胰蛋白酶法和Triton-X100法去除瓣膜细胞的效果比较

目的 比较胰蛋白酶法和Triton-X100法去除异种或同种心脏瓣膜上细胞的效果。方法 选取新鲜猪主动脉瓣膜片分别置入0.05%胰酶溶液和0.25%Triton-X100溶液中处理48h,并以未经处理的新鲜瓣膜片作对照,行光镜及电镜观察,并作热皱缩温度、断裂强度和断裂拉伸率测定。结果 光镜和电镜下均显示,胰酶法和Triton-X100法均彻底去除了主动脉瓣膜上的细胞成分,但Triton-X100法对瓣膜支架结构的损伤较大。热皱缩温度、断裂强度和断裂拉伸率在新鲜瓣膜组和胰酶组间无显著性差异,但Triton-X100组与新鲜瓣膜组及胰酶组相比均有下降。结论 胰酶法去除猪主动脉瓣膜细胞彻底,保持了瓣叶支架结构,优于Triton-X100法。     

去细胞猪主动脉瓣膜支架的生物学特性

目的探讨以Triton-X100、脱氧胆酸钠和核酸酶去细胞后的组织工程心脏瓣膜支架的生物学特性。方法经Triton-X100、脱氧胆酸钠和核酸酶处理新鲜猪主动脉瓣膜,去除内皮细胞和间质细胞,常规苏木精伊红染色,电子扫描显微镜检查,评价去细胞效果,并检测去细胞瓣叶的力学特性、可溶性蛋白含量、同时行兔皮下包埋实验,观察其免疫反应性。结果Triton-X100、脱氧胆酸钠和核酸酶能有效去除细胞成分,获得组织工程心脏瓣膜支架。去细胞瓣叶与新鲜瓣叶有相同的拉伸强度-拉伸率曲线。可溶性蛋白含量明显降低,去细胞瓣叶的免疫反应性明显降低。结论经Triton-X100、脱氧胆酸钠和核酸酶去细胞处理的猪主动脉瓣膜可以做为组织工程瓣膜支架。     

改良去细胞方法对猪源性逆转录病毒的影响

目的：观察改良的去细胞方法对猪主动脉瓣膜的猪源性逆转录病毒的影响．方法：用0．1％胰酶消化猪主动脉瓣后,再用Triton X-100-DNA酶／RNA酶洗脱消化,结合溶液渗透压改变等去除细胞;取新鲜猪瓣、猪外周血标本和去细胞猪瓣各20只,降主动脉内移植去细胞猪瓣后的犬外周血10例,以PK15细胞系为对照,采用PCR和RT-PCR法检测猪源性逆转录病毒．结果：经去细胞处理后猪瓣内的细胞成分完全去除,纤维支架和力学性能保持良好;新鲜猪瓣及猪外周血标本均检测到219bp的扩增条带,与Medline公布的猪源性逆转录病毒有90％-95％同源性;去细胞猪瓣及移植了去细胞猪瓣犬的外周血,均未测到该病毒．结论：改良的去细胞方法可以去除猪心瓣膜的猪源性逆转录病毒,能够有效预防该病毒物种间的交叉感染．     

去细胞猪主动脉瓣的制备

目的 完全去除猪主动脉瓣的细胞,制备成去细胞猪瓣支架.方法 采用胰酶+TritonX-100制备去细胞猪瓣支架,标本进行形态、组织结构观察,并进行DNA含量和力学强度测定.以新鲜猪瓣为对照将去细胞瓣叶家兔皮下坪藏4周后分别取材,光镜进行检查.结果 采用胰酶+TritonX.100法能完全脱除猪主动脉瓣膜细胞,去细胞后瓣膜可溶性蛋白明显丢失[(0.24±0.04)%vs(0.48±0.12)%],瓣叶含水量增加[(92.2±1.5)%vs(89.2±1.6)%](P<0.01),但去细胞猪瓣仍保持了良好纤维支架结构,热皱缩温度[(67.9±1.0)℃vs(68.8±0.8)℃]和断裂强度[(489.3±19.0)g/mm2vs(540.7±19.5)g/mm2]未见显著变化(P>0.01).埋藏于兔皮下的去细胞猪主动脉瓣有轻微组织反应,可见少量中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,炎性反应明显轻于新鲜猪瓣组.结论 成功制备去细胞猪瓣支架,并保持良好的纤维支架结构和机械强度,抗原性轻微.     

改良去细胞方法对猪源性逆转录病毒的影响

目的观察改良的去细胞方法对猪主动脉瓣膜的猪源性逆转录病毒的影响。方法用0．1％胰酶消化猪主动脉瓣后,再用TritonX-100-DNA酶／RNA酶洗脱消化,结合溶液渗透压改变等去除细胞;取新鲜猪瓣、猪外周血标本和去细胞猪瓣各20只,降主动脉内移植去细胞猪瓣后的犬外周血10例,以PK15细胞系为对照,采用PCR和RT-PCR法检测猪源性逆转录病毒。结果经去细胞处理后猪瓣内的细胞成分完全去除,纤维支架和力学性能保持良好;新鲜猪瓣及猪外周血标本均检测到219bp的扩增条带,与Medline公布的猪源性逆转录病毒有90％～95％同源性;去细胞猪瓣及移植了去细胞猪瓣犬的外周血,均未测到该病毒。结论改良的去细胞方法可以去除猪心瓣膜的猪源性逆转录病毒,能够有效预防该病毒物种间的交叉感染。     

体外构建组织工程心脏瓣膜动物实验初步研究

目的探讨应用去细胞猪主动脉支架(decellularized porcine aortic valve scaffold，APAVS)与兔骨髓干细胞(rabbit bone marrow stromal cells，RBMSCs)体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。方法采用去垢剂-核酸酶消化法处理，去除猪主动脉瓣细胞成分，并做去细胞前后的形态学检查和生物力学测定；在去细胞支架上种植兔骨髓干细胞，行形态学检查和免疫组化测定。结果光镜及电镜证实，猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全去除，获得完整无细胞的纤维网状支架；瓣叶去细胞前后的断裂强度和断裂伸长率无明显变化；种植的RBMSCs可在ACPAV表面形成一层连续的细胞层。结论种植RBMSCs于ACPAV上，可体外构造组织工程人工心脏瓣膜。     

猪主动脉组织工程瓣膜制备的初步研究

目的：初步探索猪主动脉组织工程瓣膜的制备方法。方法：经胰酶－EDTA、表面活性剂、核酸酶处理，去除猪主动脉瓣的细胞成分，测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性，并在其表面种植BAECs。结果：猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全被去除，获得完整无细胞的纤维网状支架，瓣叶去细胞前、后的断裂强度和断裂伸长率无明显变化，瓣膜近端存留的主动脉壁中的细胞一半被去除；种植的BAECs在去细胞瓣膜表面、主动脉内膜形成一连续的细胞层。结论：猪主动脉瓣膜去细胞后获得的纤维支架适宜血管内皮细胞的生长，可以用来构建组织工程瓣膜。     

不同方法脱猪主动脉瓣细胞效果比较

目的:比较不同脱细胞方法处理猪主动脉瓣叶的效果,探讨组织工程心脏瓣膜生物支架的最佳制备方法.方法:取猪主动脉瓣膜,消毒后随机分组.Ⅰ组瓣叶不做处理,作为对照组.Ⅱ组Triton X-100、核酸酶(DNaseⅠ、RNase Ⅰ)处理.Ⅲ组采用低浓度胰蛋白酶、EDTA、核酸酶、DCA处理.Ⅳ组用DCA、核酸酶处理.对各组脱细胞瓣叶进行大体、光镜、电镜观察及理化检测.结果:Ⅳ组方法不可完全去除细胞成分,Ⅱ、Ⅲ组方法可完全去除细胞成分,但Ⅱ组瓣叶原有的超微结构有所改变.结论:低浓度胰蛋白酶、EDTA、核酸酶、DCA联合应用是理想的组织工程心脏瓣膜生物支架制备方法.     

可吸收脱细胞猪主动脉基质原位诱导食管再生的实验研究

目的：探讨应用可吸收脱细胞猪主动脉基质诱导原位食管再生 惺彻芴娲目尚行浴７椒? 应用胰酶、Triton X 100制备脱细胞猪主动脉基质。选用6只中国杂种犬，切除5?cm食管，用两片脱细胞猪主动脉基质缝制的人工食管进行重建，观察存活情况和食管再生过程。结果:应用胰酶、Triton X 100可有效的去除猪主动脉细胞。6只实验犬无围手术期死亡，1只发生吻合口瘘，1只在行内镜下扩张治疗时导致新生食管破裂死亡。病理结果显示，术后2周时有疏松结缔组织及大量新生血管形成，4周时整个人工食管被上皮细胞覆盖，镜下见粘膜上皮细胞约5～8层，其下可见粘膜下腺体结构及肌肉组织。12周时上皮细胞分化至8～10层，有粘膜下腺体结构及肌肉组织。原人工食管已完全吸收，肉眼已无法分辨人工和正常食管。结论:酶 去污剂联合应用能有效的祛除猪主动脉细胞。可吸收猪胸主动脉脱细胞血管基质能较好诱导组织的再生，为人工食管的临床应用研究提供了依据。     

Triton X-100法制备牛颈静脉脱细胞血管支架

 【目的】 研究经Triton X-100 脱细胞处理的牛颈静脉的组织结构和生物力学特性以及作为组织工程血管支架的可能性?【方法】 获取10条新鲜带瓣牛颈静脉,随机分为两组,新鲜对照组(n = 5)和脱细胞实验组(n = 5),脱细胞组血管使用2.5 mL/L Triton X-100等进行脱细胞处理48 h, 病理切片染色和扫描电镜观察血管壁和瓣膜自身细胞的脱除情况和细胞外基质变化情况;生物力学性能检测血管组织强度变化;体外人内皮种子细胞种植以了解脱细胞支架的生物相容性?【结果】 脱细胞处理后,管壁和瓣膜的自身细胞完全脱除而弹力纤维和胶原纤维无明显改变;与新鲜牛颈静脉相比,脱细胞血管的拉伸强度[(16.5 ± 2.61)MPa vs (15.5 ± 3.1)MPa; P > 0.05]和最大持线力[(7.9 ± 0.9)N vs (7.0 ± 1.1)N; P > 0.05]无明显改变,在100 mm Hg液压下脱细胞血管无异常扩张;内皮种子细胞在脱细胞血管支架上生长黏附良好?【结论】 Triton X-100法对新鲜牛颈静脉进行脱细胞处理效果良好,脱细胞牛颈静脉可作为细胞种植的血管支架使用?     

牛心包组织工程心脏瓣膜支架脱细胞的研究

目的研究去污剂-酶消化法、胰蛋白酶消化法和去氧胆酸钠法,去除新鲜牛心包组织细胞的效果和保护基质的能力,为组织工程心脏瓣膜的构建提供较满意的支架材料。方法分别采用去污剂-酶消化法、胰蛋白酶消化法和去氧胆酸钠法,处理新鲜牛心包组织,光学显微镜、扫描电镜观察脱细胞效果和胶原纤维、弹力纤维改变;热皱缩实验、拉力测试观察基质的物理性能变化;DNA抽提比较脱细胞前后细胞数量差异。结果3种方法均能完全去除细胞,与去污剂-酶消化法比较,其他2种方法对基质的破坏明显。结论去污剂-酶消化法脱细胞效果好,且具有良好的保护基质能力。     

经单宁酸处理脱细胞猪心脏瓣膜性能及形态学研究

目的：对比加单宁酸和传统的去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及性能差别,为构建组织工程心脏瓣膜提供实验依据。方法：应用两种方法处理6～7月龄猪主动脉心脏瓣膜。光学显微镜、透射电镜观察脱细胞基质改变、DNA含量测定。结果：两种方法处理后,显微镜检和透射电镜见单宁酸-去氧胆酸钠法对基质破坏较少;两组均可以完全脱去瓣膜细胞。结论：经单宁酸处理能更好地保护去除瓣叶组织细胞外基质,提高其性能。     

戊二醛鞣制驴心包与牛心包的体外力学性能比较

目的探讨驴心包在力学性能方面是否符合生物瓣膜的制备条件。方法用戊二醛鞣制脱细胞处理后的驴心包和牛心包进行对比研究。光镜下观察两组脱细胞效果。力学实验测定两组收缩温度、心包厚度、最大载荷、抗拉强度和撕裂强度。结果脱细胞处理后,光镜下见戊二醛鞣制的驴心包和牛心包无残存的细胞核,而未经脱细胞处理的驴心包和牛心包可见弥漫性细胞核存在,两种心包无明显差异;驴心包组收缩温度(87.500 0±0.591 6)℃,牛心包组收缩温度为(87.560 0±0.371 5)℃,两组差异无统计学意义(P>0.05);取相同心尖部位的驴心包与牛心包比较,驴心包厚度薄,抗拉强度大(P<0.001);两者的最大载荷和撕裂强度差异无统计学意义(P>0.05)。结论戊二醛鞣制的驴心包在力学性能方面适合制作心脏瓣膜材料。     

尿道修复支架材料生物力学性质比较

目的 检测并比较多种组织工程尿道修复支架材料的生物力学性质.方法 制备小肠黏膜下组织（SIS）、膀胱黏膜下脱细胞基质（BAMG）、聚羟乙酸（PGA）和尿道海绵体脱细胞基质（ACSM）支架材料,对其进行大体观察、HE染色及Masson染色观察.于单向拉伸实验机上检测单层SIS组、BAMG冻干保存组、BAMG液体保存组、ACSM组、PGA组、兔正常尿道标本组和4SIS组（SIS经4层叠加）的Young氏模量、最大载荷、抗拉强度和最大伸长率等生物力学参数,并进行组间比较.结果 ACSM的厚度与其他支架材料有明显差异,HE和Massdn染色显示其由更为丰富的胶原构成.生物力学检测结果显示,Young氏模量：ACSM组〉PGA组〉4SIS组〉BAMG液体保存组〉BAMG冻干保存组〉兔正常尿道组〉SIS组;最大载荷：ACSM组〉4SIS组〉PGA组〉BAMG液体保存组〉BAMG冻干保存组〉兔正常尿道组〉SIS组;抗拉强度：ACSM组〉4SIS组〉PGA组〉BAMG液体保存组〉BAMG冻干保存组〉兔正常尿道组〉SIS组;最大伸长率：兔正常尿道组〉SIS组〉BAMG冻干保存组〉4SIS组〉BAMG液体保存组〉ACSM组〉PGA组.ACSM组在Young氏模量、最大载荷和抗拉强度上显著优于其他组（P〈0.01）.结论 异种ACSM支架具有良好的生物力学性质,较SIS、BAMG和PGA等支架更适用于尿道重建.     

尿道修复支架材料生物力学性质比较

目的 检测并比较多种组织工程尿道修复支架材料的生物力学性质.方法 制备小肠黏膜下组织(SIS)、膀胱黏膜下脱细胞基质(BAMG)、聚羟乙酸(PGA)和尿道海绵体脱细胞基质(ACSM)支架材料,对其进行大体观察、HE染色及Masson染色观察.于单向拉伸实验机上检测单层SIS组、BAMG冻干保存组、BAMG液体保存组、ACSM组、PGA组、兔正常尿道标本组和4SIS组(SIS经4层叠加)的Young氏模量、最大载荷、抗拉强度和最大伸长率等生物力学参数,并进行组间比较.结果 ACSM的厚度与其他支架材料有明显差异,HE和Massdn染色显示其由更为丰富的胶原构成.生物力学检测结果显示,Young氏模量:ACSM组>PGA组>4SIS组>BAMG液体保存组>BAMG冻干保存组>兔正常尿道组>SIS组;最大载荷:ACSM组>4SIS组>PGA组>BAMG液体保存组>BAMG冻干保存组>兔正常尿道组>SIS组;抗拉强度:ACSM组>4SIS组>PGA组>BAMG液体保存组>BAMG冻干保存组>兔正常尿道组>SIS组;最大伸长率:兔正常尿道组>SIS组>BAMG冻干保存组>4SIS组>BAMG液体保存组>ACSM组>PGA组.ACSM组在Young氏模量、最大载荷和抗拉强度上显著优于其他组(P<0.01).结论 异种ACSM支架具有良好的生物力学性质,较SIS、BAMG和PGA等支架更适用于尿道重建.     

环氧氯丙烷在组织工程心脏瓣膜构建中对基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨环氧氯丙烷对组织工程心脏瓣膜构建中基质金属蛋白酶－1（matrix metalloproteinase-1 MMP-1）表达的影响。方法采用去垢剂和胰蛋白酶消化制备的脱细胞猪主动脉瓣膜支架作为对照组，用加用3％环氧氯丙烷处理24小时的去细胞支架材料作为实验组。将培养的人骨髓基质干细胞（human bone maiTow derived stroma cells BMSCs）种植于脱细胞支架上构建组织工程心脏瓣膜（tissue engineering heart valve 1EHV），分别行石蜡包埋切片、HE染色和扫描电镜观察TEHV的组织结构，并行逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定BMSCs分泌MMP-1的功能。结果BMSCs在实验组脱细胞瓣膜表面生长良好，MMP-1的表达比对照组降低。结论环氧氯丙烷处理的脱细胞猪主动脉瓣膜支架，可以抑制BMSCs的MMP-1表达。     

牛心包脱细胞基质的研制

目的为组织工程学方法研制生物瓣提供适合的基质材料。方法用去污剂-酶联合四步法脱除牛心包组织中的细胞,并对处理后组织的理化性质进行分析、测试。结果脱细胞效果良好,且能较好地保持胶原纤维和弹性纤维的排列分布。脱细胞后的牛心包组织的厚度、抗拉负荷、抗拉强度、断裂伸长率和热皱缩温度无明显变化。组织中可溶性蛋白含量无显著变化,而作为结构成分的胶原蛋白和蛋白聚糖得到了较好的保存。结论去污剂-酶联合四步法能有效地制造牛心包脱细胞基质材料。     

两种交联技术处理的兔去细胞颈动脉性能比较

目的：比较兔去细胞颈动脉采用不同交联技术处理后的血管性能差别。方法：将兔去细胞颈动脉随机分 成光氧化组和原花青素组,分别采用染料介导的光氧化交联技术、原花青素交联技术处理。对光氧化组和原花青素 组分别进行热皱缩温度、最大抗张强度及最大拉伸距离的血管体外性能检测,以及血管形态、炎症反应及钙化情况 的血管体内性能检测。结果：光氧化组与原花青素组兔去细胞颈动脉,在血管体外性能方面,热皱缩温度、最大抗 张强度和最大拉伸距离差异无统计学意义(P>0.05)。体内性能方面,两组在血管组织结构、炎症反应方面相似,Von- Kossa钙染色均未见明显钙化斑块,但原花青素组的钙含量明显低于光氧化组(P<0.05)。结论：两种交联技术处理的 兔去细胞颈动脉均保持了与新鲜血管相似的物理性能,具有较好的抗钙化能力和较低的免疫原性;原花青素交联技 术处理的血管抗钙化能力更佳。     

应用Fe~(3 )和Al~(3 )溶液改良戊二醛处理牛心包瓣的实验研究

应用三氯化铁（FeCl3）和三氯化铝（AlCl3）溶液对戊二醛（GA）处理的牛心包瓣进行改良处理。探讨处理后牛心包力学特性（热缩温度、应力保留值、断裂极限拉应力及断裂应变）及在大鼠皮下钙化情况。结果表明：AlCl3及FeCl3改良处理组牛心包热收缩温度与GA组心包无显著性差异（P＜0．05），较未处理磷酸缓冲液（PBS）组有极显著提高（P＜0．01）。改良处理不影响GA处理心包的力学效应，各力学指标与GA组比较无显著差异（均为P＞0．05），FeCl3、AlCl3。改良处理极显著抑制GA组心包钙化发生（P＜0．01）。大鼠皮下埋植期间，Fe(3 )、Al(3 )改良处理组心包内Al(3 )、Fe(3 )无明显丢失。