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目的:对重组人肝细胞生长因子(Recombinant human hepatocyte growth facor,rhHGF)进行初步纯化及鉴定。方法:培养上清液经过离心、超滤,在FPLC系统上经肝素亲和层析分离纯化,用ELISA法检测、收集rhHGF。SDS-PAGE电泳鉴定纯度和相对分子质量,大鼠原代肝细胞培养法检测rhHGF的生物学活性。结果:rhHGF主要在0.9-1.3mol/L NaCl范围内被洗脱,由约62000和34000两个亚基组成,明显促进大鼠肝细胞DNA合成。结论:经肝素亲和层析分离,从表达rhHGF的CHO细胞培养上清液中纯化出有活性的rhHGF。 相似文献
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以兔红细胞作为抗原建立小鼠体液免疫反应动物模型 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨以兔红细胞作为抗原建立小鼠体液免疫反应动物模型的最适条件。方法微量溶血酶标仪分光光度法测定血清溶血素水平。结果抗兔红细胞溶血素峰时间为免疫后d6(免疫当天为d0);最适兔红细胞抗原量为20%,每鼠腹腔注射0.2ml。氢化可的松(25mg/kg)、环磷酰胺(20mg/kg)可以抑制小鼠抗兔红细胞溶血素的生成;甘露聚糖肽(4mg/kg)对正常小鼠抗兔红细胞溶血素水平影响不大,但对环磷酰胺免疫抑制小鼠的血清溶血素水平具有明显提高作用。结论以兔红细胞作为抗原建立的小鼠体液免疫反应动物模型具有实验过程简单、兔红细胞来源方便、实验误差小等优点,可用于药物对体液免疫功能影响的研究。 相似文献
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一种大批量制备眼镜蛇毒金属蛋白酶natrahagin的方法 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 建立从中华眼镜蛇毒(Naja naja atra)中大批量分离、纯化natrahagin的方法。方法与结果10g眼镜蛇毒经超滤去除小分子组分后,再经Heparin-SehparoseCL-6B亲和层析及SephadeG-150分子筛层析。获得91mg natrahagin,产率为0.91%;SDS-PAGE显示natrahagin呈单一区带,相对分子质量约47100,并具有水解纤维蛋白质和血小板膜糖蛋白Ib(Platelet membrane glycoprotein Ib.GPIb)。结论 此实验成功建立的从中华眼镜蛇毒中大批量制备natahagin的方法具有高效、简便的特点。 相似文献
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目的 从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定,观察其抗凝作用。方法 经DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin,分别采用Biosep-sec-s 2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5%浓缩胶,12%分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定,将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合,测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)。结果 Acoagulatin的相对分子质量为31400,由两个亚基组成,相对分子质量分别为14400和17000,能显著地延长PT和APTT,对TT没有影响。结论 采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒,能分离出纯度高的组分acoagulatin,该组分具有抗凝活性。 相似文献
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链脲佐菌素糖尿病模型动物血糖及体征动态变化的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 探讨链脲佐菌素(streptozotocin)糖尿病模型动物血糖和体征动态变化的特点.方法 链脲佐菌素1次或多次腹腔注射,分别建立大鼠和小鼠糖尿病模型;检测血糖变化,以进食量(g)/体质量(g),饮水量(ml)/体质量(g)计算进食量系数和饮水量系数.结果 雄性大鼠链脲佐菌素60 mg/kg糖尿病成模率为65.0%,血糖在注射后15 d达到高峰,15~25 d保持在较高水平,25d后出现明显的下降.小鼠链脲佐菌素200 mg/kg分5次建立糖尿病成模率为90.0%,血糖的动态变化与大鼠类似,但血糖下降不明显.在这两个糖尿病模型中,动物的饮水量系数变化与血糖水平变化的相关性最高,相关系数r>0.97.结论 链脲佐菌素糖尿病模型动物的血糖水平在造模开始后的15~25 d维持在较高水平,可作为观察降血糖药物疗效的适宜时段.饮水量系数是反映血糖的水平变化的适宜指标. 相似文献
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一种新的多糖——链霉菌多糖的分离与结构确证 总被引:2,自引:0,他引:2
目的从链霉菌发酵液中分离纯化出一种新的多糖--链霉菌多糖(streptomyces polysaccharide,SMP),并进行结构确证.方法采用乙醇沉淀多糖类大分子物质、Sevage法去蛋白、DEAE-纤维素离子交换层析法及Sephadex G-25 凝胶过滤法纯化多糖.其结构经HPLC、UV、IR、1H-NMR以及高碘酸氧化、Smith降解等方法进行测定.结果分离纯化出的多糖属于中性多糖,相对分子质量约为4855道尔顿;单糖组成以葡萄糖为主,含有少量果糖,二的摩尔比约为22:1(10.96:0.48);糖苷键的链接方式为(1→6)-α-D-吡喃型;命名为SMP.结论从链霉菌发酵液中分离纯化出的多糖SMP是以1→6位键合的α-D-吡喃型多糖. 相似文献
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中国黑眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin抑制血小板聚集和动脉血栓形成的作用 总被引:5,自引:0,他引:5
研究从中国黑眼镜蛇毒中纯化的中国黑眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin对血小板聚集 ,血浆纤维蛋白原水平和动脉血栓形成的影响 .采用比浊法测定兔血小板聚集率 ,双缩脲法测定血浆纤维蛋白原浓度 .应用胰蛋白酶损伤血管内皮的方法制作家兔颈动脉血栓模型评价natrahagin抑制血栓形成的作用 .结果发现 ,新西兰家兔natrahagin ( 0 .0 2 5~ 0 .1mg·kg- 1,iv)剂量依赖性地抑制二磷酸腺苷 ( 10 μmol·L- 1)和胶原 ( 10 0mg·L- 1)诱导的血小板聚集 ,显著降低血浆纤维蛋白原水平 .剂量为 0 .1mg·kg- 1时 ,血浆纤维蛋白原水平降低 33.3% .并能有效地抑制兔颈动脉血栓的形成 ,效应呈剂量依赖性 .0 .1mg·kg- 1剂量组对血栓形成的抑制率达到 4 5.4 % .研究提示 ,natrahagin抑制动脉血栓形成的作用与其抑制纤维蛋白原介导的血小板聚集和降低血浆纤维蛋白原水平的作用有关 相似文献
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目的:观察从中国眼镜蛇(Naja naja atra)毒中纯化的蛋白酶natrahagin水解血小板膜糖蛋白Ⅰb(platelet membrane glycoprotein Ⅰb,GPⅠb)和抑制血小板聚集的作用.方法:通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测以及凝胶图像光密度分析系统分析natrahagin对血小板膜糖蛋白的水解作用.比浊法测定血小板聚集率.结果:Natrahagin选择性地水解GP Ⅰb,切除分子量约3.3×104的片段.Natrahagin(0.025~0.1 mg/kg)静脉注射可显著抑制低浓度凝血酶(100 U/L)诱导的兔洗涤血小板聚集,效应呈剂量依赖性.结论:Natrahagin具有水解GPⅠb和抑制后者介导的血小板聚集的作用. 相似文献
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水蛭水煎液抗栓作用机制的体外实验研究 总被引:24,自引:1,他引:23
目的研究水蛭提取液的抗凝和纤溶作用。方法观察水蛭水煎液及其醇溶和非醇溶部分抑制凝血酶引起纤维蛋白 (Fb)凝块形成的活性 ,纤维蛋白平板和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析各提取液水解Fb和纤维蛋白原 (Fbg)的作用。结果水煎液及其醇溶部分可抑制Fb凝块形成 ,非醇溶部分无此作用。水煎液及其非醇溶部分可水解Fbg和Fb ,且以α链为主 ,对β和 链及牛血清白蛋白的水解作用弱 ;醇溶部分对这些蛋白的水解作用不明显。结论水蛭水煎液的醇溶和非醇溶部分分别含抗凝和纤溶物质 ,其纤溶作用具有相对的特异性 相似文献
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目的:研究natrahagin水解纤维蛋白原的特性及其对血小板聚集的影响。方法:SDS-PAGE,水解纤维蛋白原活性测定,血小板聚集实验。结果:Natrahagin与纤维蛋白原以1:50(w/w)孵育,5min内A_α-链几乎完全降解,γ-链的完全降解则至少需6h;其水解可凝固纤维蛋白原的活性为0.349±0.044g·min~(-1)·g~(-1)。Natrahagin浓度依赖性地抑制利托菌素对富血小板血浆和凝血酶(80U·L~(-1))对洗涤血小板的聚集反应,IC_(50)(95%可信限)分别为56(40-79)和3.3(1.4-8.0)mg·L~(-1)。但即使natrahagin达200mg·L~(-1),对ADP和胶原诱导的血小板聚集仍无抑制作用。结论:Natrahagin是一种α,γ-纤维蛋白原溶解酶,可选择性抑制血小板膜糖蛋白Ib介导的血小板聚集。 相似文献