CA9与其相关基因及其产物在肾细胞癌诊断与治疗方面应用的研究现状

CA9是当今癌症生物学界研究的热门基因,为细胞膜表面的糖蛋白基因,其位于PI3K/AKT/MTOR通路的下游;其产物CAIX为碳酸酐酶家族的成员之一,在局部pH的调节方面有重要作用;VHL基因定位于人类3号染色体P25,是一种抑癌基因,其产物PVHL在多种正常组织中表达,在缺氧环境中或者VHL,基因失活状态下,PVHL的elonginC/BCu12复合物并不降解HIF-1α,其定位并聚集于细胞核,导致其连锁的基因过度表达而对于一些肿瘤发展过程产生重要影响.CA9是诊断RCC有效的分子标记之一,许多研究表明其高表达预示着更具侵袭性的肾细胞癌分型及更不良的预后.     

慢性粒细胞白血病合并自身免疫性溶血性贫血1例分析

对慢性粒细胞白血病合并自身免疫性溶血性贫血1例分析如下。 1病历摘要 女，38岁。因左上腹不适伴反复乏力、盗汗、咳嗽3个月入院。查体：T38．0℃，全身皮肤及巩膜轻度黄染，咽稍红，扁桃体不大，全身浅表淋巴结未扪及肿大；双下肺呼吸音稍粗，未闻及干湿罗音；心脏无特殊；腹膨隆，巨脾，Ⅰ线10cm，Ⅱ线12cm，Ⅲ线2cm，质中，轻压痛。入院血常规：WBC286．2×10^9／L，HB75g／L，PLT302×10^9／L，幼稚细胞62％，网织红细胞（RET）1．9％；骨髓涂片：粒系增生极度活跃，中性中幼粒＋晚幼粒＋杆状核为71％；Ph染色体阳性；肝功能：白蛋白31g／L，总胆红素（TB）64．1μmol／L，     

以颈部炎性包块为首发的多发性骨髓瘤1例分析

现将以颈部炎性包块为首发的多发性骨髓瘤1例分析如下。1病历摘要女,46岁。因发现颈部包块2个月,进行性增大5d入普外科。患者于入院前2个月无明显诱因出现颈部包块,包块无活动性,无明显疼痛及局部皮温升高,院外抗炎治疗效果不佳。于入院前5d,颈部包块迅速长大,同时下颌部也出现包块,无心悸、胸闷、多汗。查体:一般情况尚可,轻度贫血貌,下颌部到颈部可触及质硬肿物,呈片状分布于患处,无活动性,无压痛及波动性。全身浅表淋巴结未扪及肿大,甲状腺触诊欠清,未闻及血管杂音。心、肺、腹未见异常。辅助检查:抗核抗体谱、抗“O”、类风湿因子、肝…     

Borna病病毒与慢性粒细胞白血病：病例对照

目的：检测人类慢性粒细胞白血病中Boma病病毒的感染率情况，分析Boma病病毒与慢性粒细胞白血病是否存在相关性。 方法：选取2004-01／2005-06重庆医科大学附属第一医院血液科收治的符合细胞形态学、免疫学及遗传学分型诊断标准的30例慢性粒细胞白血病确诊患者，另以30例健康自愿献血者作为正常对照。慢性粒细胞白血病患者和正常对照人群均取10mL外周枸橼酸二钠抗凝血，采用Ficoll-conray液分离出外周血单个核细胞，提取RNA，随后采用紫外分光光度计测A260,A280值，计算RNA浓度。采用琼脂糖凝胶电泳进行RNA完整性检测，建立Boma病病毒P24阳性定量标准曲线。随机抽取一浓度质粒聚合酶链反应扩增产物进行克隆测序。采用荧光定量套式反转录聚合酶链反应检测RNA中Boma病病毒P24基因片段。 结果：①5个梯度阳性模板定量扩增后均呈典型的S形，起始模板浓度与循环阈值相关系数达0．99969，具有良好的线性关系。质粒PCR产物克隆测序结果与美国国立卫生研究院基因列数据库中调出Boma病病毒的第二开放阅读框（ORFII）区P24序列一致，确定扩增成功。②4份样本电泳后可见28s，18s两条清晰的条带和稍欠清晰的5s条带。A260/A280值分别为1．825，1．946，1．833，1．895，均在1．8以上。RNA浓度分别为0．584，0．872，0．416，0．524mg／L。RNA的提取质量达到聚合酶链反应要求。③电泳条带清晰，反转录及第1轮聚合酶链反应扩增成功。④第2轮聚合酶链反应阳性模板扩增荧光呈典型的S形，说明定量聚合酶链反应扩增成功，起始模板浓度与循环阈值相关系数达0．99以上，具有良好的线性关系。慢性粒细胞白血病患者Boma病病毒P24基因片段与正常对照者的阳性率均为0％，无差异。 结论：本实验不支持Boma病病毒与慢性粒细胞白血病的发生具有相关性。     

苦参碱通过MAPK信号转导通路促进U937细胞凋亡

目的:探讨苦参碱(mattine,Mat)对人淋巴瘤细胞株(U937)的抗癌作用及其分子机制.方法:用0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 g·L~(-1)Mat处理U937细胞后,分别采用倒置显微镜和电子显微镜观察细胞形态学变化;台盼蓝拒染法及MTT实验检测细胞增殖抑制作用;Westem blot方法检测细胞MAPK的磷酸化活性.结果:0.2 g·L~(-1) Mat对人组织淋巴瘤U937细胞的增殖有抑制作用;0.2 g·L~(-1) Mat作用U937细胞48 h后,倒置显微镜下可见细胞数目减少,有些细胞变小、变圆,随着Mat作用浓度的增加,U937细胞逐步出现增多的凋亡细胞;Mat可以抑制U937细胞中ERK的活性,并在一定程度上提高p38和JNK的活性.结论:Mat可以在体外抑制人淋巴瘤细胞U937的增殖作用,诱导其凋亡,并且Mat可能通过抑制U937细胞中ERK的活性,提高p38和JNK的活性发挥其诱导凋亡作用.     

阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡过程中活性氧水平的变化

目的探讨阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡的可能机制。方法将细胞分为以下5组:阴性对照组、0.1μmol/L Ara-c组、1μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c组、10μmol/L Ara-c+62.5μmol/L ALA组。用MTT法测定阿糖胞苷对各组细胞抑制率的影响,用Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst33258荧光染色观察阿糖胞苷对各组细胞凋亡的影响,并用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化。运用二氢二氯荧光素(DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞内活性氧水平的变化。结果 MTT结果提示,阿糖胞苷处理组细胞增殖抑制率高于阴性对照组,二者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪结果提示,不同浓度的阿糖胞苷作用MUTZ-8细胞后,凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪及荧光显微镜检测均显示,阿糖胞苷作用后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)明显上升。而加入抗氧化剂α-硫辛酸后细胞内ROS表达水平下降。结论阿糖胞苷明显抑制了人MDS细胞株MUTZ-8的生长并诱导其凋亡,可能与阿糖胞苷影响了细胞内ROS水平有关。     

多房性囊性肾细胞癌的诊断与手术治疗

多房性囊性肾细胞癌(MCRCC)是一种较为少见的特殊类型的肾细胞癌,WHO 2004版肾细胞癌病理学分类标准将其单独分为一类[1],1998年6月至2008年6月我院收治经手术治疗病理证实的MCRCC共11例,现将结果报告如下.     

p38MAPK活化在苦参碱诱导Raji细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨p38MAPK活化在中药苦参碱(Matrine,Mat)诱导人Burkitt,s淋巴瘤Raji细胞凋亡中的作用。方法:体外培养Raji细胞,分别用苦参碱(终浓度为0.4、0.8、1.6mg/mL)和在此基础上加入SB203580(p38 MAPK抑制剂)作用48h后,采用AnnexinⅤ–FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,应用Western blot检测P-p38MAPK及Caspase-3蛋白表达量。结果:终浓度为0.4、0.8、1.6 mg/mL苦参碱对Raji细胞总凋亡率分别为(15.77±0.53)%、(27.88±1.52)%、(48.08±2.87)%、与加入SB203580比较(11.48±0.64)%、(19.34±0.91)%、(33.98±1.26)%具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),与对照组(8.78±0.66)%比较也具有显著性差异(P<0.05或P<0.01);Western blot显示了P-p38MAPK和Caspase-3蛋白表达水平均随苦参碱浓度的提高而增加,加入SB203580后二者表达降低。结论:苦参碱可诱导Raji细胞凋亡,其凋亡可能与p38 MAPK的活化,进而直接或间接激活Caspase-3有关。     

P38MAPK信号转导通路在大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中的作用

目的:探讨大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中P38MAPK及Fas基因表达的变化.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;免疫细胞化学法观察大蒜素处理后细胞内磷酸化P38MAPK(P-p38MAPK)表达及分布变化;Western blot检测大蒜素处理前后细胞内P-p38MAPK和Fas蛋白表达量的变化.结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性.其72h中效浓度(IC_(50))为12.8 mg·L~(-1).Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加.免疫细胞化学法检测药物处理后P-p38MAPK表达增加,主要分布于细胞核与细胞浆,而阴性对照组仅弱表达.Western blot结果分析P-p38MAPK,Fas蛋白表达量随大蒜素浓度的增加而增加,呈剂量依赖性.其阴性组、72 h的1/2 IC_(50)组、IC_(50)组P-p38MAPK蛋白表达水平(相对灰度值)分别为0.259 8±0.013 2,0.361 2±0.008 3,0.505 6±0.005 5;Fas蛋白表达水平分别为0.287 4±0.008 9,0.426 8±0.007 9和0.597 1±0.010 9,差别均有显著性意义(P<0.01).结论:大蒜素可诱导THP-1细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能是通过激活P-p38MAPK/Fas途径实现.