不同来源成体骨髓间充质干细胞调控免疫功能的比较研究

目的 比较霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者与正常人骨髓间充质干细胞(MSC)的免疫调节能力.方法 获取正常人、HL和NHL患者的骨髓MSC,用低血清培养液进行培养.采用流式细胞仪检测骨髓MSC的免疫表型;应用酶联免疫吸附试验检测骨髓MSC培养上清液中转化生长因子β1(TGF-β1)的水平;采用Transwell培养体系检测骨髓MSC抑制T淋巴细胞增殖的能力;应用混合淋巴细胞反应检测骨髓MSC抑制异体T淋巴细胞增殖的能力.结果 正常人、HL和NHL患者骨髓间充质干细胞具有相似的细胞形态和免疫表型,均具有分泌TGF-β1的能力,均不表达HLA-DR和共刺激分子CD80、CD86和CD40.HL和NHL患者骨髓MSC具有抑制异体T淋巴细胞增殖的能力,这种抑制能力随着MSC细胞数量的增加而增强,并可以被抗TGF-β1抗体所逆转.体外诱导分化后的骨髓MSC仍然具有抑制异体T淋巴细胞增殖的能力.结论 HL和NHL患者骨髓MSC具有和正常成人骨髓MSC相同的免疫调控能力,这种抑制T淋巴细胞增殖的能力不随着其体外诱导分化而改变.     

大鼠睾丸支持细胞对骨髓问充质干细胞免疫抑制作用的影响

目的探索睾丸支持细胞（Sertoli细胞）对骨髓间充质干细胞（BMSC）免疫抑制作用的影响,为二者在移植免疫中的联合应用提供思路。方法二步酶解法处理大鼠睾丸,分离Sertoli细胞;Percoll法分离大鼠BMSC;Ficoll法分离淋巴细胞;刀豆蛋白A（ConA）刺激进行T细胞转化试验;将Sertoli细胞、BMSC和Sertoli细胞＋BMSC分别加入未经ConA处理的静止淋巴细胞培养体系和经ConA处理后的T细胞转化体系,MTT法测定淋巴细胞增殖情况,观察BMSC、Sertoli细胞或二者共培养对T细胞活化、增殖的影响。结果 BMSC、Sertoli细胞以及二者共培养对静止的淋巴细胞无明显作用。BMSC、Sertoli细胞及二者共培养对T细胞的活化、增殖均有明显的抑制作用,且Sertoli细胞与BMSC共培养时抑制作用呈现一定的协同性。结论 BMSC和Sertoli细胞均具有负性免疫调节作用,二者共培养可以进一步增强BMSC的免疫抑制效应。     

同种大鼠骨髓间充质干细胞诱导调节性B淋巴细胞的免疫负调节作用

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)诱导调节性B淋巴细胞(Breg细胞)的免疫负调节作用.方法 取DA大鼠MSC和Lewis大鼠B淋巴细胞共培养后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MSC和B淋巴细胞混合培养组上清液中白细胞介素10(IL-10)的水平和分泌因子的变化;采用流式细胞技术分析B淋巴细胞增殖、凋亡、表型的变化和对抗原特异性T淋巴细胞增殖的影响,采用激光共聚焦显微镜观察Breg细胞对免疫复合物吞噬能力的变化.结果 MSC成功诱导产生高分泌IL-10的Breg细胞产生,表型为CD19+ CD1d+ CD5+,MSC显著抑制B淋巴细胞的增殖,Breg细胞能抑制抗原特异性T淋巴细胞的增殖,并增加对免疫复合物的吞噬能力.结论 MSC诱导的Breg细胞具有明显的免疫负调节作用.     

多发性骨髓瘤患者间充质干细胞的免疫原性及其对免疫功能的调控作用

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)患者的骨髓间充质干细胞(MSC)的免疫原性及其调控免疫的功能和机制.方法 获取MM患者的骨髓MSC,在低血清培养液中培养和扩增.流式细胞仪检测免疫表型;酶联免疫吸附试验检测MSC培养上清液中细胞因子的分泌水平;混合淋巴细胞反应检测骨髓MSC抑制异体T淋巴细胞增殖的能力;流式细胞仪检测MSC对树突状细胞(DC)吞噬功能的影响;混合淋巴细胞反应检测MM骨髓MSC抑制DC介导的异体T淋巴细胞增殖能力.结果 MM患者的MSC不表达HLA-DR和共刺激分子CD80、CD83、CD86和CD40.MM患者的MSC通过分泌转化生长因子β1 (TGF-β1)和肝细胞生长因子(HGF)抑制异体T淋巴细胞的增殖.MM患者的MSC具有抑制DC吞噬作用的功能;MM骨髓MSC抑制DC分泌白细胞介素12(IL-12),并可以抑制DC介导的异体T淋巴细胞增殖.结论 MM骨髓MSC具有低免疫原性及体外调节免疫的功能,该免疫调节功能与其分泌细胞因子有关.     

雷帕霉素对大鼠髓源性树突状细胞表型和功能的影响

目的 观察雷帕霉素(RAPA)对树突状细胞(DC)表型和功能的影响.方法 诱导分化Lewis大鼠骨髓源性DC,第6天同时加入脂多糖(LPS)和10μg／L或100 μg/L RAPA,48 h后检测共刺激分子、细胞凋亡、上清液白细胞介素(IL) -10和IL-12水平;混合淋巴细胞培养观察DC刺激Brown Norway大鼠T淋巴细胞增殖能力.结果 RAPA能抑制DC成熟,共刺激分子的上调显著受抑,细胞凋亡增加,100 μg/L RAPA组DC凋亡率达53％.DC在脂多糖作用下分泌IL-10、IL-12上升至( 1533±117)、(2575 ±58) ng/L,但同时加入100μg/L RAPA后,两者下降至(330±159)、( 245±63) ng/L.RAPA处理的DC对T淋巴细胞增殖有抑制作用.结论 雷帕霉素能抑制DC成熟并诱导其凋亡,RAPA处理的DC分泌细胞因子降低,且抑制T淋巴细胞增殖.     

大鼠牙髓干细胞、外胚间充质干细胞的细胞表型的实验研究

目的：检测组织特异性分化标记在大鼠牙髓干细胞（DPSC）、外胚间充质干细胞（EMSC）及骨髓间充质干细胞（BMSC）中的表达,探讨三者细胞表型的异同。方法通过免疫组化检测大鼠DPSC、EMSC、BMSC三种细胞的表型;RT-PCR检测DPSC、EMSC、BMSC的DSPP mRNA表达。结果免疫组化结果显示,三种细胞对于不同细胞的表面标志有不同程度的表达;RT-PCR显示,DSPP的mRNA在大鼠DPSC、EMSC中不表达,在BMSC中弱表达。结论 DPSC与EMSC的细胞表型具有一定的相关性和延续性。     

二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠骨髓间充质 干细胞缺血清凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达 的影响

目的观察脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸（dimeLhyloxalglycine,DM0G )对无血 清培养引起的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡影响及其对凋亡调控蛋白Bci-2/Bax表达的影响。方法 分离小鼠股骨及胫骨骨髓腔中的单个核细胞,传代后应用流式细胞仪进行细胞表型检测和三系分 化以鉴定骨髓间充质干细胞。流式细胞仪TUNEL法观察DMOG作用于细胞后对细胞无血清培养凋 亡的对抗作用,WesLerm bloL检测DM0G对凋亡调控蛋白Bci-2/Bax蛋白表达的影响。结果实验所 获的单个核细胞通过流式细胞仪细胞表型鉴定和三系分化鉴定证实为骨髓间充质干细胞。与无血清 造模组相比,二甲基乙二酰基甘氨酸能明显降低骨髓间充质干细胞因缺血清导致的凋亡率（p<0.05 ),并上调凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白表达（P <0. 05 ),抑制凋亡促进蛋白Bax蛋白表达（P <0. 05 )。结论脯氨酸羟化酶抑制剂阅酝0郧能抑制骨髓间充质干细胞因缺血清培养引起的凋亡。对凋亡调 控蛋白Bci-2/Bax表达的调控可能是DM0G对抗骨髓间充质干细胞凋亡的重要机制。     

骨髓间充质干细胞对急性肾损伤大鼠白细胞介素4、干扰素γ的影响

T淋巴细胞在缺血再灌注损伤(IRI)所致的急性肾小管坏死(ATN)的发生和发展中起着关键性作用[1,2],其机制尚未完全阐明.研究显示.Th1/Th2极向分化偏移导敛细胞因子失衡发挥着重要作用,以白细胞介素4(IL-4)、干扰素(IFN)γ为主导.IL-4能保护缺血组织、而IFN-γ则促进损伤发生[2].骨髓间充质干细胞(BMSC)具有调节T淋巴细胞分化功能[3,4].而有关BMSC对肾IRI动物模型IL-4与IFN-γ的影响尚未检索到相关报道.本研究采用大鼠肾IRI模型,观察BMSC对肾脏表达IL-4与IFN-γ的影响,旨在为BMSC治疗机制的阐明提供实验依据.     

骨髓间充质干细胞诱导肝移植术后免疫耐受的研究

目的研究骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cell，BMSC）的免疫调节特性，评价其诱导肝移植术后免疫耐受的效果。方法贴壁分离法分离培养BMSC并鉴定其免疫表型。分别检测单纯的和用200U／ml干扰素-γ（interferon-γ，INF-γ）干预过的BMSC PDL-1、CD54、CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达，并以此为调节细胞进行单向混合淋巴细胞实验。以CFDA标识BMSC观察其在体内向肝脏归巢情况。两袖套法建立Lewis-Brown Norway（BN）大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。实验分2组，对照组行原位肝移植术＋输注生理盐水，实验组行原位肝移植术＋输注BMSC。观察术后一般情况、肝功能、肝脏病理、微嵌合体形成情况。结果培养出的BMSC细胞纯度高。INF-γ能上调CD54、PDL-1、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达，CD40、CD80、CD86均为阴性表达。BMSC呈剂量依赖性抑制淋巴细胞增生，INF-γ能增强其抑制作用。BMSC在肝脏实质内有多处定居。术后所有大鼠存活均大于14天。与对照组比，实验组大鼠术后一般情况好，嵌合体形成明显，肝功能改善明显、肝脏免疫排斥轻。结论INF-γ能增强BMSC对淋巴细胞增殖的抑制作用，BMSC能诱导肝移植免疫耐受，减轻排斥反应。这为以后BMSC应用到临床提供有利证据。     

骨髓间充质干细胞对异种T淋巴细胞增殖的影响及其机制

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对异种混合T淋巴细胞增殖的影响及其机制.方法 采用密度梯度离心法分离豚鼠MSCs;免疫组织化学法检测MSCs膜表面CD45和CD44的表达;流式细胞术检测MSCs周期;CCK-8法检测和绘制MSCs的生长曲线;观察MSCs和其培养上清对体外异种淋巴细胞混合培养的影响.结果 MSCs膜表面CD45表达阴性、CD44表达阳性;分析MSCs周期显示,MSCs中20%左右处于S期、G2期和M期,其余80%左右均处于G0期和G1期.MSCs和其培养上清均能明显抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05),加入白细胞介素2(IL-2)能逆转MSCs的抑制作用(P<0.05).结论 MSCS的鉴定可根据细胞形态.膜表面标志物来确定.MSCS及其培养上清对异种淋巴细胞混合培养的增殖反应有显著的抑制作用.     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

Frequency of complications of manipulation of the spine

Summary A survey of all members of the Swiss Medical Association of Manual Medicine was undertaken for the year 1989. Informative data were given by 425 respondents on the frequency of complications of manipulation as related to the spine. The number of thoraco-lumbar manipulations during 1989 (225 working days) was 805 for each respondent, and the number manipulations of the cervical spine 354. Thus, the total number of thoraco-lumbar manipulations was 342 125, and the total number of cervical manipulations was 150 450. The overall incidence of side-effects of transient complications due to cervical spine manipulation such as disturbance of consciousness or radicular signs was 1: 16716. Seventeen patients (ratio 1: 20 125) after manipulation of the lumbar spine presented, in addition to increased pain, a transient sensorimotor deficit with precise radicular distribution. Nine of the 17 patients (ratio 1: 38013) developed a progressive radicular syndrome with sensorimotor defict and radiologically verified disc herniation and had to be referred for surgery. Side effects and complications of cervical and lumbar spine manipulation are rare. Taking in to account the yearly number of manipulations performed by a single physician in Switzerland and the rate of complications, it can be calculated that a physician practicing manual medicine will encoutner one complication due to manipulation of the cervical spine in 47 years and one complication due to lumbar spine manipulation in 38 years of practice. However, it is important that a careful clinical assessment is carried out to avoid complications due to manipulation carried out on the basis of inappropriate indications. Furthermore, the decision as to which technique is indicated for any particular functional disorder of the spine should be made on the basis of rational criteria resting on a knowledge of clinical biomechanics, functional anatomy and neurophysiology. The authors recommend a prospective morbidity study to be carried out among physicians, chiropractors, osteopaths and physiotherapists, taking into account the different indications and therapeutic techniques in relation to complications.     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

静脉皮瓣成活过程的实验研究

我们以兔为实验动物，通过微循环观察及血管内灌注填充剂，研究静脉皮瓣的成活过程。这一过程可分为２个阶段。第一阶段（术后７２小时内）为静脉血营养期：静脉血由静脉干通过小静脉吻合支、微静脉干间吻合支及终末微静脉吻合支回流至另一静脉。术后４８小时内毛细血管内无血液运动。第二阶段（术后７２小时～６周）为动脉血营养及血管改造期：术后７２小时新生血管开始向皮瓣内生长。术后７２无皮瓣动脉同主要来自皮瓣周围正常组织内的新生血管吻合使动脉血分布于整个皮瓣，这是静脉皮瓣成活的关键     

Management of sequelae of septic arthritis of hip

A nine years old boy, who had suffered septic arthritis at the age of two years and presented now with a limp, hip instability, leg length discrepancy. The patient was treated by adductor tenotomy and upper tibial pin traction. When head remnant reached the level of the acetabulum, open reduction and Pemberton osteotomy was done to achieve cover of the femoral head. The purpose of this report is to highlight the six years followup of reconstruction of sequale of septic arthritis of hip joint.     

Catamnestic study of childless patients of the Department of Andrology of Hamburg-Eppendorf University Hosptal

By means of a questionnaire, we carried out a catamnestic study of 1419 patients with a complaint of infertility. 27 per cent of the replying patients reported about the birth of children. 343 patients (38%) reported about one or more conceptions. Compared with previous studies, this investigation shows better results of therapies. We interprete this to be caused in better possibilities of therapy, esp. the Kallikrein therapy.     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

骨盆骨折的治疗进展

对于骨盆骨折的治疗 ,传统方法以卧硬板床 ,股骨髁上持续骨牵引 ,骨盆兜等保守治疗为主 ,常常引起下肢不等长 ,骶髋痛 ,步态失常等而严重影响生活质量 ,同时长期卧床易引发肺部感染、褥疮、应激性溃疡、泌尿系统结石等并发症而危及生命。下面就骨盆骨折的治疗进展作一综述。1     

Oddi括约肌肌电活动实验模型的建立

目的建立研究Oddi括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法将双极金属钩状电极通过浆膜层置入Oddi括约肌，记录不同条件干预下家兔的Oddi括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果不同条件干预下的家兔Oddi括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔Oddi括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究Oddi括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。