溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠肠道NLRP3炎性体的调控研究

目的:观察三硝基苯磺酸(TNBS)溃疡性结肠炎大鼠病理形态、结肠黏膜NLRP3炎性体蛋白表达、mRNA及其相关因子IL-18、IL-33的表达,从而揭示其可能的作用机制。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)复制溃疡性结肠炎模型,60只大鼠随机分为6组,即正常组,模型组,柳氮磺砒啶(SASP)阳性对照组,溃结灵高、中、低剂量组。连续治疗10天后,采集粘膜样本。观察大鼠病理形态学变化,采用蛋白质印迹法和荧光定量PCR检测大鼠结肠组织NLRP3、ASC、caspase-1蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测大鼠结肠粘膜中IL-18、IL-33的含量。结果:模型组大鼠出现不同程度的体重减轻、结肠缩短和结肠质量增加,病理结果显示固有层崩解,出血、溃疡形成,毛细血管扩张、充血,肌层及外膜内大量急慢性炎症细胞浸润。溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)低(4.6g/kg)剂量组和柳氮磺砒啶组(0.5 g/kg)上述情况较模型组明显减轻。与正常组比较,模型组NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白和mRNA表达显著增高;与模型组比较溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)低(4.6 g/kg)剂量组、柳氮磺砒啶组(0.5 g/kg)NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达均显著减少,溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)剂量组NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白表达均显著减少,溃结灵低(4.6 g/kg)剂量组NLRP3、caspase-1、ASC的蛋白表达有下降趋势但无统计学意义;与正常组比较,模型组IL-18、IL-33的表达水平明显升高,溃结灵高(18.3 g/kg)中(9.2g/kg)低(4.6 g/kg)剂量组和柳氮磺砒啶组(0.5 g/kg)IL-18、IL-33的含量明显低于模型组。结论:溃结灵治疗UC的作用机制可能与抑制NLRP3炎性体各组分蛋白和mRNA表达的表达,并下调结肠黏膜IL18、IL33的含量,使得炎症缓解从而发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。     

溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜炎症因子及肠屏障功能相关蛋白的影响

目的:探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜炎症因子及肠屏障功能的影响。方法:建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.45g/kg)、溃结康组(12.8g/kg、6.4g/kg、3.2g/kg)。造模7天内,每天观察UC小鼠体质量及疾病活动指数变化,第8天实验结束时,采集结肠组织,量取各组小鼠结肠长度,HE染色观察小鼠结肠病理变化,酶联免疫法检测结肠组织IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量变化,实时荧光定量PCR检测结肠ITF、NF-κB、Occludin、Claudin 1mRNA表达,Western-blot法检测结肠ITF、NF-κB、Occludin、Claudin 1蛋白表达。结果:模型组小鼠体质量较正常对照明显减轻,疾病活动指数显著升高,结肠长度明显缩短,结肠组织损伤明显,病理学评分显著增加,结肠IL-1β、TNF-α含量显著增加,IL-4、IL-10含量显著降低,NF-κBmRNA及蛋白表达均明显增加,而ITF、Occludin、Claudin 1mRNA及蛋白表达均显著降低;溃结康组(12.8g/kg、6.4g/kg)及柳氮磺胺吡啶组(0.5g/kg)小鼠体质量及结肠长度较模型组增加,疾病活动指数降低,结肠病理损伤较模型组减轻,病理学评分降低,TNF-α含量显著降低,NF-κB mRNA及蛋白表达明显减少,而occludin mRNA水平明显增加;溃结康组(12.8g/kg)还可明显增加IL-4含量,上调ITF mRNA、蛋白及occludin蛋白表达,溃结康组(6.4g/kg)可降低IL-1β含量,增加IL-10含量,上调ITF mRNA水平。溃结康组(3.2g/kg)除可上调ITF mRNA水平外,对各指标均无明显影响。结论:溃结康可能通过降低结肠组织致炎因子含量、增加抑炎因子含量,同时促进肠粘膜修复,保护肠粘膜屏障功能而治疗溃疡性结肠炎。     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

白头翁汤激活NLRP3炎症小体治疗炎症性肠病的研究

目的:探讨白头翁汤治疗炎症性肠病(IBD)的分子机制。方法:84只BALB/c小鼠随机分为7组(n=12):乙醇对照组、模型组、SASP组、白头翁汤组(低、中和高剂量组)和zVAD组。各组分别灌胃和腹腔给药。疗程结束后取小鼠结肠组织分别利用荧光定量RT-PCR、Elisa和免疫组化等方法检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18和IL-1β在结肠组织中的表达量。结果:与模型组比较,SASP组和中、高剂量白头翁汤对IBD有显著的治疗作用(P0.01),但这种治疗作用在zVAD组被抑制(P0.05)。同时,中、高剂量白头翁汤能够升高NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18和IL-1β在结肠组织的表达(P0.05),而zVAD能抑制这种上调(P0.05)。结论:白头翁汤可能通过激活NLRP3炎症小体进而促进相应的炎症因子包括IL-18及IL-1β的生成来发挥治疗IBD的作用。     

白芍七物颗粒对NLRP3炎症体介导溃疡性结肠炎调控研究

目的探讨白芍七物颗粒对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用及作用机制。方法将SD雄性SPF级大鼠105只,随机分成正常组,模型组,阳性对照组,白芍七物颗粒低、中、高剂量组,半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)阻滞剂组,每组15只。除正常组外,其余各组大鼠均给予2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-25%乙醇0.25mL混合液灌肠建立UC模型,正常组大鼠给予等量生理盐水灌肠。确定造模成功后第2天开始给予灌胃治疗,阳性对照组给予美沙拉嗪溶液剂灌胃、白芍七物颗粒低、中、高剂量组分别给予相应剂量的白芍七物颗粒灌胃,Caspase-1阻滞剂组给予VX-765溶液剂灌胃,连续治疗14d,正常组、模型组不予处理。观察大鼠精神状态及死亡情况,计算大鼠的疾病活动指数(DAI),采集结肠组织,计算结肠黏膜损伤指数(CMDI),荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠结肠组织NOD样受体蛋白3(NLR family,pyrin domain containing 3,NLRP3)、接头蛋白ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD)、 Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA表达,蛋白印迹法(Western blot)法检测大鼠结肠组织NLRP3、ASC、Caspase-1相关蛋白表达,采取腹主动脉血,ELISA法检测血清IL-1β、IL-18表达量。结果除正常组外,其他各组造模后均有明显的溃疡性结肠炎临床症状和病理学改变(P0.05);模型组、阳性对照组、白芍七物颗粒低、中、高剂量组、caspase-1阻滞剂组结肠组织中NLRP3 mRNA、ASC mRNA、 Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量及血清中IL-1β、IL-18表达量高于正常组(P0.05);白芍七物颗粒低、中、高剂量组、阳性对照组结肠组织中NLRP3 mRNA、ASC mRNA、 Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量及血清中IL-1β、IL-18表达量均明显低于模型组(P0.01),与白芍七物颗粒中剂量组相比,阳性对照组、白芍七物颗粒低、高剂量组结肠组织中NLRP3 mRNA、ASC mRNA、 Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量及血清中IL-1β、IL-18表达量较高(P0.05),Caspase-1阻滞剂组与之相比无明显差异(P0.05)。结论美沙拉嗪、白芍七物颗粒、VX-765溶液剂均对UC有治疗作用,其中以中剂量白芍七物颗粒、VX-765溶液剂治疗效果最佳,两者无明显差异(P0.05),其治疗作用与降低结肠组织中降低结肠组织NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、ASC mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量、血清中IL-1β、IL-18表达量有关。     

芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体表达的影响

目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及IL-1β的影响。方法:试验分为空白对照组、模型组和芩百清肺浓缩丸含药血清组。常规培养RAW264.7细胞、肺炎支原体菌株,制备芩百清肺浓缩丸含药血清,用10 MOI MP感染RAW264.7细胞,分别于8、16、24 h收集细胞。FQ-PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达;Western-blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β含量。结果:与空白对照组比较,MP感染RAW264.7细胞后8、16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后24 h细胞上清液IL-1β含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸含药血清可显著下调MP感染RAW264.7细胞16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达(P0.05或P0.01);显著降低感染后24 h NLRP3、ASC、Caspase-1p20蛋白表达和细胞上清液IL-1β的分泌(P0.05或P0.01)。结论:芩百清肺浓缩丸抗肺炎支原体作用的机制可能与下调NLRP3炎性体表达有关。     

隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NLRP3炎症小体及IL-1?调节作用的实验研究

目的通过观察隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、Caspase-1)及下游炎症因子IL-1?表达的影响,探讨隔药灸治疗克罗恩病的抗炎机制。方法将清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和假灸组4组。采用三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid, TNBS)与乙醇混合溶液灌肠制备大鼠克罗恩病模型。造模成功后,隔药灸组取天枢(双)、气海穴进行隔药饼灸治疗;假灸组取穴、操作同隔药灸组,但不点燃艾炷。治疗结束后,记录各组大鼠结肠长度及CMDI评分;采用HE染色,光学显微镜下观察各组大鼠结肠组织形态结构,并应用免疫组织化学技术检测各组大鼠结肠NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1?的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠组织损伤严重,表现为裂隙样溃疡,炎症细胞浸润伴水肿,部分大鼠结肠黏膜可见肉芽组织形成,且结肠NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1?蛋白表达显著增加(均P0.05);与模型组比较,隔药灸组大鼠结肠损伤有所修复,炎症反应减轻,结肠NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1?蛋白表达显著降低(均P0.05);假灸组大鼠结肠损伤程度、炎症反应与模型组类似,两组结肠NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1?表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1?的蛋白表达,促进结肠炎性损伤的修复。     

芦丁对溃疡性结肠炎小鼠的干预作用及NLRP3炎症小体的影响

目的观察芦丁对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的干预作用。探讨其对NLRP3炎症小体信号分子活化的影响。方法将60只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只。除空白组外,其余组均采用葡聚糖硫酸钠诱导建立溃疡性结肠炎模型,美沙拉嗪组同时给予美沙拉嗪缓释颗粒灌胃,芦丁高、中、低剂量组分别给予100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)芦丁溶液灌胃,空白组、模型组以等体积l%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,均连续5 d。灌胃结束后,比较各组疾病活动度(DAI)评分、组织学评分,采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清和结肠组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,采用qRT-PCR法检测结肠组织中NLRP3、IL-1βmRNA表达量,采用Western blot法检测结肠组织中NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分、组织学评分,血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,芦丁高、中剂量组和美沙拉嗪组上述指标均明显降低(P均<0.05),且芦丁高剂量组血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显低于美沙拉嗪组(P均<0.05)。结论芦丁可明显改善溃疡性结肠炎小鼠临床症状,抑制黏膜炎症损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化有关。     

金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响

目的观察金刚藤颗粒对急性盆腔炎(APID)模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法将雌性SD大鼠105只随机分为假手术组、模型组及金刚藤颗粒低、中、高剂量组,每组均15只,灌胃治疗15 d后,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织的病理形态;实时定量PCR及Western blotting分别检测NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 HE染色显示,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞脱落坏死,腔壁结构紊乱,全层炎性细胞浸润,有充血水肿;与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组症状较模型组有显著改善;与对照组、假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-18水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组IL-1β、IL-18水平显著降低(P 0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著降低(P 0.05);模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平显著高于假手术组(P 0.05),金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Cas-pase-1蛋白表达水平较模型组显著降低(P 0.05)。结论金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠具有显著治疗作用,其可能通过抑制NLRP3炎症小体通路发挥免疫作用。     

基于NLRP3炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg·kg-1),每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P0.01)。结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

针刺对宫内窘迫导致的缺氧缺血脑损伤大鼠海马炎性反应的影响

目的:观察针刺对宫内窘迫缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠的行为学、血清炎性细胞因子、海马组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体相关蛋白及小胶质细胞激活状态的影响,探讨针刺通过调控海马炎性反应干预HIBD的机制。方法:夹闭孕鼠子宫动脉10 min延迟剖宫产法建立HIBD大鼠模型。将HIBD大鼠随机分为模型组和针刺组,每组12只,以正常分娩的12只大鼠为正常组。针刺大鼠"本神",每次10 min,每日1次,连续14 d。采用HE染色法观察大鼠海马组织病理变化,三箱社交实验观察大鼠的社交能力,用ELISA法检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,用Western blot法检测大鼠海马组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白相对表达量,用免疫荧光染色法检测海马组织小胶质细胞阳性标记物离子钙接头蛋白(IBA-1)的阳性表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马神经元排列松散,出现细胞固化萎缩和整个细胞深染的现象,模型组大鼠探索陌生鼠时间明显减少(P<0.01),血清IL-1β、IL-18含量升高(P<0.01,P<0.05),海马NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量升高(P<0.05,P<0.01),海马CA1、CA3区IBA-1阳性表达增多(P<0.001,P<0.01);针刺组大鼠海马神经元结构较模型组有所改善,出现细胞固化、萎缩、深染的情况较少,与模型组比较,针刺组大鼠探索陌生鼠时间增加(P<0.01),血清IL-1β、IL-18含量降低(P<0.01,P<0.05),海马NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量降低(P<0.01),海马CA1、CA3区IBA-1阳性表达减少(P<0.01)。结论:针刺可有效改善宫内窘迫HIBD大鼠社交行为障碍,其机制可能与降低海马炎性反应蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达,减少海马小胶质细胞激活,降低血清IL-1β、IL-18含量,从而减轻炎性反应有关。     

艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠Ubiquitin及NLRP3蛋白的调节作用

目的:观察艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠炎症和泛素(ubiquitin)、核苷酸结合寡聚化结构域(Nod)样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达的影响,探讨艾灸治疗UC的抗炎机制。方法:清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常组、模型组、艾条灸组和西药组。采用自由饮用35g/L葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液制备大鼠UC模型。艾条灸组取双侧天枢穴,给予温和灸治疗;西药组给予美沙拉嗪溶液灌胃治疗。正常组和模型组不进行任何治疗,只做与艾条灸组相同的抓取和固定。治疗结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察结肠组织病理损伤并评分;采用免疫荧光法测定结肠ubiquitin蛋白的表达;运用兔疫组织化学法检测结肠白细胞介素(IL)-1β和NLRP3蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织损伤严重,病理评分明显升高(P<0.01),结肠ubiquitin、NLRP3及IL-1β蛋白表达均显著增强(均P<0.01)。与模型组比较,艾条灸组及西药组大鼠结肠损伤有所修复,炎症反应减轻,病理评分均降低(均P<0.01);ubiquitin、NLRP3及IL-1β蛋白的表达减少(均P<0.01)。相关分析显示,结肠组织ubiquitin蛋白与结肠病理评分、NLRP3蛋白的表达之间存在相关性(r=0.677,P<0.01;r=0.536,P<0.05).结论:艾灸能下调UC大鼠结肠ubiquitin、NLRP3和IL-IP蛋白的表达,该作用可能是其促进结肠炎性损伤修复、发挥抗炎作用的机制之一。     

消肿喷剂主药对体外炎症模型小鼠白细胞介素及NLRP3相关蛋白表达影响的研究

目的:研究消肿喷剂促进急性骨骼肌损伤炎症修复的作用机制,及炎症在急性骨骼肌损伤修复过程中的作用机制.方法:采用脂多糖(LPS)诱导C2C12小鼠成肌细胞,建立体外细胞炎性模型,ELISA试剂盒检测C2C12细胞上清中白细胞介素(IL-1β、IL-18)含量,qRT-PCR检测C2C12细胞ASC、Caspase-1、N...     

云母对大鼠溃疡性结肠炎的肠黏膜保护作用

目的:探讨云母对大鼠溃疡性结肠炎的药效和肠黏膜保护作用机制。方法:用7%醋酸2 mL灌肠制作大鼠溃疡性结肠炎模型。将实验大鼠随机分为生理盐水对照组,高、中和低剂量云母治疗组和SASP治疗组,灌肠给药1周。剖腹暴露全结肠,肉眼观察肠黏膜的病变并按损伤程度积分,切片HE染色镜下评价黏膜损伤指数。取病变肠组织测定髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:大体形态学观察可见溃疡性结肠模型大鼠近端结肠有多发或者>1 cm的溃疡,周围黏膜重度糜烂、充血和水肿;各剂量云母治疗组大鼠结肠黏膜无明显溃疡形成,仅有黏膜轻度糜烂、充血和水肿;SASP组大鼠黏膜面有小溃疡(<1 cm)存在,周围黏膜明显糜烂、充血和水肿。各剂量组云母治疗后大鼠肠黏膜大体病变积分较生理盐水组明显降低(P<0.01)。模型组大鼠结肠黏膜发生溃疡和坏死,炎症累及肠壁全层,大量中性粒细胞浸润,结肠黏膜毛细血管扩张、充血水肿,腺体囊状扩张。云母治疗组结肠黏膜无明显溃疡形成,黏膜下方肉芽组织形成,黏膜充血和炎症细胞浸润减少。SASP治疗组大鼠结肠黏膜充血,黏膜表面缺损坏死,中性粒细胞达黏膜下层。各剂量云母和SASP组病理损害级别较生理盐水组显著下降(P<0.05)。模型组大鼠结肠黏膜MPO水平较正常组明显增高(P<0.001)。各云母治疗组和SASP组MPO水平均较生理盐水组明显降低(P<0.01)。结论:云母可以减轻大鼠溃疡结肠炎肠黏膜损害和炎症指数,降低结肠组织MPO活性,具有肠黏膜保护作用。     

金钗石斛多糖调控炎性小体NLRP3对非酒精性脂肪肝大鼠的保护作用

目的:研究金钗石斛多糖对NAFLD大鼠的干预作用,并从NLRP3信号通路分析作用机制。方法:将72只SD大鼠分为正常、模型、金钗石斛多糖高、中、低剂量和多烯磷脂酰胆碱干预组,除正常组外,NAFLD模型构建成功治疗4周后处死,取出肝脏检测肝脏病理学和NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达,收集血液检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量。结果:正常组肝小叶清晰,细胞核分布均匀,模型组有明显脂肪空泡和炎症反应浸润,金钗石斛多糖与多烯磷脂酰胆碱组明显改善;与正常组比较,模型组AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA均升高(P<0.05),与模型组比较,金钗石斛多糖组和多烯磷脂酰胆碱组上述指标均降低(P<0.05),此外金钗石斛多糖组与多烯磷脂酰胆碱组AST、ALT和HDL-C没有差异,高剂量组TG、TC和LDL-C低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05),中和高剂量组IL-1β、IL-18、Caspase-1和NLRP3蛋白及mRNA明显低于多烯磷脂酰胆碱组(P<0.05)。结论:金钗石斛多糖可明显改善高脂高糖饮食诱导的NAFLD大鼠肝功能和血脂,这与其可调节炎性小体NLRP3,进而降低炎症反应有关。     

基于NALP3炎性体的痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠抗炎作用量效和时效研究

目的观察痛风宁对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NALP3炎性体及相关炎症因子的影响,探讨其抗炎作用的量效与时效关系。方法将240只SD大鼠随机分为造模组200只和正常组40只。右后踝关节腔内注射尿酸盐混悬液制作大鼠AGA模型,成模大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及痛风宁低、中、高剂量组,每组40只。正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,其余组大鼠给予相应药物灌胃干预。首次干预后6、12、24、48 h各组随机取10只大鼠处死,收集右后踝关节液与滑膜组织,采用ELISA、Western blot和RT-qPCR分别检测白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,痛风宁中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与秋水仙碱组比较,痛风宁中、高剂量组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达无明显差异(P>0.05),痛风宁低剂量组大鼠明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论中剂量痛风宁在下调模型大鼠NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达及降低IL-1β、PGE2含量方面作用相对较佳,且首次干预后48 h抗炎作用相对明显。     

扶正解毒化瘀方对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞的调控作用

目的:观察扶正解毒化瘀方对脂多糖诱导的大鼠肺巨噬细胞中NLRP3炎性体通路及相关炎性反应递质的作用。方法:将大鼠NR8383细胞分为空白组、模型组、扶正解毒化瘀方组、哌拉西林他唑巴坦(TZP)组以及中药+TZP组。用制备扶正解毒化瘀方中药原液作用于脂多糖诱导的大鼠NR8383细胞,采用qPCR和Western blotting分别检测NLRP3炎性体通路的mRNA表达和蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干预前后炎性反应递质的水平。结果:扶正解毒化瘀方组和TZP组均能明显降低NLRP3、Caspase-1和ASC的mRNA表达,2组NLRP3和ASC的蛋白水平明显下降,Caspase-1和IL-1β蛋白水平也有下降趋势。扶正解毒化瘀方组和TZP组均能明显降低IL-18和IL-1β炎性反应递质水平,联合用药有增效作用。结论:扶正解毒化瘀方对NLRP3炎性体作用明确,可能通过NLRP3炎性体通路延缓机体免疫炎性损伤。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡型结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素(IL)-13,IL-23及环氧合酶-2(COX-2),c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响,探究其对溃疡性结肠炎作用机制。方法:将48只SPF级Wistar大鼠随机分为6组,分别是空白组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和美沙拉秦组,每组8只,雌雄各半。除空白组,其余各组采用病证结合法复制脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型,即饮食、环境干预等措施联合2,4-二硝基苯磺酸灌肠。造模成功后,参苓白术散高、中、低剂量组分别按照24,12,6 g·kg-1·d-1,美沙拉秦组0.2 g·kg-1·d-1进行灌胃。连续灌胃21 d后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织IL-13,IL-23含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测结肠组织IL-13,IL-23,COX-2,CREB mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织COX-2,CREB蛋白表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达水平明显降低(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA升高(P0.05),COX-2,CREB mRNA及蛋白相对表达量升高(P0.05)。与模型组比较,参苓白术散(高、中、低剂量)组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达均升高,尤以参苓白术散高剂量组最显著(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA降低(P0.05),COX-2,CREB mRNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论:参苓白术散可能调节脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB的表达,减少结肠的炎症反应。     

蠲痹历节清方抑制NLRP3炎症体抗大鼠急性痛风性关节炎机制研究

目的 观察蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NLRP3炎症体相关蛋白及白介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨蠲痹历节清方防治AGA大鼠可能存在的机制.方法 将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组,造模组造模成功后随机分成模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组、异甘草素组,并予相应药物干预,模型组及...