细胞中ABCA1对炎症因子的调节及其意义

目的研究在8-溴-环磷酸腺苷（8-Br-cAMP）刺激下，巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运子（ABCA1）对细胞间黏附分子-l（ICAM-1）、单核细胞化学趋向蛋白-1（MCP-1）及白介素-1β（IL-1β）的调节作用，在细胞水平证实ABCAl在动脉粥样硬化发生巾的作用机制？方法用氟波酯（PMA）刺激THP-1细胞使之转变为巨噬细胞，8-Br-cAMP（0．5mmol／L）刺激3、6、12、24h后，以荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCAl、ICAM-1、MCP-1及IL-1BmRNA和蛋白质表达量；用反义寡核苷酸（100nmol／L）抑制ABCAl的表达，观察Ox-LDL刺激下上述指标的改变。结果予8-Br-cAMP刺激6、12h后，巨噬细胞ABCAl、ICAM-1、MCP-1mRNA和蛋白质水平及IL-1B蛋白质水平均增高：反义寡核甘酸转染巨噬细胞，8．Br—cAMP刺激后3、6h，ABCA1、ICAM-1、MCP．1mRNA的表达降低，刺激后12，24h，ABCA1、ICAM．1、MCP-1及IL-1B蛋白质的表达水平降低。结论在8-Br-cAMP刺激下，巨噬细胞ABCA1可增加炎症因子表达，参与动脉粥样硬化的发生。     

内脂素对THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用

目的:观察内脂素(visfatin)诱导人类单核细胞白血病细胞株THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达作用。方法:给予不同浓度的visfatin处理THP-1源性巨噬细胞,并加入低密度脂蛋白(LDL)孵育24 h后,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果:高浓度的visfatin刺激负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞质内的脂滴明显增多。visfatin呈浓度依赖性的下调负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞中PPARγmRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:visfatin对THP-1源性泡沫细胞形成中PPARγ表达水平的下调,这可能在动脉粥样硬化的发生发展起重要作用。