乙型肝炎病毒转基因小鼠体内肝靶向反义RNA抗病毒疗效研究

目的：探讨半乳糖修饰的反义RNA真核表达质粒在乙型肝炎病毒转基因小鼠体内的抗病毒作用。方法：以半乳糖多聚赖氨酸（Gal-PLL)作肝靶向载体，将乙型肝炎病毒基因C区的反义RNA真核表达重组质粒（pCEP4-aC）制备为Gal-PLL－pCEP4-aC。将24只血清HBV DNA、HBsAg阳性的小鼠，随机等分为Gal-PLL－pCEP4-aC治疗组、Gal-PLL-pCEP4对照组和生理盐水阴性对照组，于实验第1天尾静脉分别注射Gal-PLL－pCEP4-aC、Gal-PLL－pCEP4（100μg/只）和等体积的生理盐水，观察治疗前后血清HBV DNA以及HBsAg变化。结果：Gal-PLL－pCEP4-aC治疗组21天时血清HBV－DNA转阴率62．5％（5／8），且7，14，21天时血清HBsAg明显降低；而Gal-PLL－pCEP4组血清HBV DNA转阴1只（1／8），生理盐水组8只均未转阴，两组用药后血清中HBsAg与用药前比较差异性均不明显（P＞0．05）。结论：肝靶向反义RNA能在乙肝基因小鼠体内抑制HBV的复制和抗原表达。     

缺血－再灌注兔心肌肌浆网自由基的测定

应用电子自旋共振波谱仪（ＥＳＲ）直接检测了缺血－再灌注兔心肌肌浆网自由基的变化，以探讨肌质网系统与氧自由基的关系。实验中将２０只兔随机分为再灌注对照组、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）组、ＡＴＰ－氯化镁组和人参皂甙Ｒｅ组。实验结果，ｇ值２．００４６处为半醌自由基波谱，其相对浓度各组依次为７８．９４±２．１２６，１４．４６±２．８６，２０．６５±７．６５，１４．６６±３．６７（ｘ±ＳＤ），对照组与用药组均有显著性差异（Ｐ＜０．０５），表明缺血－再灌注兔心肌肌浆网产生大量的自由基，用ＥＳＲ可以直接检测到半醌自由基，外源性高能磷酸盐制剂ＡＴＰ－氯化镁及人参皂甙Ｒｅ与超氧化物歧化酶一样，发挥清除兔心肌肌浆网自由基的作用。     

肾小管上皮细胞转分化过程中ILK的表达变化及大黄素对其的干预效应

目的:研究信号蛋白ILK在IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)中的表达变化以及大黄素是否是通过抑制ILK的表达而影响IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化.方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、IL-1β加大黄素组.在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫单染检测ILK的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白(FN)含量.结果:IL-1β诱导细胞转变为明显类似成纤维细胞形态,增加a-SMA的表达[(65.5±1.7)vs(140.4±3.0),P<0.05],减少E-cadherin的表达[(82.5±1.0)vs(36.0±2.8),P<0.05),促进ILK的表达[(36.1±3.1)vs(82.4±1.2),P<0.05],促进FN的合成[(54.6±3.1)mg/Lvs(124.8±3.2)mg/L,P<0.05],加入大黄素后上述变化受到明显抑制.结论:在IL-1β诱导的TEMT中ILK的表达是明显上调的,大黄素可能通过下调ILK的表达而抑制IL-1β诱导的TEMT.     

结核分枝杆菌Ag85A/HSP70 DNA疫苗的真核表达与免疫效应研究

目前卡介苗（BCG）作为临床上惟一使用的预防结核病的疫苗,效果并不稳定.同时BCG的接种会使结核菌素试验阳性,对结核病的诊断产生干扰,延误治疗时间,因此研制新疫苗成为当前结核病防治的首要任务.我们将结核分枝杆菌Ag85A和HSP70编码基因，以PCI-neo为载体，连接构建了PCI-Ag85A/HSP70 DAN疫苗，观察其免疫效应，以期用于结核病的防治工作。     

新生儿窒息后血清诱导人肾小管细胞凋亡的作用

目的研究新生儿窒息后血清对人近曲肾小管上皮细胞(HK2)损伤的作用及其胞内信号传导机制。方法以人近曲肾小管上皮细胞(HK2)为研究对象,实验共分为对照组、窒息组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。以20%血清浓度作为攻击浓度,采用流式细胞仪分别测定上述各组细胞的凋亡率。结果与对照组HK2细胞凋亡率[(13.3±1.70)%]相比,窒息组和PDTC干预组HK2细胞凋亡率[(46.73±3.68)%]和[(31.19±2.79)%]均增高,差异具有显著性意义(P均<0.001);与窒息组相比,PDTC干预组HK2细胞凋亡率降低,差异有显著性意义(P<0.001)。结论新生儿窒息后血清可诱导人HK2凋亡,其胞内信号机制涉及到NFκB活化。     

血管紧张素-（1-7）抑制肾小球系膜细胞增殖过程中c-fos蛋白表达

目的观察血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对血管紧张素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导的肾小球系膜细胞（GMC）增殖过程中c-fos表达的影响。方法体外培养GMC，Ang-Ⅱ为刺激因子，不同浓度Ang-（1-7）为干预因子。用结晶紫计数法检测GMC数目的变化；Western blot检测GMC中c-fos蛋白表达的变化。结果Ang-（1-7）呈剂量依赖性地抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC增殖和GMC内c-fos蛋白表达。结论Ang-（1-7）可能通过抑制c-fos的表达，抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC增殖。     

血清TGF-β1、HGF与慢性乙型肝炎早期肾损伤关系的研究

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)与慢性乙型肝炎(CHB)早期肾损伤的关系.方法对44例CHB患者用双抗体夹心ELISA法和放射免疫法测定血清TGF-β1、HGF和尿α1微球蛋白(α1-MG)、尿微量白蛋白(mALB)水平;20例健康人做对照.结果 44例CHB中早期肾损伤24例,无肾损伤20例CHB患者血清TGF-β1、HGF高于对照组(P＜0.01);早期肾损伤者血清TGF-β1、HGF明显高于无肾损伤者(P＜0.01);且血清TGF-β1、HGF与早期肾损伤指标尿α1-MG、mALB水平成正相关(r分别=0.718,0.683,0.664,0.637).结论 CHB早期肾损伤患者血清TGF-β1、HGF均升高,可能是机体损伤与抗损伤反馈调节所致.     

转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化及大黄素干预中的作用

目的:大黄素对白细胞介素1β诱导NRK52E细胞转分化有显著抑制作用。实验拟进一步观察转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及大黄素抑制作用中的意义。方法:实验于2006-10/2007-05在泸州医学院附属医院免疫实验室完成。⑴实验材料及分组:以培养的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为观察对象,按如下分组分别添加不同处理因素:①对照组:仅加入体积分数为0.05小牛血清的高糖DMEM培养基。②白细胞介素1β诱导组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L的高糖DMEM培养基。③SB431542阻断组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及SB431542终浓度为10μmol/L的高糖DMEM培养基。④白细胞介素1β 大黄素组:同时加分别含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及大黄素终浓度为25mg/L的高糖DMEM培养基。⑵实验评估:培养48h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色法检测肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达。结果:①白细胞介素1β可诱导部分细胞由卵圆形转变为梭形,且肌酸激酶表达减弱(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1表达显著增强(P<0.01)。②SB431542特异性抑制转化生长因子β1作用后,白细胞介素1β诱导的细胞形态改变受抑,同时肌酸激酶表达增强(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白表达减弱(P<0.01),但转化生长因子β1的表达却无明显变化。③大黄素对白细胞介素1β诱导的细胞形态改变及肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白的表达有明显抑制作用,其抑制作用与SB431542的作用相比无显著差异;同时,大黄素对白细胞介素1β诱导的转化生长因子β1的表达也有明显抑制作用(P<0.01)。结论:转化生长因子β1可能介导了白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,并参与了大黄素抑制白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。     

血管紧张素-(1-7)对大鼠肾系膜细胞TGF-β1/Smad/CTGF通路的影响

-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad/CTGF通路有关.     

52例散发单纯戊型肝炎临床分析

戊型肝炎既往称肠道传播的非甲非乙型肝炎，是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的，主要经污染的水源传播，也可通过食物和日常生活接触传播，常引起大的爆发或流行，但也可散发。在每年的200万急性病毒性肝炎中，戊型肝炎(HE)感染占17．2％-20％。其临床发病特点较甲型肝炎有明显区别。作者对我院52例收住院及门诊散发单纯HE的临床特点分析总结如下。