抑制 Toll样受体4表达对巨噬细胞极性转化的影响

目的：通过观察CLI－095对巨噬细胞表型的影响,探讨Toll样受体4（ TLR4）在巨噬细胞极性转化中的作用。方法以体外培养的小鼠骨髓来源巨噬细胞为研究对象,按数字表法随机分为3组,对照组（常规培养小鼠源性骨髓巨噬细胞48 h,不给予任何药物处理）、模型组（常规培养细胞24 h,换液后加入终浓度为1．0×105 U／L的γ干扰素和5 mg／L脂多糖干预24 h）、处理组（先给予1 mg／L的CLI－095孵育细胞24 h,换液后加入终浓度为1．0×105 U／L的γ干扰素和5 mg／L脂多糖干预24 h）。应用实时荧光定量聚合酶链反应检测TLR4 mRNA的表达;应用流式细胞术检测膜分子CD16／32、CD206的表达;用酶联免疫吸附法检测白细胞介素－10（IL－10）和IL－12的分泌。结果模型组较对照组CD16／32、IL－12明显升高,CD206明显降低,符合M1型巨噬细胞特性。处理组与模型组比较,TLR4 mRNA表达降低,提示TLR4受到抑制,CD16／32和IL－12表达下降,CD206和IL－10明显上升,差异有统计学意义（P＜0．05）,符合M2型巨噬细胞极性特点。结论 TLR4在巨噬细胞极性转化中起着重要的作用,抑制TLR4表达可诱导炎症性巨噬细胞向抗炎性M2型转化。     

Toll样受体在金黄色葡萄球菌所致单核-巨噬细胞功能障碍中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在金黄色葡萄球菌所致单核-巨噬细胞功能障碍中的作用。方法利用小干扰RNA(siRNA)在单核-巨噬细胞中干预TLR2和TLR4的表达,同时设计无义序列作为对照。利用单核-巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除实验分析吞噬能力的变化。结果 siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的相对表达率分别为45.2%和40.7%,显著低于无义序列的100.0%(P<0.05);金黄色葡萄球菌对siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的U937细胞黏附率分别为50.2%和47.1%,与无义序列的100.0%比较差异有统计学意义(P<0.05);金黄色葡萄球菌在siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的U937细胞中的清除率分别为46.3%和43.5%,与无义序列的100.0%比较差异有统计学意义(P<0.05);将金黄色葡萄球菌介质处理过的U937细胞的清除率设为100.0%,则金黄色葡萄球菌在TLR2抑制剂Pam3CSK4和TLR4抑制剂脂多糖处理过的U937细胞中的清除率分别为42.7%和40.6%,与无义序列的100.0%比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR2和TLR4的表达有利于单核-巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除。     

结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(M.tb)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用M.tb感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染M.tb前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P0.01);结核病患者和正常人外周血在感染M.tb后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对M.tb的免疫应答。     

反义Toll样受体4表达质粒对内毒素刺激小鼠巨噬细胞的影响

目的　研究反义Toll样受体 4 (TLR4 )表达质粒对体外内毒素刺激小鼠巨噬细胞的作用。方法　反义TLR4表达质粒的构建 ,及转染入巨噬细胞株RAW 2 6 4 .7。在不同时间用不同浓度的内毒素刺激转染细胞及对照组细胞。用半定量RT PCR技术检测TLR4mRNA的变化 ,ELISA方法检测TNF α水平的变化。结果　转染细胞的TLR4mRNA水平低于对照组细胞。在体外用不同浓度内毒素及不同时间刺激的两组细胞TNF α水平低于对照组细胞。结论　反义TLR4表达质粒能够下调体外细胞TLR4mRNA的表达 ,降低细胞因子TNF α的分泌     

重组人生长激素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化碳产生及Toll样受体4表达的影响

目的 研究重组人生长激素(rhGH)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)生成及Toll样受体4(TLR4)表达的影响以探讨rhGH的免疫调节作用.方法 采用Griess反应、中性红吞噬实验及RT-PCR法分别测定不同剂量(1、3、25和100μg/L)rhGH作用的小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、吞噬功能及TLR4的表达.结果 结果显示3μg/L rhGH可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量及TLR4的表达,增强巨噬细胞吞噬中性红能力.结论 rhGH对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产生及TLR4表达有显著的调节作用,这种调节作用呈现剂量相关性,为rhGH的合理应用提供一定的实验基础.     

Toll样受体4与动脉粥样硬化的关系

目的   探讨Toll样受体4（TLR4）的表达与动脉粥样硬化(AS)及其主要危险因素的关系。方法   选取行冠状动脉旁路移植术患者31例共63块主动脉壁全层组织作为研究组；肾移植供体者8名共32块动脉壁全层组织作为对照组。应用免疫组织化学方法检测动脉壁全层组织中TLR4蛋白的表达，并分析TLR4蛋白的表达与年龄、性别、吸烟、血压、血糖、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）等AS危险因素之间的关系。结果  TLR4在研究组动脉壁全层组织中有明显表达，而对照组无表达。TLR4表达与高血压、高血糖、LDL-C升高、HDL-C降低相关（P均＜0.05），与年龄、性别、吸烟、TC、TG无相关性（P＞0.05）。结论   TLR4可能是AS的始动因素，高血压、高血糖、LDL-C升高、HDL-C降低等危险因素通过TLR4信号途径促进AS的发生发展。     

Toll样受体4在早产中的表达及意义

早产占分娩总数的5％～15％。尽管围生期保健在不断发展,但早产仍是导致围生儿发病及死亡的主要原因。目前对早产的病因尚未明确。近年来随着生殖免疫学的发展,Toll样受体尤其是Toll样受体4在早产中的研究越来越受到重视。本文将对此进行综述。     

青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及TNF-α的影响

目的 探讨中药成分青心酮（3，4-dihydroxyacetophenone,DHAP）对RAW264．7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4（soluble Toll-like reoeptor 4，sTLR4）mRNA、蛋白表达及TNF-α分泌的影响。方法 建立细胞炎症反应模型，用RT-PCR及Western blot分析sTLR4 mRNA及蛋白水平的改变，用ELISA方法检测TNF-α分泌的变化。结果 RAW264．7细胞炎症反应时，sTLR4 mRNA及蛋白表达均下调，该细胞经青心酮处理后在炎症反应时，sTLR4 mRNA及蛋白表达均上调，与未处理组比较，表达明显增加，而TNF-α分泌下降。结论 DHAP预处理能显著上调sTLR4 mRNA及蛋白表达，减少TNF-α分泌，抑制炎症反应。这将为临床治疗感染性休克提供一个新的研究方向。     

Toll样受体-4与脓毒症的研究进展

Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）是病原微生物跨膜信号转导的重要受体，与机体抗感染的天然免疫反应密切相关。Toll样受体-4(Toll-like receptor-4 ,TLR-4)是TLRs家族的重要成员，其作用尤为显著，是识别革兰氏阴性菌内毒素（脂多糖 lipopolysaccharides,LPS）、参与信号转导、诱发感染导致脓毒症链式炎症反应的主要受体。因此，研究TLR-4在脓毒症发病机制中的作用具有重要的意义,可以为早期防治脓毒症开辟新的途径。     

Toll样受体4与心血管疾病

Toll样受体4(TLR-4)作为人类发现的第一个TLR相关蛋白,是介导脂多糖应答的主要受体,能够识别特定类型微生物的保守分子成分,激活天然免疫以及帮助机体建立获得性免疫。近年来研究发现,TLR-4与心血管疾病的发生、发展密切相关。氧化应激和炎性反应渗透在心血管疾病中心肌与血管的损伤各个环节,而TLR-4在其中发挥着十分重要的作用。     

LOX-1在D-葡萄糖培育人肾小球系膜细胞的表达

目的 研究血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在D-葡萄糖培养人肾小球系膜细胞(HGMC)的表达,探讨糖尿病肾脏损伤的机制.方法 体外培养HGMC,用RT-PCR法检测LOX-1 mRNA的表达,用Western blot法检测p38MAPK蛋白质的相对含量.结果 D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1 mRNA的表达,该作用可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制;D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式上调p38MAPK蛋白的表达,该作用也可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制.结论 D-葡萄糖能以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1的表达.高浓度D-葡萄糖可能通过上调LOX-1 mRNA表达,激活细胞内的p38MAPK信号传递途径,参与糖尿病肾病的发生发展.     

小胶质细胞(MG) TLR 4介导T细胞获得性免疫炎症反应的机制

 目的 探讨以小胶质细胞(microglia,MG)为中心Toll样受体 4 (toll like receptor 4,TLR 4) 介导的T细胞获得性免疫炎症损伤机制在早产儿脑白质损伤中的作用。方法 分别分离纯化C3H/HeJ(tlr4基因缺失)小鼠和C57B/L (野生型) 小鼠脾脏CD4＋T细胞和大脑MG细胞并制作交互共培养模型。各组分别加以细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为刺激因素,流式细胞术和细胞化学染色观察MG变化,检测CD4＋ T细胞增殖变化和ELISA方法检测其分泌功能;通过上调(LPS刺激)或下调TLR 4(tlr4基因缺失)表达对MG活化和共同免疫刺激因子MCH Ⅱ的影响及对CD4＋T细胞增殖分化及Th1/Th2极化方向的影响,阐明TLR 4在T细胞获得性免疫中的关键作用。结果 显微镜下观察,LPS刺激后tlr4基因缺失小鼠MG细胞胞体较小,突起细长,仍处于静息状态;相反,野生型组LPS刺激后出现较明显的细胞体积变大、胞体变大显圆满,突起增加呈分支状。LPS活化的MG其TLR 4和MCH Ⅱ蛋白表达显著上调与tlr4基因缺失小鼠比较有显著性差异(P<0.01)。此外,LPS刺激活化的CD4+ T淋巴细胞增殖明显,且伴有Th1型细胞因子显著升高和Th2型细胞因子的显著下降,与tlr4基因缺失小鼠比较均有显著性差异(P< 0.01)。TLR-4表达与CD4＋T细胞Th1细胞因子浓度间具有显著相关性(P<0.01)。结论 TLR-4介导MG活化在固有免疫和获得性免疫中发挥桥梁作用,并由此提出由Th1/Th2偏移向TLR4、Th1偏移的新的早产儿脑白质损伤模式。     

Effects of Propofol on The mRNA Expression of Toll-like Receptor 4 in BV-2 Cells During Mimic Ischemia-Reperfusion Injury In Vitro

This study investigated the effects of propofol on the mRNA expression of Toll-like receptor-4 (TLR4) in BV-2 cells during mimic ischemia-reperfusion (I/R) injury in vitro. BV-2 cells, a mouse microglia line, were cultured and divided into 4 groups at random: control group (group C), ischemia/reperfusion group (group I/R), low-dose propofol (25 μmol/L) intervention group (group PF25) and high-dose propofol (100 μmol/L) intervention group (group PF100). The mRNA expression of TLR4 and NF-κB was measured by means of RT-PCR. TNF-α levels in the supernatants of BV-2 cells were detected by ELISA. The results showed that the mRNA expression of TLR4 and NF-κB was significantly higher in groups I/R, PF25 and PF100 than in group C (P<0.01). And the TNF-α level in the supernatants was elevated in groups I/R, PF25 and PF100 as compared with that in group C (P<0.01). After pre-treatment with propofol, the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and the TNF-α level were significantly decreased in groups PF25 and PF100 in comparison to those in group I/R (P<0.01). And the decrease in those indicators was more significant in group PF100 than in group PF25 (P<0.01). It was concluded that propofol exerted brain-protecting effects during I/R injury by suppressing the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and deceasing the TNF-α level.     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源巨噬及其形成的泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的研究不对称二甲基精氨酸（ADMA）对THP-1源巨噬细胞以及其形成的泡沫细胞内胆固醇含量的影响.探讨其促使动脉粥样硬化发生的可能机制.方法以THP-1来源的巨噬/泡沫细胞模型为研究对象,用不同浓度ADMA在不同时间内进行体外干预;采用酶偶联比色法测定干预前后细胞内胆固醇含量的变化.结果 ADMA在体外以浓度和时间依赖的方式上调巨噬/泡沫细胞内总胆固醇的含量,增强巨噬/细胞吞噬脂质的能力.结论 ADMA增加巨噬/泡沫细胞内胆固醇含量,使过多的胆固醇在细胞内聚积,从而加重细胞泡沫化的程度.     

烧伤患者外周血单个核细胞TLR2和TLR4表达的变化

目的观察烧伤患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化。方法选取深II度以上烧伤30%~50%TBSA烧伤患者23例,伤后48 h取外周血20 mL,同时抽取健康献血者(设为对照组)12例,外周血20 mL。常规方法分离出单个核细胞,用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人TLR4抗体对外周血单个核细胞进行免疫染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞率及其平均荧光强度(MFI)。结果烧伤后48 h,患者外周血单个核细胞TLR2-FITC阳性细胞数量上升,为(57.57±18.56)%,与对照组的(26.32±10.31)%相比,P<0.05;细胞表面TLR2-FITC荧光强度下降,TLR2-FITC MFI为58.5±18.76,低于对照组(69.79±23.42);TLR4-PE阳性率为(29.84±13.28)%,与对照组的(12.75±5.18)%相比,P<0.05;TLR4-PE MFI减弱,与对照组相比,P<0.05。结论烧伤患者外周血单个核细胞TLR2/4阳性数量均升高,而TLR2/4表达强度降低。     

Toll样受体3和4在人骨髓间充质干细胞中的表达及其活化对细胞增殖的影响

  目的 研究Toll样受体（TLR）3和4在人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)中的表达及其活化对细胞增殖的影响。方法 Ficoll法分离培养健康供体的BM-MSC;用流式细胞(FCM)检测BM-MSC中CD34、CD45、HLA-DR、CD44和CD71的表达;免疫细胞化学法检测爬片BM-MSC细胞中CD71的表达;RT-PCR法检测BM-MSC中TLR3和TLR4的表达;MTT法检测 POLY(IC)和LPS对BM-MSC增殖的影响。结果 FCM法发现体外分离培养的BM-MSC中CD34、CD45和HLA-DR表达呈阴性,CD44和CD71表达呈阳性;爬片BM-MSC细胞中CD71的表达呈阳性;BM-MSC中有较高水平的TLR 3和TLR4表达;体外培养第5天时,各浓度POLY(IC)组存活细胞数均少于血清组（P＜0.01）,而多于单纯培养基组（P <0.05）,浓度和存活细胞数间存在半对数直线相关关系（r＝?0.998,P＜0.05）;体外培养第7天时,中浓度和高浓度LPS组存活细胞数均少于血清组（P＜0.05）,而多于单纯培养基组（P＜0.01）。结论 健康供体BM-MSC中存在高水平TLR3和TLR4 mRNA的表达;POLY(IC)和LPS通过TLR3和TLR4的介导影响BM-MSC的增殖。     

TLR4基因多态性与刨伤后脓毒血症相关性研究

目的探讨我国浙江汉族人群Toll样受体4（TLR4）基因（Asp299Gly和Thr3991le）多态性与创伤后脓毒血症的关系。方法在50例创伤后脓毒血症患者和100例正常对照者中,采用等位基因特异性聚合酶链反应一限制性片段长度多态性方法（ASPCR—RLFP）检测TLR4Asp299Gly和Thr3991le基因多态性,分析TLR4基因多态性与创伤后脓毒血症的相关性。结果在所有的研究对象中均未发现TLR4Asp299Gly和Thr3991le基因突变。结论浙江汉族人群TLR4Asp299Gly和Thr3991le基因多态性与创伤后脓毒血症易感性可能无相关性。     

冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达的测定及临床意义

目的:观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)在冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达水平,并探讨其与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系.方法:流式细胞术检测50例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者及40例健康对照者PBMCs TLR4的表达;生化常规测定所有入选者血脂水平;应用TaqMan荧光探针技术建立实时荧光定量RT-PCR方法,在GeneAmp 5700型检测仪上测定了入选对象PBMCs中TLR4 mRNA的含量.结果:PBMCs的阳性率为(29.5±7.9)%,显著高于健康对照组的阳性率[(23.4±7.7)%,P<0.01];冠心病组TLR4 mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5.3±3.8)×106 vs (1.8±1.4)×106, P<0.01];而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4阳性率和mRNA平均拷贝数均无明显差异.结论:TLR4主要表达于外周血单个核细胞,在CAD患者中其阳性率升高;CAD患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组;TLR4的阳性率和mRNA含量高低与血脂无关;TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性.     

过氧化物酶增生物激活受体γ在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的机制和过氧化物酶增生物激活受体（PPAR7）特异性激动剂对培养的VSMC凋亡的影响．评价PPAR7在动脉粥样硬化（AS）发生和发展中的作用。方法培养的鼠VSMC中加入不同浓度OX—LDI．和PPAR7的两种激动剂—环格列酮（ciglitazone）和15脱氧-前列腺素J2（15d—PGJ2）．孵育24h．用透射电镜观察细胞凋亡的特征性形态学改变；流式细胞仪测定细胞凋亡率。另外，在给予ox-LDL、cig／itazone和15d—PGJ2的同时．加入PPARγ的抑制剂PGF2α，比较未加和加入抑制剂PGF2α组之间VSMC的形态学改变、凋亡率。结果ox—LDL及ciglitazone、15d—PGJ2均可诱导VSMC凋亡，且凋亡率增加与3种物质的剂量变化有关；PGF2α能降低OX—LDL ciglitazone和15d—PGJ2诱导的VSMC凋亡率。结论PPAR7内源性的配体OX-LDL诱导VSMC凋亡的作用是通过激活PPAR7途径实现的；PPAR7内源性的配体和特异性激动剂过度激活PPAR7途径有促进细胞凋亡而导致AS斑块不稳定性增加的可能。     

软脂酸对肾小管上皮细胞TLR4表达的影响

目的通过研究软脂酸(PA)对肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,初步探讨游离脂肪酸(FFA)在引发肾脏微炎症反应的相关作用机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),采用不同浓度软脂酸进行干预,用RT-PCR法检测12 h、24 h后肾小管上皮细胞TLR4 mRNA水平,ELISA方法检测24 h后IL-6、TNF-α的表达。结果软脂酸组的TLR4、IL-6、TNF-α表达较对照组均明显升高,且呈现一定的浓度依赖趋势(P<0.05)。结论软脂酸可能是通过刺激肾小管上皮细胞表达TLR4而促进肾脏炎症反应。