加味寿胎丸联合黄体酮调节NKG2D、NKG2A表达治疗肾虚型URSA作用机制研究

目的?探讨NK细胞活性变化在不明原因复发性流产（URSA）发病中的机制;加味寿胎丸联合黄体酮通过调节NK细胞受体表达变化诱导母胎免疫耐受治疗URSA的作用机制。方法?选取加味寿胎丸联合黄体酮治疗肾虚型URSA成功患者20例,并选取同期URSA妊娠丢失组及健康早孕（HEP）组各15例,以流式细胞术检测各组外周血NKG2D、NKG2A的表达,并比较URSA妊娠组治疗后与健康早孕组血E₂、P、β-HCG水平。结果?URSA妊娠丢失组pNK细胞NKG2D呈高表达及NKG2A呈低表达,与HEP组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。URSA妊娠组治疗后pNK细胞NKG2D表达水平明显低于治疗前,与HEP组比较有统计学意义（P＜0.05）,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义（P＜0.01）;NKG2A表达水平明显高于治疗前（P＜0.01）,与HEP组比较无统计学意义,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。经加味寿胎丸联合黄体酮治疗后,URSA妊娠组血清E₂、P、β-HCG水平与HEP组分别比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论?NK细胞受体NKG2D、NKG2A的表达参与了URSA的发病;加味寿胎丸联合黄体酮能通过下调URSA患者NKG2D的表达水平,上调NKG2A的表达水平介导母胎免疫耐受治疗URSA;固肾安胎法是治疗肾虚型URSA的有效方法,加味寿胎丸是治疗肾虚型URSA的有效方剂。      

IFN-γ 诱导蛋白 10 及其受体在子痫前期孕妇血清和胎盘组织中的表达

目的 探讨子痫前期孕妇血清及胎盘组织中 IFN-γ 诱导蛋白 10（IP-10）及其受体 CXCR3 的表达情况。 方法 选 择同期住院的晚期正常妊娠、轻度子痫前期和重度子痫前期孕妇各 20 例。采用 ELISA、实时荧光定量 RT-PCR 和 Western blot 等方 法检测血清 IP-10 水平、CXCR3 mRNA 表达水平,以及胎盘组织中 IP-10、CXCR3 蛋白和 mRNA 表达水平;并对子痫前期孕妇 IP-10 与 CXCR3 进行 Pearson 相关分析。 结果 与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期孕妇血清 IP-10 水平和 CXCR3 mRNA 表达 水平均有不同程度的增高（均 P＜0.05）,且均为重度子痫前期组高于轻度子痫前期组（均 P＜0.05）。此外,轻、重度子痫前期孕妇胎盘 组织中 IP-10、CXCR3 蛋白和 mRNA 水平均明显高于正常妊娠组（均 P＜0.05）。Pearson 相关分析显示,子痫前期孕妇血清 IP-10 水 平与外周血 CXCR3 mRNA 表达水平呈正相关（r=0.914,P＜0.05）;子痫前期孕妇胎盘组织中 IP-10 mRNA 表达水平与 CXCR3 mRNA 表达水平呈正相关（r=0.907,P＜0.05）。 结论 IP-10 及其受体 CXCR3 表达上调参与子痫前期病程,子痫前期孕妇血清、胎 盘组织中 IP-10 与 CXCR3 均呈正相关,可能与子痫前期的发病有关。     

子痫前期胎盘组织中CASR和MMP-2表达的研究

目的探讨CASR和MMP-2在子痫前期患者胎盘组织mRNA及蛋白表达水平变化及其与子痫前期发病的关系。方法采用免疫组化法和RT-PCR技术分别检测子痫前期患者42例（子痫前期轻度组21例,重度组21例）及健康足月孕妇32例（对照组）胎盘组织中CASR和MMP-2的mRNA及蛋白表达水平。结果①对照组胎盘CASR的蛋白表达水平与子痫前期轻度组、重度组比较,差异均有统计学意义。②子痫前期重度组中MMP-2蛋白表达,明显低于对照组、子痫前期轻度组,差异均有统计学意义。③胎盘组织中CASR的mRNA表达水平,子痫前期重度组与对照组、子痫前期轻度组比较,差异均有统计学意义。④胎盘MMP-2的mRNA对照组表达与子痫前期轻度组、重度组比较,差异有统计学意义。⑤胎盘组织中CASR蛋白和mRNA水平与MMP-2呈负相关关系。结论子痫前期患者胎盘组织中CASR表达增加,MMP-2表达降低,可能与子痫前期的发病有关。     

RECK基因在子痫前期患者胎盘的表达及其与MMP-2活化的关系

目的 通过检测RECK基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与MMP-2活化的关系,探讨RECK基因在胎盘滋养细胞浸润机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、Western blot检测正常妊娠孕妇(正常妊娠组,22例)、子痫前期孕妇(其中轻度22例,重度20例)胎盘组织中RECK mRNA和蛋白的表达;采用明胶酶谱法检测3组孕妇胎盘组织中MMP-2的活化比例.结果 轻度、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于正常妊娠组,且重度子痫前期组RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而轻度、重度子痫前期组MMP-2的活化比例均明显低于正常妊娠组,且重度子痫前期组MMP-2的活化比例明显低于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01).正常妊娠组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA及其蛋白表达与MMP-2的活化比例均呈负相关关系(均P<0.01).结论 子痫前期孕妇胎盘组织中RECK表达异常升高,MMP-2活性受到抑制,可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程.     

妊娠期高血压胎盘组织HLA-Ⅰ类分子的表达意义及其与妊娠结局的关系

目的 探讨妊娠期高血压患者胎盘组织人白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子HLA-E、HLA-F、HLA-G表达水平与患者病情及妊娠结局的关系。 方法 选取温州医科大学附属第一医院2016年1-12月收治的81例子痫前期孕产妇为研究对象,根据严重程度分为轻度子痫前期32例和重度子痫前期49例,另以30例健康孕产妇为对照组。留取脐静脉血,采用ELISA实验测定血清可溶性HLA-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)水平;留取胎盘组织,采用免疫组织化学法测定HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白表达水平;另外,观察妊娠结局,对比不良妊娠结局和正常妊娠结局孕产妇各个指标的差异性。 结果 对照组、轻度子痫前期和重度子痫前期孕产妇血清sHLA-Ⅰ水平依次降低,任意2组间的比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、轻度子痫前期和重度子痫前期孕产妇胎盘组织HLA-E、HLA-F及HLA-G阳性细胞率和表达水平依次降低,任意2组间的比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。重度子痫前期和轻度子痫前期不良妊娠率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不良妊娠结局患者的血清sHLA-Ⅰ水平以及胎盘组织HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白表达水平均低于正常妊娠结局者,差异有统计学意义(均P<0.05)。 结论 胎盘组织HLA-E、HLA-F、HLA-G表达量下降可能均与妊娠期高血压的发生及不良妊娠结局密切相关。      

子痫前期和正常妊娠患者血清及胎盘组织中sFlt-1的表达研究

目的:探讨可溶性血管内皮细胞生长因子受体-1(sFlt-1)在子痫前期患者血清及胎盘组织中的表达及意义。方法:采用酶联免疫吸附试验法检测20例正常晚期妊娠孕妇(对照组)及40例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度20例、重度20例)血清中sFlt-1的表达;采用SP法检测两组胎盘组织中的sFlt-1蛋白的表达;应用RT-PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中sFlt-1mRNA的表达水平。结果:1子痫前期组患者血清中sFlt-1水平显著高于正常妊娠组(P<0.05);2子痫前期组患者胎盘组织中sFlt-1蛋白表达强度明显高于对照组(P<0.05);3轻度及重度子痫前期患者sFlt-1mRNA表达水平则显著高于对照组(P<0.05)。结论:sFlt-1在子痫前期患者血清表达升高、胎盘组织中sFlt-1蛋白及mRNA的表达升高,sFlt-1可能参与了子痫前期的病理生理过程。     

类风湿性关节炎患者外周血NKG2D、NKG2A及颗粒酶B表达的研究

目的 本研究旨在探讨类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血中NK细胞表达NKG2D、NKG2A及胞内颗粒酶B的水平,并且分析它们与疾病活动度（DAS28）的相关性。方法 流式细胞术检测41例RA患者和35例健康对照者外周血中NK细胞、NKG2D⁺NK细胞、NKG2A⁺NK细胞以及颗粒酶B⁺NK的表达水平;采用Spearman秩相关分析法分析它们与DAS28的相关性。结果 RA患者外周血中,NK细胞表达水平显著低于健康对照组（P=0.016）;NKG2D的表达水平显著低于健康对照组（P=0.002）,且NKG2D的表达水平与DAS28评分呈负相关（P<0.05）;NKG2A的表达水平与健康对照组之间比较差异无统计学意义（P=0.547）,且与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）;颗粒酶B的表达水平有所降低（P=0.034）,但与DAS28评分不存在显著相关性（P>0.05）。结论 活化性受体NKG2D以及胞内颗粒酶B表达的异常降低可能导致NK细胞杀伤活性的损伤,不能有效杀伤免疫效应细胞,从而促进了RA的发生、发展。     

子痫前期患者血浆IL-18和C反应蛋白的变化及其临床意义

目的通过分析子痫前期患者及正常孕妇血浆白细胞介素18（IL-18）和C反应蛋白水平,以探讨二者与子痫前期的关系。方法选择35例子痫前期患者（其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期15例）及40例正常妊娠的孕妇,在空腹时抽血3 ml,用夹心酶联免疫法检测血浆IL-18水平,采用透射比浊法检测血清C反应蛋白水平。结果子痫前期孕妇血浆IL-18水平和C反应蛋白水平明显高于正常孕妇（均P〈0.05）;重度子痫前期孕妇血浆IL-18水平明显高于轻度子痫前期孕妇（P〈0.05）,而C反应蛋白水平与轻度子痫前期孕妇相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 IL-18和C反应蛋白水平在子痫前期明显升高,IL-18与子痫前期疾病的严重性相关。     

p57kip2 基因在子痫前期患者胎盘表达的研究

目的 探讨p57kip2基因的核酸及蛋白水平在正常孕妇和子痫前期患者胎盘上的表达,探索p57kip2基因与子痫前期发病之间的关系.方法 运用免疫组织化学SP法对p57kip2基因在胎盘组织中的表达进行定位检测;通过逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对37例重度子痫前期、22例轻度子痫前期及53例正常妊娠胎盘组织中的p57kip2基因的核酸水平进行检测;通过免疫印迹法对纳入对象的p57kip2蛋白表达水平进行检测.结果 免疫组化结果显示p57kip2基因选择性表达于胎盘滋养细胞的细胞核中.RT-PCR结果显示:与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期组p57kip2基因mRNA表达无明显变化(P＞0.05),重度子痫前期组p57kip2基因的mRNA表达水平低于轻度子痫前期组[P＜0.05,95％CI:(-0.736 9,-0.095 8)].免疫印迹结果显示:与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期组p57kip2蛋白表达无明显变化(P＞0.05),但重度子痫前期组p57kiP2蛋白的表达水平低于轻度子痫前期组[P＜0.05,95％CI:(-1.441 7,-0.162 4)].结论 p57kip2基因的核酸和蛋白在重度子痫前期患者胎盘中的表达水平均低于轻度子痫前期患者,提示p57kip2基因可能参与子痫前期的病理过程.     

高原胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D的表达

目的研究高原胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达,并分析探讨宿主NK细胞受体NKG2D在胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法对41例高原胃癌患者及30例健康人,采用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况并行相关分析。结果高原胃癌患者及健康者外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为（13.26±7.51）%、（32.18±5.14）%,胃癌组明显低于正常组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高原胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调有关。高原胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

慢性乙型肝炎免疫细胞NKG2D表达在肝病重型化中的作用

目的分析乙型肝炎免疫细胞NKG2D表达与肝病重型化的关系。方法应用免疫荧光技术和流式细胞术（FCM）分选20例慢性重型乙肝（FHB）、10例无症状表面抗原携带者（ASC）、10例健康对照的外周血NK细胞，并定量分析NKG2D表达。应用免疫组化SP法分析20例慢性乙肝（CHB）（轻度8例，其中G1级6例，G2级2例；中度7例，重度5例，其中G3级9例，G4级3例）、11例FHB肝组织内细胞毒细胞NKG2D的表达差异。结果经FACS可获得高纯度、高活性的NK细胞。FHB患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量高于ASC和正常对照组，差异有显著性（P〈0．01）。免疫组化结果显示，FHB组肝脏免疫细胞NKG2D蛋白表达量分别高于CHB（G3、G4）组、CHB（G1、G2）组和正常对照组，差异有显著性（P〈0．01）。CHB（G3、G4）组高于正常对照组（P〈0．01），但CHB（G1、G2）组分别与CHB（G3、G4）组和正常对照组比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论乙型肝炎外周血NK细胞和肝组织内细胞毒细胞NKG2D过度表达与重型肝炎发生相关。     

子痫前期孕妇外周血NOX2和胎盘组织中NOX2、ROS的表达及其临床意义

目的 探讨子痫前期孕妇外周血、胎盘组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)及胎盘组织中活性氧（ROS）的表达及其临床意义。方法 选取2021年3月—2022年10月在徐州医科大学附属徐州妇幼保健院就诊的子痫前期孕妇60例，其中早发型子痫前期孕妇30例（早发组），晚发型子痫前期孕妇30例（晚发组），另取同期在该院就诊的健康孕妇30例作为对照（正常组）。检测各组外周血NOX2、胎盘组织中NOX2 mRNA相对表达量和ROS表达。结果 早发组外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2mRNA相对表达量、ROS阳性表达率均高于对照组和晚发组（P <0.0125）；晚发组与对照组外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2 mRNA相对表达量、ROS阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。早发组≥30岁孕妇外周血NOX2高于<30岁孕妇（P <0.05）。早发组不同体质量指数、孕妇类型、严重程度孕妇外周血NOX2、胎盘组织NOX2阳性表达率、NOX2 mRNA相对表达量、ROS阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P>0....     

M2受体自身抗体在重度子痫前期患者中的表达

目的：检测M2受体自身抗体在重度子痫前期患者中的表达，探讨其临床意义。方法：选择2013年1月至2015年1月在首都医科大学附属朝阳医院妇产科收治的78例重度子痫前期孕妇为研究对象，并取同期收治的78例正常单胎足月孕妇和60例未妊娠妇女作为对照。采用ELISA方法检测3组妇女血浆中的M2受体自身抗体水平，并分析其在重度子痫前期中的临床意义。结果：重度子痫患者M2受体自身抗体阳性率32.1%(25/78)，正常妊娠组为10.3%(8/78)，两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)；未妊娠组阳性率8.3%(5/60)，与正常妊娠组比较差异无统计学意义(P>0.05)；此外，重度子痫前期患者血清中肌酸激酶浓度为(101.49±142.75) U/L，而正常妊娠组肌酸激酶含量为(57.94.±31.64) U/L，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：M2受体自身抗体在重度子痫前期患者中的表达明显增高，可能与其发病有关。     

原发性肝癌患者外周血自然杀伤细胞受体NKG2D的表达及意义

目的 探讨原发性肝癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞受体NKG2D表达的变化,并分析其对NK细胞杀伤活性的影响.方法 用流式细胞仪分析20例原发性肝癌、23例乙型肝炎后肝硬化、20例慢性乙型肝炎及20名健康者的外周血NK细胞数量及其NKG2D的表达情况,并用酶标仪检测各组样本NK细胞的细胞毒活性.结果 原发性肝癌患者的NK细胞杀伤率、NK细胞NKG2D的表达率(中位数)、NKG2D+NK细胞数(中位数)、NK细胞中NKG2D的表达水平(中位数)及NK细胞数[(25±7)%、6%、0.7×107/L、15、(1.1±0.6)×108/L]均明显低于正常组[(63±7)%、36%、8.3×107/L、116、(27±1.1)×108/L]和乙肝组[(41±8)%、16%、2.8×107/L,49、(1.9±1.1)×108/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05);与肝硬化组[(29±10)%、7%、0.6×107/L、29、(1.5±1.2)×108/L]比较也略低,但只有NK细胞NKG2D的表达水平两组差异有统计学意义(P＜0.05),其余两组间差异均无统计学意义(均P＞0.05).NK细胞的活性与NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达率、NKG2D+NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达水平均呈正相关关系(r=0.657、0.770、0.927、0.734,均P＜0.01).结论 原发性肝癌患者外周血NK细胞活性及其细胞表面NKG2D的表达明显降低,NKG2D的表达与NK细胞的活性密切相关,提高NK细胞表面NKG2D的表达水平可为原发性肝癌的过继免疫治疗开创新的思路.     

TGFβ1，Bcl-2与妊娠期高血压疾病胎盘细胞凋亡的关系

目的:研究妊娠期高血压疾病患者胎盘组织的细胞凋亡以及TGFβ1和Bcl-2与细胞凋亡的关系,进一步探讨妊娠期高血压疾病发病机制.方法:收集妊娠期高血压疾病患者胎盘组织45例(15例妊娠期高血压,15例子痫前期轻度,15例子痫前期重度)和正常孕妇对照组45例.应用免疫组织化学染色法(SP法)检测胎盘绒毛滋养层TGFβ1和Bcl-2蛋白的表达;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测胎盘绒毛组织中滋养层细胞凋亡情况,并测定凋亡率.结果:妊娠期高血压疾病组较对照组胎盘绒毛组织中滋养层细胞凋亡率及TGFβ1表达明显增高,而Bcl-2表达明显减低(均P＜0.01).随病情加重,妊娠期高血压组、子痫前期轻度组、子痫前期重度组细胞凋亡率及TGFβ1表达呈上升趋势,Bcl-2表达呈下降趋势(均P＜0.01).子痫前期重度组、子痫前期轻度组胎盘绒毛细胞凋亡发生率与TGFβ1呈正相关;与Bcl-2表达呈负相关(均P＜0.05).子痫前期重度组、子痫前期轻度组TGFβ1与Bcl-2表达呈负相关(均P＜0.05).结论:妊娠期高血压疾病胎盘细胞凋亡率明显增高,TGFβ1在滋养层细胞表达增高,Bcl-2在滋养层细胞表达降低,TGFβ1和Bcl-2平衡失调可能导致妊娠期高血压疾病的发生.     

食管癌患者NKG2D+CD8+NKT细胞及sMICA的检测

目的探讨食管癌患者外周血NKG2D+CD8+NKT细胞百分比及血清sMICA含量在免疫逃逸中的作用及临床意义。方法流式细胞仪测定80例患者(其中64例术后患者)及72例健康对照组NKG2D+CD8+NKT细胞百分比;酶联免疫吸附法测定sMICA含量。结果患者NKG2D+CD8+NKT细胞百分比低于对照组(P<0.01);术后低于对照组(P>0.05);术前低于术后(P<0.01);在TNM分期中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次降低(P<0.01)。患者sMICA明显高于对照组(P<0.01);术后高于对照组(P>0.05);术前高于术后(P<0.01);在TNM分期中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次增高(P<0.01)。患者sMICA对NKG2D+CD8+NKT细胞有抑制作用(P<0.01)。结论 NKG2D+CD8+NKT细胞及sMICA参与食管癌的免疫逃逸,两者的测定有助于食管癌的免疫治疗、早期诊断、临床分期及判断手术疗效。