HPLC法测定藏药材铁棒锤、榜嘎中双酯型生物碱的含量

目的:建立HPLC法测定西藏不同产地的铁棒锤、榜嘎中双酯型生物碱的含量方法.方法:色谱柱:AichromTMC18(4.6mmx150mm,5μm);柱温:35℃;流动相:甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氢钾-醋酸-异丙醇(67:173:4:4);检测波长:230nm;流速:1.0mL·min-1.结果:乌头碱在0.09632～0.4816μg(r=0.9998)范围内呈线性.乌头碱加样回收率为96.3%,RSD为1.87%(n=6).结论:方法可控,结果稳定,为乌头类药材含量测定提供一个参考方法.     

HPLC测定五味麝香丸中乌头类生物碱的含量

目的:建立高效液相色谱同步测定五味麝香丸中主要毒性成分乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量。方法:色谱柱:Thermo Hypersil GOLD C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水-氯仿-三乙胺(100∶50∶3∶0.10);流速:1 mL·min-1;检测波长:235 nm;柱温:30℃。结果:乌头碱在3.28～82.0μg·mL-1(r=0.9998)、次乌头碱在3.2～80.0μg·mL-1(r=0.9998)和新乌头碱在3.2～80.0μg·mL-1(r=0.9998)浓度范围内呈良好的线性关系。乌头碱、次乌头碱和新乌头碱回收率分别为99.2%(RSD=0.58%)、101.1%(RSD=0.89%)和99.6%(RSD=0.35%)。结果本实验建立的方法简便可靠、专属灵敏,可用于五味麝香丸的质量控制。     

HPLC测定乌头汤提取物中3种乌头类生物碱的含量

目的:采用高效液相色谱法测定乌头汤中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱含量,为处方质量控制提供依据。方法:色谱柱:Thermo Hypersil GOLD C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水-氯仿-三乙胺(100:50:3:0.12);流速:1ml·min-1;检测波长:235nm;柱温:30℃。结果:乌头碱、次乌头碱和新乌头碱分别在2.65～132.5μg/ml(r=0.9998)、2.55～127.5μg/ml(r=0.9997)和2.65～132.5μg/ml(r=0.9997)范围内呈良好的线性关系,回收率均在98.84%以上。结果:建立的方法简便可靠、专属灵敏,可用于乌头汤质量控制。     

栽培与野生藏药铁棒锤中活性成分乌头碱的HPLC分析

目的:对3个不同产地栽培与野生铁棒锤中乌头碱活性成分进行分析,对其做出客观评价.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),使用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-0.2%二乙胺水溶液(35:65);柱温30℃;流速0.8mL·min-1;检测波长240nm结果:乌头碱在0.39～1.95μg与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为98.35%,RSD1.5%(n=6);甘肃产铁棒锤药材中乌头碱的质量分数为0.3244%;宁夏产铁棒锤药材中乌头碱为0.2144%;青海产铁棒锤药材中乌头碱为0.1397%.结论:3个不同产地铁棒锤中乌头碱含量差异较大,甘肃栽培铁棒锤中乌头碱含量最高,宁夏野生铁棒锤次之,青海野生铁棒锤含量较低.     

HPLC法测定草乌芽中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量

目的:建立测定草乌芽中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。应用INSTRU LLC Plus C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-0.3 mol/m L三乙胺(65:35)为流动相;流速为0.8 m L·min-1;检测波长为235 nm;柱温为40℃。结果:新乌头碱在0.3515~2.1090μg(r=0.9998),乌头碱在0.1500~0.9000μg(r=0.9995),次乌头碱在0.0705~0.4230μg(r=0.9997)范围内,与峰面积具有良好的线性关系;平均回收率为98.80%,97.84%,99.63%,RSD为1.54%,1.15%,1.60%(n=6)。结论:该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于草乌芽中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量测定。     

RP-HPLC同时测定四逆汤中3种双酯型乌头碱的含量

目的:建立RP-HPLC同时测定四逆汤中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱3种成分的含量。方法:采用ThermoHypersil BDS(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相甲醇-0.2%三乙胺水溶液(冰乙酸调pH 5.2)(46∶54),流速1 mL·min-1,检测波长235 nm,柱温25℃。结果:在35 min内乌头碱、次乌头碱和新乌头碱分别达到良好分离;依次在0.875～28 mg·L-1(r=0.999 8),1.125～36 mg·L-1(r=0.999 9)和0.812～26 mg·L-1(r=0.999 8)呈良好的线性关系;3种成分的加样回收率分别为94.9%,100.2%,99.9%。结论:方法简单可行,适用于四逆汤中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱3种双酯型乌头碱成分的同时含量测定。     

UPLC同时测定铁棒锤中6种酯型生物碱类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱法同时测定铁棒锤药材中苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱6种生物碱类成分的含量测定方法。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);乙腈-0.2%冰醋酸水溶液(三乙胺调节PH=6.2)梯度洗脱为流动相;流速0.4mL·min-1;柱温为35℃;检测波长235nm。结果:6种单酯型和双酯型生物碱的线性范围、相关系数良好(r=0.999 4～0.999 9),加样回收率试验的RSD均小于2.0%。结论:该方法简便、快捷、灵敏度高,可用于铁棒锤药材的质量控制。     

痹通药酒中新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的含量

目的:建立痹通药酒中新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的HPLC含量测定方法。方法:Agela Promosil-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,柱温35℃,流动相乙腈-四氢呋喃(25∶15)为流动相A,以0.1 moL.L-1醋酸铵溶液(每1 000 mL加冰醋酸0.5 mL)为B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长235 nm。结果:新乌头碱在0.118 9～0.990 9μg呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率98.07%,RSD1.7%;次乌头碱在0.074 5～0.621 0μg呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率99.08%,RSD1.5%;乌头碱在0.009 4～0.078 3μg呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率98.32%,RSD 2.0%。结论:本方法稳定易行、重复性好,可用于痹通药酒质量评价。     

HPLC法同时测定乌头属不同药材4种生物碱的含量

目的:HPLC法同时测定乌头属药材附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿中乌头碱(AC)、次乌头碱(HA)、新乌头碱(MA)、苯甲酰新乌头原碱(BMC)的含量。方法:色谱柱:Phenomenex-ODS(250 mm×4.0 mm,5μm);流动相:乙腈-四氢呋喃(25∶15),梯度洗脱,流速:1.0 mL/min;检测波长:235 nm;柱温:30℃。结果:4种乌头类生物碱的线性范围分别为:0.0241～0.5211μg(r1=0.9995)、0.0168～0.3152μg(r2=0.9994)、0.0107～0.2674μg(r3=0.9994)、0.0122～0.2503μg(r4=0.9996);4种药材中4种生物碱的加样回收率范围分别为:附子:95.56～98.63%、川乌:98.83～100.47%、草乌:95.91～99.30%、雪上一枝蒿:95.99%～98.53%,RSD%≤4.0%。结论:乌头属4种药材4种生物碱含量差异较大,为临床疾病治疗防止中毒反应的发生提供了一定的参考依据。     

甘肃不同地域伏毛铁棒锤中乌头碱及3-乙酰乌头碱的含量分析

目的:分析甘肃不同地域伏毛铁棒锤中乌头碱及3-乙酰乌头碱的含量差异。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Gemini-Nx-C_(18)柱(5μm,4.6 mm×250m m),以乙腈:0.2%碳酸氢铵溶液(55:45)为流动相,流速为1.0 m L/min,检测波长230 nm,柱温:30℃进行检测。结果:乌头碱线性范围为:19.20~57.55μg/m L,平均加样回收率为101.30%,(RSD=2.34%);3-乙酰乌头碱线性范围为:4.8~50μg/m L,平均加样回收率为100.67%(RSD=0.77%)。结论:该法快速、简便,结果准确、可靠,可用于伏毛铁棒锤中乌头碱及3-乙酰乌头碱的含量测定及差异分析。     

近红外光谱测定桂附止痛凝胶膏单酯型乌头碱的含量

目的:采用近红外光谱(NIR)测定桂附止痛凝胶膏(GZC)中单酯型乌头碱(AMA)的含量。方法:测定53批次桂附止痛凝胶膏的NIR图,运用TQ Analyst 8.0软件,运用原始光谱,在10 000~4 000 cm-1,选择1个主因子数,采用偏最小二乘法(PLS)建立桂附止痛凝胶膏中单酯型乌头碱含量NIR定量模型。结果:所建模型相关系数r=0.942 0;校正均方根偏差(RMSEC)0.013 5;交叉验证均方根偏差(RMSECV)0.014 4;验证集平均预测回收率为101.44%。结论:本试验所建立的模型性能较好,对桂附止痛凝胶膏中单酯型乌头碱含量的预测准确,可以应用于桂附止痛凝胶膏中单酯型乌头碱的质量控制。     

RP-HPLC同时测定苦黄注射液中4种大黄蒽醌类成分含量

目的 :建立同时测定苦黄注射液中大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚 4种大黄蒽醌类成分含量的反相高效液相色谱分析方法。方法 :采用汉邦LichrospherC₁₈柱 ,流动相组成为A :1%醋酸水溶液 ,B :含 1%醋酸的80%乙腈水溶液 ,梯度洗脱 ,流速 0.8mL·min^-1,柱温 35℃ ,检测波长 254nm ,以外标法定量。结果 :苦黄注射液中 4种蒽醌类成分的平均加样回收率分别为大黄酸 98.9%、大黄素 100.5 %、大黄酚 102.5 %和大黄素甲醚 99.0 % ,线性范围分别为大黄酸 0.0875～175 μg ,大黄素 0.0825～165μg ,大黄酚 0.15 9～ 3.17μg和大黄素甲醚 0.0525～1.05μg。 结论 :本法准确可靠 ,重现性好 ,结果稳定 ,适合于苦黄注射液中这 4种蒽醌含量的分析。     

基于系统药理学探讨乌头生物碱治疗类风湿性关节炎的分子机制

目的:基于系统药理学探讨乌头生物碱中化学成分对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及其机制。方法:TCMSP数据库结合口服生物利用度(OB)≥30%,类药性(DL)≥0.18搜集草乌化学成分,通过Pubchem数据库以及Swiss Target Prediction数据库预测各化学成分的潜在作用靶点;从GeneCards数据库搜集类风湿性关节炎(RA)靶点,两者取交集,DAVID数据库进行基因本体(GO)分类富集分析和Pathway富集分析。Cytoscape构建"化学成分-潜在作用靶点-信号通路-疾病"网络拓扑图;结合STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。体外实验通过LPS刺激RAW264.7巨噬细胞,建立体外巨噬细胞炎症模型,采用蛋白免疫印迹法检测乌头生物碱中化学成分对LPS诱导的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α),环氧化酶(COX-2)蛋白表达的影响以及对JAK激酶(Janus kinase),核转录因子-κB(NF-κB)信号通路主要蛋白表达的影响。结果:通过TCMSP数据库检索以及查阅文献共得到27个化学成分,经筛选后(OB≥30%,DL≥0.18)得到12个化学成分,通过数据库预测并筛选后得到177个潜在作用靶点,与4 329个RA靶点取交集后得到97个靶点作为治疗RA的潜在作用靶点。通过DAVID数据库富集到生物过程(BP)经筛选后共32条(P<0.01,FDR<0.01);所处细胞中的位置(CC)经筛选后共有5个位置(P<0.01,FDR<0.01);分子功能(MF)经筛选后得到12种分子功能(P<0.01,FDR<0.01)。通过构建网络拓扑图说明乌头生物碱在治疗RA时不同的化学成分可作用于相同靶点,同一化学成分也作用于不同的靶点;乌头生物碱既可通过不同靶点与同一通路相连接,也可通过同一靶点与不同通路相连接,说明不同的靶点具有协同作用,充分体现了乌头生物碱多成分、多靶点、多通路的复杂机制。加入不同浓度的LPS刺激(质量浓度为0~200μg·L-1)能够显著上调RAW264.7巨噬细胞COX-2蛋白表达水平(P<0.05),说明炎症模型成功。与正常组比较,RAW264.7细胞炎症模型中TNF-α,COX-2蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,BLA,songorine,yunaconitine,karacoline各组TNF-α,COX-2蛋白表达水平不同程度降低(P<0.05)。与正常组比较,RAW264.7细胞炎症模型中白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK-4),NF-κB,JAK1,信号转导与转录激活因子3(STAT3)水平显著增加(P<0.05);与模型组比较,BLA,songorine,yunaconitine,karacoline各组IRAK4,NF-κB,JAK1,STAT3水平显著降低(P<0.05)。结论:基于系统药理学和体外实验对相关靶点和信号通路进行分析,为了解RA的发病机制,揭示乌头生物碱治疗RA的分子机制提供新见解,也为蒙药在现代医学中的应用提供新思路。     

HPLC测定半夏泻心汤中盐酸小檗碱的含量

建立一种HPLC测定半夏泻心汤中盐酸小檗碱含量的方法。用水∶乙腈 (1∶1) 10 0 0ml加入KH2 PO4,3 4克为流动相 ,检测波长 345nm ,平均回收率为 10 0 6 % (RDS - 0 84 %n - 5 )。结论 :该方法简便、快捷、准确     

RP-HPLC同时测定马钱子散中士的宁和马钱子碱的含量

 目的：建立马钱子散中士的宁和马钱子碱的反相高效液相色谱分析法。方法：色谱柱μ Bondapak C₁₈(10μm,4mm×300mm)；流动相为甲醇－水－乙酸-三乙胺(70∶230∶2.4∶0.3)；流速1.2ml·min^-1；检测波长254nm。结果：士的宁线性范围0.03672μg～0.0612μg，回收率x₁=100.36%，RSD₁=1.09%；马钱子碱线性范围0.9450μg-0.1575μg，回收率x₂=100.01,RSD₂=1.46%?结论：该分析法为一种灵敏、准确和简便的分析法。     

HPLC测定急性子中总黄酮的含量

目的:建立HPLC测定急性子中总黄酮含量的方法.方法:采用Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相甲醇-0.4％磷酸水(55∶45),检测波长365 nm,柱温30℃,流速1.0 mL· min-1.结果:槲皮素、山柰酚、异鼠李素的线性范围分别为0.111 2～0.5560(r=0.9994),0.007 711 ～0.023 23(r =0.999 4),0.006 69～0.033 45 μg(r=0.999 2);平均加样回收率分别为98.5％(RSD 1.3％,n=6),97.3％(RSD 1.7％,n=6),97.6％ (RSD 1.6％,n=6).结论:该方法准确度高,重复性好,可用于急性子中总黄酮的含量测定.     

高效液相色谱-电化学检测法测定黄芩中3种有效成分的含量

目的:建立同时测定黄芩中有效成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的HPLC-ECD检测法。方法:采用kromasil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)进行分离,Waters2465电化学检测器进行检测,检测电位为+800 mVvs.ISAAC(in-situ silver/silver chloride),流动相为H₂O-THF-H₃PO₄(80∶10∶0.2)与CH₃OH等体积混合洗脱,流速1.0 mL.min^-1,柱温30℃,进样体积10μL。结果与结论:黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在下列范围内,有良好的线性:0.045 6～1.14μg(r=0.999 6),0.013～0.325μg(r=1.000 0),和0.009 5～0.047 5μg(r=0.999 9)。平均回收率(n=5)分别为97.9%(RSD 2.3%),97.2%(RSD 3.3%)和103.5%(RSD 3.5%)。测定了14个不同种源、9个不同产地黄芩中有效成分的含量,对黄芩品质进行了评价。     

甘草次酸在大鼠体内药动学的RP-HPLC研究

目的：建立大鼠血浆中甘草次酸浓度的高效液相测定方法，探讨甘草次酸在大鼠体内的药动学过程。方法：大鼠按1.0 mg·kg^-1尾静脉注射甘草次酸后0.08，0.17，0.25，0.33，0.5，0.75，1，2，3，4，6 h眼底采血，乙腈沉淀血浆，HPLC测定血浆中甘草次酸浓度，以DAS软件拟合药动学参数。结果：甘草次酸血药浓度在50～2 000 ng·mL^-1线性良好，r=0.999 7，测得低中高浓度回收率分别为(105.2 ±2.23)%，(102.5±2.95)%，(98.4±2.32)%，日内、日间低中高浓度RSD均小于4%。甘草次酸在大鼠体内药-时曲线符合二室开放模型，主要药动学参数为：t_1/2α=(0.153±0.023) h，t_1/2β=(2.365±0.866) h，C_max =(2.074±0.100) mg·L^-1，CL=(0.715±0.082) L·h^-1·kg^-1，V_d =(2.427±0.872) L·kg^-1，AUC_{0～6 h} =(1.302±0.151) mg·h^-1·L^-1。结论：建立的RP-HPLC适用于体内甘草次酸的含量测定及药代动力学研究，甘草次酸在体内的分布迅速、广泛。     

薄层扫描法测定扶正胶囊中黄芪甲苷的含量

 目的：研究中药三类新药扶正胶囊中黄芪甲苷的定量方法。方法：样品用水饱和正丁醇提取,再经氨试液处理及大孔树脂的精制后点于硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）在10℃以下放置的下层液展开,用CS-930型薄层扫描仪在λ_s＝400nm,λ_R＝700nm下扫描。结果：本方法的平均回收率为98.7％,RSD为1.2％。结论：结果显示该方法灵敏,准确,专属性强,可用于本制剂的含量测定及质量控制。     

汉防己微囊中汉防己甲素的含量测定

 目的:测定汉防己微囊中汉防己甲素的含量，以制定微囊的质量标准。方法:氯仿回流提取微爱中的生物碱，双波长薄层扫描法测定。结果:Y=605.72X + 167.08, r =0.996, 2 h内稳定，RSD为1.81%(n=7)，加样回收率(99.40±2.59)%。结论:用双波长薄层扫描法测定汉防己微囊中汉防己甲素的含量，方法可靠，结果满意。