泛昔洛韦和阿昔洛韦体内外抗疱疹病毒活性的比较研究

 目的观察泛昔洛韦和阿昔洛韦在体内外实验模型中的抗疱疹病毒药效。方法用CPE,MTT染色法和空斑法观察两药在Vero细胞培养内对疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)病毒的抑制作用；在疱疹病毒1型小鼠急性脑炎和豚鼠皮肤感染模型以及疱疹病毒2型小鼠阴道炎模型上观察两药体内对HSV-1和HSV-2感染的治疗效果。结果在细胞培养内，泛昔洛韦对HSV-1和HSV-2无明显抑制活性(IC₅₀＞1 000 μg·mL_-1)，阿昔洛韦对HSV有显著的抑制作用。动物口服泛昔洛韦和阿昔洛韦能显著降低HSV-1腹腔感染小鼠引起的死亡和延长小鼠生命，泛昔洛韦和阿昔洛韦保护小鼠死亡的ED₅₀分别为29.9 mg·kg_-1和＞100 mg·kg_-1，延长小鼠生命的ED₅₀分别为43.6 mg·kg_-1和＞100 mg·kg_-1；对HSV-1感染豚鼠皮肤疱疹的抑制率，口服泛昔洛韦为75.0%～77.8%，阿昔洛韦为45.0%～41.7%，泛昔洛韦优于阿昔洛韦；对HSV-2阴道感染小鼠死亡率和延长小鼠生命，口服泛昔洛韦和阿昔洛韦的ED₅₀分别是53.4，53.4和44.6，39.5mg·kg_-1。结论①在细胞培养内，泛昔洛韦无抗疱疹病毒作用,阿昔洛韦有很强的抗疱疹病毒活性。②对于HSV-1引起的脑炎和皮肤感染，口服泛昔洛韦优于阿昔洛韦；对于HSV-2引起的阴道炎，口服两药作用相似。     

热毒宁注射液抗A16型柯萨奇病毒的研究

目的 研究热毒宁注射液对A16型柯萨奇病毒（CoxA16）感染Vero细胞及乳鼠模型的抗病毒作用。方法 采用75 TCID₅₀和50 TCID₅₀ CoxA16感染Vero细胞,建立细胞模型;5日龄ICR乳鼠ip感染1×10⁶ TCID₅₀ CoxA16,建立动物模型。观察热毒宁注射液对CoxA16感染Vero细胞病变的影响,体内实验观察热毒宁注射液对病毒感染乳鼠死亡率、生存时间、体质量变化率、临床症状评分的影响。结果 在Vero细胞模型上,热毒宁注射液（生药5.0 mg/mL）显著抑制75 TCID₅₀和50 TCID₅₀ CoxA16引起的细胞病变;在5日龄ICR乳鼠模型上,热毒宁注射液明显缓解CoxA16导致的乳鼠死亡,延长乳鼠生存时间和恢复乳鼠生长抑制;同时热毒宁注射液缓解病毒感染导致的临床症状。结论 热毒宁注射液在体内外均有抗CoxA16作用,为其临床用于治疗手足口病提供依据。     

马蔺子甲素体外抗癌及其诱导白血病细胞K562凋亡的作用

 目的 研究马蔺子甲素体外抗癌及其诱导白血病细胞K562凋亡的作用。方法 采用四氮唑蓝（MTT）法检测马蔺子甲素对白血病K562和阿霉素耐药株K562/AO2、白血病HL-60、肺癌GLC-82、肝癌BEL-7402、胃腺癌BGC-823、神经母细胞瘤LA-N-5、星型胶质瘤TJ-905、骨肉瘤MG-63 9种人癌细胞株的IC₅₀；应用荧光显微镜、电镜和流式细胞术的方法检测马蔺子甲素诱导K562细胞凋亡的作用，并采用流式细胞仪检测其凋亡百分率和细胞周期。结果 马蔺子甲素对9种人癌细胞株作用72 h，IC₅₀均在26.70 nmol·mL-1（10.0 μg·mL-1）以下；马蔺子甲素终浓度8.01 nmol·mL-1（3.0 μg·mL-1）与K562细胞共培养72 h，电镜和荧光镜下明显可见细胞形态学呈凋亡特征样改变，流式细胞仪检测其凋亡率为（20.36±1.41）%，与对照组比较统计学差异有显著性；马蔺子甲素终浓度2.67 nmol·mL-1（1.0 μg·mL-1）也具有诱导K562细胞凋亡的作用。马蔺子甲素作用后，K562细胞G₀/G₁期显著升高，S期细胞则显著降低，细胞周期被阻断在G₀/G₁期。结论 马蔺子甲素对多种人癌细胞株具有显著的体外抗癌活性，并能诱导白血病细胞K562凋亡。     

健康志愿者多剂量服用六味地黄丸对CYP3A4活性的影响

 目的 在健康志愿者体内研究多剂量口服六味地黄丸对细胞色素P450（CYP）3A4活性的影响作用。方法 采用随机开放两周期试验设计, 8例健康志愿者口服六味地黄丸14 d（每天3次，每次8粒）的前后单剂量口服咪达唑仑15 mg, HPLC测定给药后咪达唑仑10 h内的不同时间点的血浆浓度。结果 口服六味地黄丸前与口服六味地黄丸14 d后的咪达唑仑ρ_max，AUC_0-10, CL/F和t_1/2比值的90%可信区间分别为(44.5, 78.5) ng·mL-1, (58.9, 85.8) ng·h·mL-1, (116.4, 170.7) L·h-1和(88.1,124.9) h，口服六味地黄丸前后咪达唑仑t_max无明显差异。结论 口服六味地黄丸14 d对肠道CYP3A4有诱导作用。     

注射用兰索拉唑在中国人体内的药动学研究

 目的 建立人血浆中兰索拉唑的反相高效液相色谱紫外检测法，进行兰索拉唑的人体药动学研究。方法 血浆样品以乙醚提取，非那西丁为内标，采用Kromasil100-5 C₈(4.6 mm×150 mm)色谱柱，以水-乙腈-二乙胺（用磷酸调pH 6.7）（600∶400∶1.2）溶液为流动相，流速0.8 mL·min-1，柱温40 ℃，检测波长285 nm。12名健康受试者，男女各半，采用随机开放自身对照三交叉，单剂量静脉滴注低（15 mg）或中 (30 mg) 或高 (60 mg) 剂量的注射用兰索拉唑，测定血浆中兰索拉唑浓度，计算兰索拉唑的人体药动学参数，并对其进行统计分析。结果 线性范围49.0~4 900.0 ng·mL-1，最低定量限为49.0 ng·mL-1（S/N > 10），方法学回收率为93.3％～100.1％，提取回收率大于82％。15 mg剂量组主要药动学参数：ρ_max为（1 105.65±506.24）ng·mL-1，t_max 为（0.24±0.14）h，t_1/2为（3.01±1.77）h， MRT_0-12为（0.93±0.95）h，AUC_0-12为（991.16±814.49）ng·h ·mL-1；30 mg剂量组，ρ_max为（2 171.33±799.02）ng·mL-1，t_max 为（0.51±0.16）h，t_1/2为（3.98±2.51 ）h， MRT_0-12为（1.91±0.83）h，AUC_0-12为（3 495.87±1 770.92）ng·h ·mL-1； 60 mg剂量组，ρ_max为（4 070.53±643.04）ng·mL-1，t_max 为（1.02±0.07）h，t_1/2为（3.73±1.55）h，MRT_0-12为（2.42±0.65）h，AUC_0-12为（8 351.14±2 599.90）ng·h ·mL-1。结论 本法简便、灵敏、重现性好。健康受试者静脉滴注15、30、60 mg兰索拉唑后，其体内药动学过程基本上呈现线性动力学特征而无饱和性，血浆药物浓度-时间曲线符合二室模型。     

汉黄芩素体外抗人胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡作用

 目的 探讨汉黄芩素对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法 应用四甲基偶氮唑盐（MTT法测定汉黄芩素对于SGC7901细胞增殖活性;应用肿瘤细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力;应用形态学方法、流式细胞仪测定汉黄芩素对SGC7901细胞的凋亡作用,进行细胞周期分析,并观察对胃癌细胞内活性氧（ROS的影响。结果 汉黄芩素对SGC7901细胞增殖和侵袭活性具有明显抑制作用,其抑制细胞增殖的IC₅₀为（74.26±1.21μmol·L-1,汉黄芩素也具有诱导胃癌细胞凋亡作用,荧光染色可见明显核碎裂、染色体聚集,并使胃癌细胞阻滞于G₀/G₁期;使肿瘤细胞内ROS水平明显升高。结论 汉黄芩素对胃癌SGC7901细胞的增殖有抑制及促进凋亡的作用,可能与上调细胞内ROS水平有关。     

藏药甘青乌头抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用研究

 目的探讨藏药甘青乌头抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的作用和机制。方法MTT法测定甘青乌头对Vero细胞的毒性,采用细胞病变法和蚀斑法测定甘青乌头体外抗病毒活性,以半数抑制浓度和治疗指数为评价指标;定量荧光PCR法和蚀斑法考察甘青乌头体外抗病毒作用机制。用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对甘青乌头体内抗单纯疱疹病毒的抗病毒活性进行评价。结果甘青乌头对Vero细胞的半数中毒浓度(CC₅₀)为5.57 g·L^-1。细胞病变法和蚀斑法测得甘青乌头的半数有效浓度(EC₅₀)分别为2.25,1.68 g·L^-1,治疗指数TI分别为2.47,3.32。LD₅₀值为0.85 g·kg^-1。甘青乌头延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率。甘青乌头能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性;对病毒吸附到细胞没有抑制作用,能抑制HSV-2大分子的增值。抑制HSV-2 DNA合成的抑制倍数达102。结论甘青乌头体外具有较强的抗HSV-2的活性,抗病毒作用是通过抑制病毒复制循环的各个环节起作用的。     

盐酸纳美芬注射液在健康人体中的药动学研究

 目的 研究中国健康志愿者单剂量静脉推注0.25、0.5、1.0 μg·kg-1盐酸纳美芬注射液后的药动学行为，并评价药动学参数在0.25~1.0 μg·kg-1内剂量相关性。 方法 12名健康志愿者，随机三交叉试验，分别单剂量静脉推注盐酸纳美芬注射液0.25、0.5、1.0 μg·kg-1；测定给药后48 h内的血药浓度。结果 单剂量静脉推注0.25、0.5、1.0 μg·kg-1盐酸纳美芬注射液后，纳美芬的消除半衰期大约为13~15 h，血浆药物浓度(ρ_max)随剂量增加呈线性增加[（104.4±61.9)~(330.6±152.5) pg·mL-1]。另外，曲线下面积（AUC）在0.25~1.0 μg·kg-1内也呈线性增加[AUC_0-t（301.4±86.8）~（1 023.1±214.2）pg·h·mL-1, AUC_0-∞：（337.1±82.7）~（1 115.2±302.3） pg·h·mL-1]。结论 在0.25~1.0 μg·kg-1内纳美芬呈线性药动学，ρ_max、AUC的升高与剂量成正比。t_max、t1/2、AUC_0-t、CL/F、V_d/F性别间无统计学差异，但是ρ_max有明显统计学差异。     

磷酸川芎嗪缓释制剂在比格犬体内的药动学和生物等效性研究

 目的 研究自制磷酸川芎嗪(TMPP)缓释微丸及TMPP冰片复方缓释微丸与市售TMPP普通片在比格犬体内的单剂量和多剂量的药动学和生物等效性。方法 利用高效液相-紫外检测6只比格犬单剂量与多剂量分别口服TMPP缓释微丸及TMPP冰片复方缓释微丸与市售TMPP普通片后的血药浓度,应用3P97程序计算药动学参数,对AUC_0~∞、AUC_{0-24 h}的对数值进行方差分析、双单侧t检验等统计学处理,以80%~125%为等效标准,评价缓释制剂与普通制剂的生物等效性。结果 单剂量时TMPP缓释微丸的t_max、ρ_max、AUC_{0~24 h}和MRT分别为（2.50±0.29）h、（213.06±32.44）ng·mL-1、（2 722.25±369.42）ng·h·mL-1和（9.43±1.05）h,TMPP冰片复方缓释微丸的上述参数分别为（2±0.76）h、（252.09±28.96）ng·mL-1、（3 613.51±974.16）ng·h·mL-1和（9.14±2.56）h,市售普通片的上述参数分别为（0.33±0.09）h、（3 402.13±584.97）ng·mL-1、（2 801.24±560.17）ng·h·mL-1和（1.52±0.35）h。多剂量达稳态时TMPP缓释微丸的t_max、ρ_max、ρ_min、AUC_{0~24 h}、ρ_av和FI分别为（2±0.12）h、（340.36±28.91）ng·mL-1、（60.39±11.18）ng·mL-1、（3 161.82±314.68）ng·h·mL-1、（145.94±15.68）ng·mL-1和（191.84±11.58）%,TMPP冰片复方缓释微丸的上述参数分别为（2±0.31）h、（402.21±29.48）ng·mL-1、（80.13±21.65）ng·mL-1、（4 025.17±954.76）ng·h·mL-1、（167.87±29.37）ng·mL-1和（191.87±13.29）%,市售普通片的上述参数分别为（0.5±0.011）h、（376.79±44.6）ng·mL-1、0 ng·mL-1、（2 550.27±154.88）ng·h·mL-1、（114.93±13.68）ng·mL-1和（327.84±22.37）%。结论 经方差分析和双单侧t检验,不论是单剂量口服还是多剂量口服,TMPP缓释微丸和普通片均具有生物等效性,而TMPP复方缓释微丸与普通片均生物不等效。缓释制剂均表现出良好的缓释效果,且波动系数均优于普通片。     

淫羊藿素在大鼠体内的药动学研究

 目的 研究淫羊藿素灌胃或静脉注射给药后原型药物及结合型药物在大鼠体内的血浆药动学和排泄特征，为新药开发提供参考依据。方法 采用高效液相色谱-串联质谱法测定生物样品经酶水解前后淫羊藿素浓度。结果 大鼠灌胃给予不同剂量淫羊藿素（20、40和80 mg·kg-1）后，ρ_max和AUC_0-∞与给药剂量呈正相关，生物利用度分别为17.29%、13.80%和10.70%。灌胃给予80 mg·kg-1淫羊藿素后，大鼠血浆中游离淫羊藿素的ρmax和AUC_0-∞分别为13.26 ng·mL-1，495.67 ng·h·mL-1；游离与结合形式总和的药动学参数分别为597.50 ng·mL-1，12 038 ng·h·mL-1。静脉给药20 mg·kg-1后，大鼠血浆中游离淫羊藿素的ρmax和AUC_0-∞分别为5 896 ng·mL-1，2 470 ng·h·mL-1；游离与结合形式总和的药动学参数分别为11 598 ng·mL-1，23 303 ng·h·mL-1。大鼠灌胃给予80 mg·kg-1淫羊藿素72 h后，尿、粪样品中游离淫羊藿素的排泄量分别占给药量的0.04%和25.09%，游离与结合形式总和的排泄量分别占给药量的0.14%和32.46%；大鼠静脉注射给予20 mg·kg-1淫羊藿素72 h后，尿、粪样品中游离淫羊藿素的排泄量分别占给药量的0.58%和8.76%，游离与结合形式总和的排泄量分别占给药量的2.48%和10.82%。结论 淫羊藿素给药后在体内主要以结合形式存在，生物利用度较低，主要通过粪便排泄。     

从补肾生血药对衰老小鼠骨髓GM-CSF基因转录水平的影响探讨肾生髓的分子基础

目的：为探讨肾生髓的分子基础,阐述肾生髓的本质相关基因,我们观察了补肾生血药对衰老小鼠骨髓粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－SF)基因转录水平的影响。方法：采用老年小鼠和D－半乳糖致衰老小鼠两种衰老肾虚动物模型,分别连续灌服补肾生血药2个月和1个月,应用半定量逆转录－聚合酶链式反应技术（RT－PCR）检测小鼠骨髓有核细胞GM－CSF基因转录水平的变化。结果：老年小鼠和D－半乳糖致衰老小鼠骨髓有核细胞GM－CSF基因转录水平明显低于青年小鼠和正常对照小鼠,给药后则可明显得到提高。结论：补肾生血药起到滋阴补肾,益髓生血作用的分子机理之一,是促进骨髓GM－CSF基因的转录。GMCSF是肾生髓的分子基础之一,GM－CSF基因是肾生髓的本质相关基因之一。     

西藏紫金标抗HSV-1的作用及其分子机制的研究

 目的探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)的分子机制,为进一步开发该药提供理论依据。方法采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞,以50%组织细胞感染量(TCID₅₀),细胞病变效应(CPE),蚀斑形成单位(PFU)为评价指标,采用CsCl密度梯度离心,RT-PCR,Western Blot以及扫描电镜和透射电镜为研究手段。结果紫金标无直接灭活HSV-1的作用,也不能影响病毒的释放;但可干扰HSV-1对宿主细胞的吸附,选择性地抑制HSV-1DNA及蛋白质合成,不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-lgD基因mRNA表达。结论紫金标能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附选择性地抑制HSV-1DNA及蛋白质合成,抑制HSV-1gD基因转录。     

阳离子膜融合脂质体包裹DNA体外转染和稳定性研究

 目的研究阳离子膜融合脂质体包裹DNA的体外稳定性以及体外细胞转染。方法采用表达E.coilβ-半乳糖苷酶的pSV40β报告基因质粒及组化染色评价阳离子膜融合脂质体的转染效率。用DNase1考察阳离子膜融合脂质体的体外稳定性。结果当阳离子膜融合脂质体(CFL)及阳离子脂质体(CL)与DNA电荷比为(2∶1)时，CFL的转染效率为(42.3±4.3)%，明显高于CL的转染效率(23.9±2.1)%,且有很较高的稳定性。结论CFL可作为载体有待进一步研究。     

Effects of Ilex paraguariensis A. St. Hil. (yerba mate) on herpes simplex virus types 1 and 2 replication

The antiherpes effects of the crude extract obtained from Ilex paraguariensis leaves (yerba mate) and their purified fractions were investigated. The most active fraction was selected and assayed to determine the viral multiplication steps upon which it acted. In order to detect the major components of this fraction, thin layer chromatography (TLC) analysis was performed. The antiviral activity was evaluated against HSV-1 and HSV-2 by a viral plaque number reduction assay (IC(50) ) and the cytotoxicity by a MTT assay (CC(50) ). According to the obtained results, all tested samples showed antiherpes activity at noncytotoxic concentrations, and the ethyl acetate fraction was the most active (SI = CC(50) /IC(50) = 188.7 and 264.7 for HSV-1 and HSV-2, respectively). The results also demonstrated that this fraction exerts antiviral activity by the reduction of viral infectivity, the inhibition of virus entry into cells and cell-to-cell virus spread, as well as by the impaired levels of ICP27, ICP4, gD and gE proteins of HSV-1. The TLC analysis showed that this fraction contains monodesmosidic triterpenoid saponins, matesaponin-1 (a bidesmosidic one), caffeic and chlorogenic acids and rutin, which suggests that they could act synergistically and be responsible for the detected antiherpes activity.     

针刺足三里对脾虚哮喘大鼠TGF—β和GM-CSF浓度的影响

目的探讨脾虚对哮喘大鼠转化生长因子β（TGF-β）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）浓度的影响及针刺足三里的调节作用。方法采用中医脾虚动物模型和西医哮喘动物模型的复合造模方法，建立大鼠脾虚哮喘病证结合模型，采取针刺足三里的方法进行治疗。采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中TGF-β、GM—CSF的浓度。以脱氧核糖核普酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）进行肺组织细胞凋亡的检测。结果与哮喘组比较，脾虚哮喘组的GM-CSF浓度显著升高（P〈0．01）；与相应的疾病组比较，两针刺组GM—CSF浓度显著降低（P〈0．01），与哮喘纽比较，哮喘针刺组TGF-β浓度显著升高（P〈0．05）。与哮喘组比较，脾虚哮喘纽的嗜酸粒细胞（EOS）计数值显著升高（P〈0．01）；与相应的疾病组比较，两针刺组EOS凋亡率明显升高（P〈0．01）。结论脾虚加重气道炎症反应是通过影响炎症细胞凋亡调控因子的浓度来实现的。针刺足三里具有促进模型大鼠BALF中低水平TGF—β浓度的增高、抑制GM—CSF浓度增高的作用。     

胎盘CYP3A4的表达及其与ICP关系的研究

目的探讨细胞色素P4503A4（CYP3A4）酶在正常晚孕和妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP）胎盘的表达及其与母血和脐血总胆汁酸（total bile acids,TBA）水平的关系,进一步分析胎盘CYP3A4在ICP病理机制中的作用。方法采用实时荧光定量巢式PCR（RT—Nested PCR）法测定胎盘组织中CYP3A4 mRNA的表达量;采用速率法测定母血、脐血中总胆汁酸的水平。结果（1）对照组及ICP组胎盘组织中均有CYP3A4 mRNA的表达,ICP组胎盘组织中CYP3A4 mRNA表达量低干对照组（0．50（1．41）vs1．41（1．57））,差异有统计学意义（P〈0．05）;ICP地塞米松dexamethasone,DEX）治疗组CYP3A4 mRNA表达量高于未用DEX治疗组（0．59（1．27）VS0．21（1.09））,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）对照组及ICP组胎盘组织中CYP3A4 mRNA表达量与母、脐血中TBA水平之间均不具有相关性（n=-0．060～-0．330,P均〉0．05）。结论（1）ICP胎盘CYP3A4 mRNA的表达降低,使胎盘对胆汁酸的解毒作用减弱,这可能与ICP胎儿病理机制有关。（2）DEX是ICP胎盘CYP3A4的诱导剂,这可能是其治疗ICP的机制之一。     

基于网络药理学-分子对接探讨茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症的作用机制＊

目的 利用网络药理学及分子对接技术，研究茵陈蒿汤治疗妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）的物质基础及可能的作用机制。方法 使用TCMSP数据库挖掘茵陈蒿汤有效成分和作用靶点，利用GeneCard与OMIM数据库筛选疾病靶点。将药物与疾病靶点的交集导入String构建PPI网络，使用Cytoscape3.7.2软件筛选核心靶点，借助Metascape数据库对靶点进行基因本体论（GO）功能和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，从筛选靶点-成分网络图中根据degree值筛选出前5个关键成分，并将该网络中的基因靶点以degree值高低进行排序，选择前5个核心靶点，然后从RCSB PDB数据库和Pub Chem数据库获取靶点与成分的三维结构和化学结构，使用Pymol软件对蛋白质分子进行去水、去磷酸根等操作，最后使用AutoDockTools进行分子对接。结果 茵陈蒿汤中共筛选出21种有效活性成分，关键成分5个，分别为槲皮素、山奈酚、芦荟大黄素、谷甾醇、大黄酸；其治疗ICP的的核心靶点14个，分别为JUN、CASP3、TNF、TP53、MYC、EGFR、AKT1、VEGFA、MMP9、MAPK1、EGF、IL6、CXCL8、MAPK8，靶点主要涉及细胞氧化应激反应、细胞运动的正向调节、受体配体活性、细胞因子受体结合、蛋白激酶活性等生物学过程，通过乙型、丙型肝炎途径、癌症途径、MAPK、 IL-17、TNF信号通路等多途径发挥治疗ICP的作用。分子对接结果显示关键成分与对应靶点具有较好的结合活性。结论 茵陈蒿汤治疗ICP是通过槲皮素、山奈酚、芦荟大黄素、谷甾醇、大黄酸等多种成分作用于JUN、CASP3、TNF、TP53、MYC、EGFR、AKT1、VEGFA、MMP9、MAPK1、EGF、IL6、CXCL8、MAPK8等多种基因靶点，从而影响MAPK、 IL-17、肿瘤坏死因子、ErbB、 Toll样受体以及乙型丙型肝炎病毒等多种相关信号通路发挥功效，该研究为进一步深入研究其作用机制奠定了基础。     

DNA条形码等分子鉴定技术与动植物类中药材的鉴定

中药材鉴定是控制中药质量、确保用药安全与效果的首要环节。DNA分子鉴定是从基因层面上进行中药材鉴别的手段,准确率高。DNA分子鉴定包括电泳技术、免疫技术、随机扩增多态性DNA(RAPD)、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)、扩增片段长度多态性(AFLP)、简单重复序列(ISSR)及DNA条形码等,以DNA条形码应用最为广泛。DNA条形码是基因组中相对较短的、可用于物种鉴定的特异性基因片段。植物类中药材的条形码多选用核基因和叶绿体基因DNA片段,如叶绿体psbA-trnH基因、内转录间隔区(ITS)、叶绿体核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶大亚基(rbcL)和RNA转录体Ⅱ型内含子剪切酶基因(matK)等;动物类中药材的条形码多来自核基因和线粒体基因DNA,主要有线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(COⅠ)、核糖体RNA(rRNA)和线粒体细胞色素b基因(CytB)等。综述动植物类中药材DNA分子标记与鉴定技术应用进展,并探讨DNA条形码在药用动植物类中药材鉴定中存在的局限性及发展前景,为中药质量控制提供参考。     

人参多糖对K562细胞人粒-巨噬细胞集落刺激因子和促红细胞生成素及其受体表达的影响

目的研究人参多糖(GPS)对人红白血病细胞株(K562)表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)及其受体的影响。方法采用细胞体外培养技术,RT-PCR检测GPS诱导后K562细胞中GM-CSF、EPOmRNA的表达、免疫细胞化学方法检测K562细胞经GPS作用后GM-CSF、EPO及其受体蛋白表达的变化、Westernblotting检测GPS诱导后K562细胞GM-CSF、EPO受体蛋白的表达。结果经GPS诱导后,RT-PCR检测显示K562细胞GM-CSFmRNA的表达有所增强,但与对照组相比无统计学意义,EPOmRNA的表达有明显的降低;免疫细胞化学方法检测EPO与GM-CSF蛋白的表达明显减弱,EPO与GM-CSF受体蛋白的表达明显增强;Westernblotting检测GM-CSF、EPO受体蛋白的表达增强。结论GPS既能抑制K562细胞分泌GM-CSF、EPO,又能明显促进GM-CSF、EPO受体的合成和分泌。     

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??OBJECTIVE To clone target gene by RT-PCR method, construct VEGF₁₆₅ lentivirus vectors, transfect adipose tissue derived stem cells (ADSCs) and verify the expression of VEGF₁₆₅ in vitro and in vivo. METHODS RT-PCR technology was employed to clone VEGF₁₆₅ gene, and this gene was cloned to lentivirus vector pLVX-EF1??-IRES2-AcGFP1 to construct a lentiviral vector pLVX-EF1??-VEGF₁₆₅-IRES2-AcGFP1. Bacterial colonies PCR and sequencing analysis were used for identification. Then, Lenti-X 293T cells were transfected with main vector pLVX-EF1??-VEGF₁₆₅-IRES2-AcGFP1, packaging plasmid gag-pro, vpr-pol, Tet-Off^TM, tat-IRES-rev and coating plasmid env(VSV-G). Lentiviral vectors were packaged and the titer was determined. ADSCs were isolated by collagenase digestion method, then cultured, and identificated by morphology, immunofluorescence and multi-directional differentiation. ADSCs was transfected with packaged VEGF₁₆₅ lentivirus. Immunofluorescence and ELISA were used to detect the expression of VEGF₁₆₅ in vitro. ADSCs transfected with VEGF₁₆₅ lentivirus were injected into nude mice. ELISA was used to detect the expression of VEGF₁₆₅. RESULTS The VEGF₁₆₅ gene fragment was cloned successfully, and the lentiviral vector plasmid pLVX-EF1??-HVEGF₁₆₅-IRES2-AcGFP1 was confirmed to contain VEGF₁₆₅ gene fragment as shown by bacterial colonies PCR. DNA sequencing analysis confirmed that VEGF₁₆₅ gene sequencing was exactly the same with that reported by Genbank. After transfection, a large number of Lenti-X 293T cells with green fluorescence were observed by fluorescent microscopy. The concentration of the virus titer was 1??10⁸ TU??mL^-1. ADSCs were identified by morphology, immunofluorescence and multi-directional differentiation methods, in line with the literature reported ADSCs characteristics. There were about 90% of ADSCs which could express VEGF₁₆₅ after being transfected with the viruses by immunofluorescence detection, also, VEGF₁₆₅ protein was proved by ELISA to express stably and efficiently in vitro and in vivo. CONCLUSION Lentiviral vectors expressing VEGF₁₆₅ are successfully constructed by cloning target gene with RT-PCR method. After transfection, ADSCs expressing VEGF165 protein stably in vitro and in vivo can be obtained.