生长抑素类似物对胆管癌SK-ChA-1细胞株及其相关基因表达的影响

目的探讨生长抑素类似物SMS201-995抑制人胆管癌增殖时对SK-ChA-1细胞细胞周期及cyclinD1和p16蛋白的影响.方法采用血清饥饿法将SK-ChA-1细胞同步化,同步化释放后SMS201-995处理48h收取不同时相细胞,以流式细胞仪(flow cytometer)分析细胞周期相分布;并同时用免疫组化和原位杂交检测cyclinD1和p16基因表达水平.结果SMS处理SK-ChA-1细胞后6、12 h可抑制SK-ChA-1细胞经血刺激由G0/G1进入S期.CyclinD1蛋白表达在SMS处理SK-ChA-1细胞后6 h明显减弱.p16蛋白在细胞周期各时相呈稳定性低表达.SK-ChA-1细胞cyclinD1和p16 mRNA各时相表达无明显变化.结论SMS诱导的cyclinD1蛋白量降低可能与SMS干扰细胞G1-S期转换,阻遏SK-ChA-1细胞增殖有关.     

白藜芦醇影响OVCAR3细胞生长并通过活化caspase-3诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞生长及细胞周期的影响,并研究白藜芦醇诱导卵巢癌细胞凋亡及其途径.方法 MTT比色法检测白藜芦醇对细胞生长的影响,Ho33342染色荧光显微镜观察白藜芦醇对细胞核浓缩及片段化的影响,TUNEL检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响,流式细胞术分析白藜芦醇对细胞周期分布和caspase-3活性的影响.结果 低浓度(＜30 μmol/L)的白藜芦醇促进细胞增殖,而高浓度(＞30μmol/L)抑制细胞增殖;白藜芦醇能够引起S/G2阻滞,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇增加caspase-3活性具有时间和浓度效应.结论 白藜芦醇促进或抑制细胞生长具有浓度依赖性;并通过增加caspase-3活性而诱导卵巢癌细胞凋亡.     

腺病毒介导的rHSG-1基因转染对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:应用腺病毒介导的转基因方式转染大鼠增殖抑制基因(rHSG-1),以观察rHSG-1对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法:体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞并转染含有rHSG-1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(Ad5rHSG-1),采用细胞计数、MTT和3H-thymidine参入法,观察rHSG-1对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析rHSG-1对细胞周期的影响;应用Western Blot方法检测rHSG-1对细胞周期调控蛋白p27Kip1、p21Cip1和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear angitin,PCNA)的作用.结果:Ad5rHSG-1转染培养的SHR VSMCs后,能明显抑制细胞增殖,与对照组相比抑制率为40%(P<0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期,周期调控蛋白p27Kip1、p21Cip1表达升高,PCNA表达降低.结论:rHSG-1基因过表达可以抑制培养的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖,并可能是通过参与细胞周期调节发挥作用.     

热疗对纤维肉瘤S180株的抑瘤作用及其生物学机制

目的 探讨热疗对纤维肉瘤S180株的抑瘤作用及其生物学机制.方法 40只昆明小鼠,接种S180肿瘤细胞株后用加热进行实验干预,标本于实验后6、2、54h取材,原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2基因的mRNA表达.结果 热疗对纤维肉瘤有显著的治疗作用,可以诱导纤维肉瘤S180株细胞凋亡,改变细胞周期分布,使发生G1期阻滞,下调Bcl-2基因.结论 热疗可以诱导纤维肉瘤S180株细胞凋亡,改变细胞周期分布,使发生G1期阻滞,下调bcl-2基因,为进一步的基因配合热放疗治疗肿瘤和选择肿瘤放化疗结合时机和化疗药物提供了理论基础.     

苦参碱诱导U937细胞分化及其相关机制

目的:观察苦参碱对U937细胞诱导分化作用,并探讨其可能作用机制.方法:采用流式细胞仪检测细胞周期分布;硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、CD11b,CD14表面抗原的表达及细胞形态学检测细胞分化;Western Blot检测p21Waf1/Cip1的蛋白表达.结果:苦参碱作用U937细胞后,细胞周期分析提示发生S期阻滞;NBT阳性细胞率明显增高(P<0.05),CD11b表达增加(P<0.05);细胞内p21Waf1/Cip1表达增高(P<0.05).结论:苦参碱能诱导U937细胞分化,其机制可能与细胞周期调控蛋白p21Waf1/Cip1表达的改变有关.     

番茄红素对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期和增殖的影响

目的:研究番茄红素对体外培养的雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能作用机制。方法:采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclinD1、bcl-2、bax的mRNA表达的变化。结果:番茄红素抑制MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使G0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少)。RT-PCR结果显示cyclinD1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调。上述作用呈剂量效应关系。结论:番茄红素可诱导MDA-MB-231细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclinD1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而达到抑制肿瘤细胞增殖的可能。     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡及相关分子机制研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞凋亡时,细胞周期及细胞周期调节蛋白的变化,探讨As2O3抗肝癌作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;透射电镜观察细胞形态变化及细胞凋亡情况;免疫细胞化学检测cyclinD1、cyclinA、p21蛋白的表达.结果:As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1、S期,与对照组比较,Aa2O3在诱导SMMC-7721细胞发生凋亡的同时,p21蛋白的表达水平显著增高(对照组1.128;As2O3组:3.794),cyclinD1、cyclinA蛋白的表达水平明显下降(对照组:3.647,2.833;As2O3组:1.133,1.179).结论:As2O3能干扰细胞周期的进程,诱导SMMC-7721细胞凋亡.其作用机制与上调p21蛋白及下调cyclinD1、cyclinA蛋白的表达有关.     

壳寡糖对S180肉瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的探讨壳寡糖对S180肉瘤细胞的生物学效应，为其治疗肿瘤提供新的理论基础。方法体外实验：用流式细胞仪测壳寡糖作用下S180肉瘤细胞周期、细胞凋亡情况。体内实验：建立S180肉瘤小鼠皮下移植瘤模型，给予壳寡糖后，测瘤体积，并用免疫组化法测瘤组织Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果体外实验：高浓度壳寡糖作用后S180肉瘤细胞阻滞于G0/G1期，同时S180肉瘤细胞凋亡增加。体内实验：壳寡糖对小鼠S180肉瘤有明显的抑制作用并能提高促凋亡基因Bax的表达，降低抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论壳寡糖可抑制S180肉瘤细胞的生长，使S180细胞阻滞于G0／G1期并诱导其发生凋亡，其机制可能与Bcl-2蛋白下调而Bax蛋白上调有关。     

白藜芦醇下调ILK/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞生长、增殖的影响,并探讨其可能机制.方法:体外培养人卵巢腺癌A2780细胞,用不同浓度(50、100、200、400 μnol/L)白藜芦醇作用A2780细胞不同时间(24、48和72 h).采用M'TTT法检测白藜芦醇对细胞增殖活力的影响,采用流式细胞术检测白藜芦醇对细胞周期的改变情况,采用Western blot检测细胞内整合素蛋白激酶(integrin-linked kinase,ILK)、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平的表达.结果:200 μmol/L的白藜芦醇作用24 h可有效抑制A2780细胞增殖,使其阻滞于G0/G1期,并且存在显著的剂量-时间依赖性(P＜0.05);结果还显示白藜芦醇能够显著抑制卵巢癌A2780细胞内ILK、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平(P＜0.05),且存在浓度-时间依赖性(P＜0.05).结论:白藜芦醇可通过抑制卵巢癌A2780细胞中ILK/β-catenin信号通路,并降低下游靶蛋白Cyclin D1的表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖.     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

开口箭皂甙抑制小鼠S-180肉瘤细胞增殖及实体瘤生长的实验研究

目的 研究开口箭皂甙(STCB)体内外抗S-180肉瘤活性的强度及其作用机制.方法 MTT法检测S-180细胞的增殖程度;制备昆明种小鼠S-180移植实体瘤模型,观察STCB的抑瘤作用;光镜和电镜下观察药物作用后S-180细胞形态及超微结构变化;以不同浓度STCB处理S-180细胞,经碘化丙啶染色后应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 STCB体外明显抑制S-180细胞增殖,IC50为34.64μg/ml.经灌胃给药,STCB对荷S-180实体瘤小鼠表现出良好的抑瘤作用,低剂量(0.5 g/kg体质量)时,抑瘤率已超过30%,高剂量(2 g/kg体质量)时,抑制率达到54.86%.电镜观察和FCM检测证明肿瘤细胞凋亡率随STCB浓度增加而增加.STCB的浓度为10和30μg/ml时,S期细胞百分率上升,G2/M期细胞百分率下降;当STCB的浓度达到60μg/ml,G0/G1期细胞百分率下降,G2/M期细胞百分率上升:提示低浓度STCB阻止S-180细胞从S期进入G2期;高浓度时,STCB还干扰S-180细胞的有丝分裂.结论 STCB在体内外对S-180肉瘤细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期有关.     

幽门螺杆菌对胃癌上皮细胞株AGS细胞的生长抑制作用及其分子机理探讨

目的 观察体外实验中幽门螺杆菌(Hp)对胃癌上皮细胞株AGS细胞生长的影响,探讨Hp致病的分子机理。方法 胃癌细胞系AGS细胞体外培养,加入Hp活菌后,通过形态观察、细胞计数了解细胞生长情况;通过细胞核荧光染色、细胞DNA电泳检测细胞凋亡;通过流式细胞技术观察Hp对AGS细胞周期的影响,并进一步检测相应的细胞周期素。结果 Hp对AGS细胞生长有抑制作用。加入Hp后细胞凋亡增加,并导致G1／S细胞周期阻滞,伴有细胞周期素D1表达上调。结论 Hp急性感染可抑制AGS细胞生长,此作用可能与其诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。提示Hp感染能够破坏正常细胞周期调节。     

丙型肝炎病毒NS4B对肝细胞增殖和细胞周期的影响

摘 要：目的 研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝细胞细胞增殖和细胞周期的影响，探讨HCV-NS4B在HCV致病中的可能机制。方法 利用脂质体介导将空白载体PCXN2及重组质粒PCXN2-NS4B转染入 LO2肝细胞，G 418筛选。RT-PCR鉴定质粒成功转染入肝细胞内。MTT法绘制生长曲线，观察NS4B对肝细胞生长的影响；流式细胞仪检测细胞周期的情况；免疫组化方法观察PCNA、cyclinD1的表达情况。结果 NS4B转染入LO2有表达；绘制生长曲线示NS4B可促进肝细胞生长；细胞周期检测显示转染空载体PCXN2的细胞57.73％±19.73％进入G0/G1期、29.25％±6.95％进入S期、6.80％±4.67％进入G2/M期；转染PCXN2-NS4B的细胞46.89％±5.60％进入G0/G1期、36.31％±4.36％进入S期、16.80％±6.79％进入G2/M期；转染NS4B的细胞PCNA、cyclinD1表达率较转染空白载体组高，两组比较差异有显著性（P<0.01）。结论 HCV-NS4B可能通过调节某些基因转录与表达，促进DNA合成，干扰肝细胞周期，促进肝细胞增殖。     

腺病毒介导的hepaCAM基因对膀胱癌细胞周期的影响

目的：以腺病毒为载体,研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞T24和BIU-87的细胞周期影响。方法：以带有hepaCAM基因的腺病毒载体pAdH5-hepaCAM感染两株细胞,采用RT-QPCR和Western-blot、细胞免疫荧光方法检测感染pAdH5-hepaCAM组,pAdH5空载组和未感染组的hepaCAM mRNA 、蛋白的表达及其细胞定位。并采用流式细胞术检测hepaCAM对两株细胞周期影响,Western-blot方法检测细胞周期蛋白cyclinD1。结果：感染hepaCAM的T24和BIU-87细胞,hepaCAM mRNA和蛋白水平明显升高。流式结果显示hepaCAM阻滞T24与BIU-87细胞于G0/G1期。Western-blot检测实验组cyclinD1明显低于空载和空白组。细胞免疫荧光显示hepaCAM在单个细胞中主要表达于细胞浆中,在细胞之间表达于细胞连接处。结论：hepaCAM能阻滞膀胱癌细胞T24和BIU-87于G0/G1期,并使G1期关键周期蛋白cyclinD1下调。     

格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响．方法：MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率，流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡，半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达，Western blotting检测蛋白表达．结果：联合应用两种药物后细胞存活率明显下降，凋亡比例略下降，细胞周期阻滞于G0／G1期，cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调．结论：两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降，联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用，进入凋亡途径细胞减少。     

Antitumor Activity of Erythromycin on Human Neuroblastoma Cell Line （SH-SY5Y）

Antitumor effects of erythromycin and the related mechanism were investigated in the present study.Neuroblastoma cells(SH-SY5Y) were exposed to erythromycin at different concentrations for different durations.Cell proliferation was measured by cell counting,and cell viability was examined by MTT assay.Cell cycle phase distribution and the cytosolic calcium level were detected by flow cytometry.Mitochondrial membrane potential was measured by the JC-1 probe staining and fluorescent microscopy.The expression of an oncogene(c-Myc) and a tumor suppressor [p21(WAF1/Cip1)] proteins was analyzed by using Western blotting.Erythromycin could inhibit the proliferation of SH-SY5Y cells in a concentration-and time-dependent manner.The cell cycle was arrested at S phase.Mitochondrial membrane potential collapsed and the cytosolic calcium was overloaded in SH-SY5Y cells when treated with erythromycin.The expression of c-Myc protein was down-regulated,while that of p21(WAF1/Cip1) protein was up-regulated.It was concluded that erythromycin could restrain the proliferation of SH-SY5Y cells.The antitumor mechanism of erythromycin might involve regulating the expression of c-Myc and p21(WAF1/Cip1) proteins.     

培门冬酶抗人套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1细胞作用机制的研究

目的:观察培门冬酶(oncaspar)体外对人套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1细胞增殖抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:MTT法研究不同浓度的oncaspar作用于Jeko-1细胞24,48h后增殖抑制效应;流式细胞术(FCM)检测Jeko-1细胞凋亡的情况及细胞周期分布的改变;SYBR GreenⅠ实时荧光定量技术(qRT-PCR)检测Jeko-1细胞cyclinD1mRNA表达的变化。结果:oncaspar能明显地抑制Jeko-1细胞的生长,oncaspar处理48h组的抑制效果显著高于药物处理24h组(P<0.05);FCM检测示oncaspar处理组与对照组相比,Jeko-1细胞的早期凋亡率明显增加,并使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05);qRT-PCR结果示oncaspar能明显抑制Jeko-1细胞cyclinD1mRNA的表达,2-△△CT=0.42±0.11。结论:oncaspar在体外能显著抑制Jeko-1细胞的生长,并诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期。     

雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖抑制与自噬的机制研究

目的  探讨雷帕霉素（宜欣可）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外生长影响及诱导自噬的发生,并探讨可能的分子机制。方法  MTT法检测不同浓度（0、1、5、10、20、40、50及100 nmol/L）雷帕霉素作用不同时间（24、48及72 h）对Raji细胞增殖的影响。流式细胞仪测定雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响。透射电镜观察Raji细胞形态学变化。Western blot方法检测雷帕霉素处理前后对Raji 细胞自噬蛋白Beclin1的影响。结果  雷帕霉素对Raji细胞增殖有明显的抑制作用（P <0.01或P <0.05）。呈现明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。雷帕霉素明显抑制Raji细胞周期发展（P <0.05）,但没有发生明显的凋亡（P >0.05）。透射电镜观察到经100 nmol/L雷帕霉处理72 h后的Raji细胞胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体。Western blot方法检测到0、1、10及100 nmol/L雷帕霉处理72 h后Beclin1蛋白表达逐渐上升,且呈浓度依赖性。结论  雷帕霉素通过阻滞细胞周期发展抑制Raji细胞增殖,诱导Raji细胞发生自噬但不能诱导其凋亡。