T淋巴细胞在缺血-再灌注损伤中的重要作用

<正>缺血-再灌注损伤(IRI)可在多种临床环境(器官移植、分段切除)中发生,可以导致缺血器官功能障碍和衰竭。虽然先天性免疫反应在IRI中发挥重要作用,但是T淋巴细胞也参与IRI的发病过程,包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、γT淋巴细胞等。尤其是抗原特异性T细胞群体,如效应性CD4+T淋巴细胞,包括辅助性T(T helper,Th)1细胞、Th17细胞、调节性T细胞(Treg),在IRI过程可通过抗原非依赖适应性反应激活炎症免疫反应,通过分泌细胞因子和表达共刺激分子,促进或抑制先天性免疫反应或促进组织修     

环瓜氨酸多肽对类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞分泌INF-γ及IL-4的影响

目的观察环瓜氨酸多肽(CCP)对类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞分泌INF-γ、IL-4的影响。方法分离培养24例RA患者和16例健康人外周血淋巴细胞,分为以下3组处理,RA空白对照组:RA患者外周血淋巴细胞分离培养不加任何药物干预;RA CCP组:RA患者外周血淋巴细胞加CCP干预(CCP终浓度为20μg/ml);健康空白对照组:健康人外周血淋巴细胞分离培养不加任何药物干预。上述各组细胞培养72 h后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中IFN-γ及IL-4水平。结果与健康空白对照组外周血T淋巴细胞分泌的IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4相比,RA空白对照组IFN-γ水平升高(P0.05),IL-4水平下降(P0.01),IFN-γ/IL-4升高(P0.01);与RA空白对照组相比,RA CCP组IFN-γ水平进一步升高(P0.05),IL-4水平进一步下降(P0.05),IFN-γ/IL-4进一步升高(P0.01)。结论 CCP对RA患者外周血T淋巴细胞分泌Th1及Th2型细胞因子IFN-γ及IL-4有明显的调节作用,可能在RA发病机制中起重要的作用。     

骨髓间充质干细胞对小鼠缺血-再灌注急性肾损伤中IL-10和TNF-α表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠缺血-再灌注急性肾损伤(IR-AKI)过程中白细胞介素(IL)-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法将小鼠随机分为假手术组(对照组)、缺血-再灌注损伤组(IRI组)和BMSC治疗组(BMSC组),每组6只。检测各组小鼠肾功能及病理学改变;检测各组小鼠肾组织细胞凋亡情况;检测各组小鼠血清IL-10和TNF-α的表达水平。将小鼠BMSC随机分为对照组和缺氧复氧组(IRI组),检测各组细胞上清IL-10和TNF-α的表达水平。结果对照组小鼠肾组织结构正常,IRI组肾组织结构损伤严重,BMSC组损伤较轻。与对照组比较,IRI组和BMSC组肾组织损伤评分较高;与IRI组比较,BMSC组小鼠肾组织损伤学评分较低(均为P0.05)。与对照组比较,IRI组小鼠血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平升高,BMSC组BUN水平升高;与IRI组比较,BMSC组小鼠Scr和BUN水平下降(均为P0.05)。IRI组肾组织凋亡细胞数量多于BMSC组和对照组,BMSC组凋亡细胞数量多于对照组(均为P0.05)。与对照组比较,IRI组小鼠血清IL-10和TNF-α水平均升高,BMSC组小鼠血清TNF-α水平下降,IL-10水平升高;与IRI组比较,BMSC组小鼠血清IL-10和TNF-α水平均下降(均为P0.05)。IRI组细胞上清IL-10、TNF-α水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P=0.080、0.627)。结论 BMSC输注可降低肾IRI及炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α表达,而非促进IL-10的表达。     

下调LSD1表达对于外周血Th1/Th2分化格局的影响

目的 探讨shLSD1转染人外周血CD4+T细胞后,LSD1的脱甲基酶活性对辅助性T细胞亚群1和亚群2(Th1/Th2)分化格局的影响.方法 收集并利用磁珠分离纯化人外周血CD4+T细胞,PHA刺激活化48 h后,shLSD1和化学抑制剂TCP抑制2种方法抑制LSD1的表达,采用流式细胞术和RT-PCR对人外周血T淋巴细胞亚群及CD4+T细胞功能亚型Th1、Th2的代表细胞因子IFN-γ、IL-4进行检测.结果 体外分离培养外周血CD4+T细胞并用转染shLSD1或TCP处理48 h后,流式细胞对胞内基因表达检测显示,shLSD1和TCP组细胞IFN-γ+T细胞比例(26.13±1.89)％和(27.01±1.18)％明显高于对照组(14.67±0.65) ％(P ＜0.05),而IL-4+T细胞比例与对照组无显著差异(P＞0.05);RT-PCR检测显示,shLSD1和TCP组IFN-γ mRNA表达明显高于对照组(P＜0.05),IL-4基因表达则没有改变(P＞0.05).结论 LSD1可以引起CD4+T细胞向Th1/Th2分化方向改变,促进Th1方向分化,对Th2方向无明显影响.     

人脂肪组织与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较

目的 比较脂肪来源间充质干细胞(ADAS)和骨髓来源间充质干细胞(BMSC)的生物学特性.方法 分离ADAS和BMSC,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌的相关因子,分别检测它们对T淋巴细胞的活化、细胞周期、增殖及凋亡的作用.结果 BMSC和ADAS在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异;在增殖速率上,ADAS群体倍增时间为28 h,显著高于BMSC的39 h(P＜0.05);ADAS和BMSC同样具有抑制T淋巴细胞增殖的能力,在有丝分裂原刺激和混合淋巴细胞反应的T淋巴细胞增殖中,这种抑制作用都具有剂量依赖性,在1:2时抑制作用极强,但是在1:100时这种抑制作用基本消失;在共培养时,ADAS和BMSC都可以使绝大多数的T淋巴细胞被抑制在G0/G1期,同时也可以抑制T淋巴细胞的早期活化,但是ADAS的上述作用均比BMSC弱;ADAS并不具有抑制T淋巴细胞凋亡的作用,而在TH0细胞向TH 1细胞或TH2细胞分化中所起的作用基本相似,主要抑制TH0细胞向TH1细胞(表达IL-2和IFN-γ的T淋巴细胞)的分化,而对向TH2细胞(表达IL4和IL-10的T淋巴细胞)分化没有明显的影响.结论 ADAS与BMSC具有类似的免疫调节作用,在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓组织的10倍以上,因此ADAS较难以获得的BMSC更有广泛的应用前景.     

本期导读

<正>抗原特异性T细胞如何参与缺血-再灌注损伤(IRI)?本刊特邀中国工程院院士、南京医科大学第一附属医院肝脏外科研究所所长王学浩教授就T淋巴细胞在缺血-再灌注损伤中的重要作用作一述评。王教授在文中阐明了T淋巴细胞在IRI中的活化机制、辅助性T17细胞与调节性T细胞在IRI中的作用。T淋巴细胞参与多种器官IRI发病过程,且在不同组织和疾病的不同阶段发挥不同的生物学功能。精准的T淋巴细胞     

CD8+CD28-T细胞在大鼠肾脏缺血预处理保护效应中的作用

Burne-Taney等[1]研究表明造成肾脏缺血组织损伤的T淋巴细胞功能减退起到了类似缺血预处理样作用,提出T淋巴细胞中可能存在对肾脏缺血再灌注损伤(IRI)起保护作用的亚群,其中造成缺血组织损伤的免疫细胞主要是表达CD28+的CD4+T细胞、NKT细胞等,而起保护作用的T细胞亚群尚不清楚.我们在建立大鼠肾脏热IRI模型的基础上通过对外周血免疫抑制性细胞CD8+CD28-T的检测探讨其在肾脏缺血预处理(IP)中的作用.     

丙泊酚对肺癌患者外周血IL-12、IFN-γ及IL-4的影响

目的探讨丙泊酚对肺癌患者外周血细胞因子白细胞介素(IL)-12、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4的影响。方法30例行非小细胞型肺癌肺叶切除术患者随机分为丙泊酚(IV)组和异氟醚(IH)组,每组15例。分别于麻醉诱导前(T0)、麻醉诱导后10min(T1)、切皮后1h(T2)、停药即刻(T3)、术后1h(T4)及术后24h(T5)采集肘静脉血,测定血清IL-12、IFN-γ、IL-4及皮质醇(Cor)浓度。结果与T0时比较,IV组T5时IL-12、IFN-γ/IL-4及T4、T5时IFN-γ明显增高(P<0.05或P<0.01);且T5时IL-12、IFN-γ/IL-4及T4、T5时IFN-γ均高于IH组(P<0.05)。两组IL-4均有增高趋势,但组内、组间差异无显著意义。与T4时相比,T5时IV组IFN-γ、IFN-γ/IL-4增高明显(P<0.05)。结论丙泊酚可以促进外周血IL-12、IFN-γ的分泌,升高IFN-γ/IL-4比值,诱导围术期Ⅰ型辅助性淋巴细胞(Th1)反应,有利于抗肿瘤、抗感染免疫。     

左卡尼汀对大鼠肾缺血再灌注损伤及Nrf2表达的影响

左卡尼汀可清除自由基,对缺血再灌注损伤(IRI)具有保护作用[1].本研究旨在观察左卡尼汀对大鼠肾IRI的保护作用,探讨其对核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响.     

T_H17型细胞的分化及调节在自身免疫性疾病和排斥反应中的作用

初始T淋巴细胞被树突状细胞活化后,在体内不同的微环境下可分化成为功能及表型不同的效应性T淋巴细胞和调节性T淋巴细胞(Treg细胞).当有白细胞介素12(IL-12)存在时,初始T淋巴细胞分化为T_H 1型细胞,主要分泌IL-12、γ干扰素(IFN-γ)及特异性表达转录因子T-bet;有IL-4存在时,初始T淋巴细胞分化为T_H2型细胞,主要分泌IL-4、IL-10,特异性表达转录因子GATA-3;在转化生长因子β(TGF-β)单独存在时,初始T淋巴细胞分化为Treg细胞,特异性表达Foxp3.     

移植免疫耐受中Th1/Th2细胞因子对CD4~+T细胞功能的影响

目的:探讨移植免疫耐受中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素4(IL-4)等Th1/Th2细胞因子对CD4+T细胞功能的影响。方法:取行心脏移植后的同种异系受体小鼠的脾脏,从中提取CD4+T细胞,测定其细胞增殖活性,并测定其IFN-γ、IL-10、IL-4等细胞因子的分泌水平。提取移植免疫耐受脾脏的CD4+T细胞进行体外细胞培养,使用抗IFN-γ单克隆抗体、抗IL-10受体单克隆抗、抗IL-4单克隆抗中和相应细胞因子以测定上述细胞因子对CD4+T细胞功能的影响。结果:移植免疫耐受受体的CD4+T细胞较发生排斥反应的CD4+T细胞具有更低的细胞增殖活性。移植免疫耐受受体的CD4+T细胞分泌更低水平的IFN-γ,并分泌更高水平的IL-10、IL-4。使用相应抗体中和IFN-γ、IL-10后,移植免疫耐受CD4+T细胞的细胞增殖活性明显升高;而中和IL-4后,移植免疫耐受CD4+T细胞的增殖活性反而降低。结论:移植免疫耐受中IFN-γ、IL-10对于维持CD4+T细胞的低增殖活性具有重要作用,而IL-4不但不能维持CD4+T细胞的低增殖活性,反而升高了增殖活性。     

血栓痔病人外周血Th1／Th2分析

为探讨血栓痔发病与T淋巴细胞活化及释放的Th1／Th2细胞因子失衡状态的关系,对32例血栓痔（实验组）和30例健康人（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,经PMA诱导培养后,用流式细胞术测定CD3^＋标记T细胞内自细胞介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）含量和CD8^-标记T细胞内IL-4和IFN-γ的含量,进行比较分析,从而估计Th1／Th2细胞的漂移状态。结果显示,实验组的IL-4和IFN-γ含量均显著高于对照组（P〈0．001）;且实验组IL-4^＋含量高于IFN-γ含量（P〈0．05）。结果表明,血栓痔病人发病时,体内的T淋巴细胞免疫系统被激活,且以Th2细胞为主,这种Th1／Th2细胞因子失衡可能在血栓痔发病过程中起到重要作用。     

地塞米松预处理减轻肾缺血再灌注损伤

目的探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）对小鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法建立小鼠肾缺血再灌注损伤模型。18只雄性C57BL／6小鼠随机分为3个组（n=6）,分别为假手术组（Sham）、肾缺血再灌注损伤模型组（IRI）和DEX预处理组。Sham和IRI组缺血前60min予生理盐水（腹腔注射）,DEX组缺血前60min给予DEX（4mg／kg）,IRI组和DEX组血管夹夹闭左侧肾蒂,置于32℃温箱后1h松开血管夹,去除右肾。Sham组操作同上,但不夹闭左侧肾蒂,再灌注24h后处死小鼠,收集血清和肾脏标本。PAS染色后观察肾脏病理形态学变化,PCR检测白细胞介素6（interleukin6,IL-6）、干扰素γ（interferonγ,IFN-γ）和肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactorOt,TNF-a）Westernblotting检测pAkt和总的Akt。结果与Sham组相比,IRI组血清肌酐和血尿素氮明显升高。病理检查可见肾脏内肾小管上皮细胞明显肿胀坏死、蛋白管型形成明显,还可观察到炎症细胞浸润明显增加。PCR显示IL-6、IFN-γ和TNF-a mRNA水平明显上调,Westernblotting显示p-Akt蛋白表达量明显增加,但Akt蛋白表达量无明显差异。与IRI组相比,DEX治疗组血清肌酐、血尿素氮明显下降,肾小管上皮细胞肿胀坏死减轻、炎症细胞浸润减少,IL-6、IFN-γ和TNF-a表达降低,p-Akt表达减少,但Akt蛋白表达量无明显差异。结论DEX预处理可通过抑制Akt信号通路激活,从而抑制炎症反应,从而减轻肾缺血再灌注损伤。     

Th1/Th2细胞因子对器官移植排斥反应的影响

目的:研究Th1/Th2细胞因子对同种异系小鼠心脏移植存活时间的影响.方法:使用野生型BALB/c小鼠作为供体,野生型B6小鼠、IL-4基因去除B6小鼠及IFN-γ基因去除B6小鼠作为受体,行腹部异位小鼠心脏移植.部分IL-4基因去除小鼠、IFN-γ基因去除小鼠联合应用α-半乳糖神经酰胺(α-galactosylceramide,α-GalCer),以获得更强的Th1/Th2偏移.比较移植物存活时间.向野生型、IL-4基因去除及IFN-γ基因去除B6小鼠腹腔内注射供体小鼠脾细胞,提取受体小鼠脾脏CD8<'8>T细胞行淋巴细胞毒试验.结果:IFN-γ基因去除组小鼠的移植物存活时间为(6.40±0.55)d,联合应用α-GalCer组移植物存活时间为(8.00±1.15)d.IL-4基因去除组小鼠的移植物存活时间为(8.00±1.00)d,联合应用α-GalCer组移植物存活时间为(8.60±1.34)d.淋巴细胞毒试验显示IFN-γ基因去除小鼠的CD8+T细胞毒性明显增强.结论:Th1/Th2细胞因子与排斥反应之间并不存在简单的对应关系.     

西罗莫司和环孢素A对Th17细胞和调节性T淋巴细胞分化影响的比较

目的 比较西罗莫司(SRL)和环孢素A(CsA)对体外诱导CD4+T淋巴细胞向Th17和调节性T淋巴细胞分化的影响.方法 使用抗CD3和抗CD28单克隆抗体(简称抗CD3单抗和抗CD28单抗)刺激CD4+T淋巴细胞,并在培养体系中分别加入转化生长因子β(TGF-β);TGF-β+白细胞介素6(IL-6);TGF-β+IL-6+SRL;TGF-β+IL-6+CsA.72 h后用流式细胞术检测细胞内Foxp3和IL-17的表达水平,观察CD4+T淋巴细胞的分化情况及SRL和CsA对CD4+T淋巴细胞体外分化的影响.结果 在经抗CD3单抗和抗CD28单抗刺激后,TGF-β可诱导Foxp3+细胞(调节性T淋巴细胞,Treg)的增殖与分化,而TGF-β+ID6可诱导Th17细胞的增殖与分化.在培养体系中加人SRL和CsA,均可使Th17细胞的增殖与分化减少;SRL可促进Treg的增殖与分化,而CsA抑制Treg的增殖与分化.结论 SRL可以促进CD4+T淋巴细胞向Treg增殖与分化,而抑制Th17细胞的增殖与分化;CsA既抑制Treg的增殖与分化,又抑制Th17细胞的增殖与分化.     

凯西莱对肾脏热缺血再灌注的干预及其作用机制

缺血再灌注损伤(IRI)是影响移植肾成活率和长期存活的重要因素,它通过移植肾功能延迟恢复(DGF)及IRI诱发的急、慢件排斥反应等不同环节对移植肾的功能及存活产生负而影响[1].     

不同浓度氯胺酮对成人辅助性T淋巴细胞分化的影响

目的 探讨不同浓度氯胺酮对成人辅助性T淋巴细胞(TH细胞)分化的影响.方法 择期手术患者20例,年龄20～60岁,ASA分级Ⅰ级,麻醉前从每位受试者肘静脉抽取血样20ml,分离外周血单个核细胞(PBMCs).采用随机区组设计,将每份血样分离出的PBMCs随机分为3组(n＝20):氯胺酮不同终浓度组(K1组和K2组终浓度分别为2.5、25.0 μg/ml),正常对照组(C组)加入等容量0.9％NaC1.24h后分别加入植物血凝素刺激,继续孵育48 h后收集细胞.采用流式细胞小球微阵列术检测细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL- 10、干扰素-γ(IFN-γ)和TNF-α的浓度;采用四色荧光流式细胞技术(CD3+ CD8- IFN-γ+标识Thl细胞,CD3+ CD8- IL-4+标识TH2细胞)测定Thl及Th2细胞亚群比例,并计算二者比值(Th1/Th2).结果 C组、K1组和K2组Th1及Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的浓度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镇静浓度和麻醉浓度的氯胺酮在体外环境下对成人Th细胞分化无影响.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及作用机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和EGCG(低,中,高)剂量组,每组10只。利用血管夹夹闭大鼠双侧肾蒂45 min,构建大鼠肾缺血再灌注损伤模型。恢复肾脏血流灌注24 h后,处死大鼠,收集血清。利用ELISA法检测血清肌酐(SCr)、血清尿素氮(BUN)、干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子(tumor meerosis factor-α,TNF-α)和白介素6(interleukin-6,IL-6)表达水平;取肾脏标本PAS染色法观察肾组织病理形态;黄嘌呤氧化酶法检测过氧化氢酶(Cata-lase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量;免疫蛋白印记(Western blotting)法检测p53、Wnt、p21和β-catenin表达水平;实时定量PSCR(RTPSCR)检测肾脏IFN-γ、TNF-α和IL-6含量。结果与假手术组相比,模型组SCr、BUN、IFN-γ、TNF-α、IL-6、MDA、p53、Wnt、p21、β-catenin、IFN-γ、TNF-α和IL-6表达水平以及肾组织病理改变均明显增高,而CAT,GPx和SOD活性明显降低。与模型组相比,EGCG高剂量组SCr、BUN、IFN-γ、TNF-α、IL-6、MDA、p53、Wnt、p21、β-catenin、IFN-γ、TNF-α和IL-6表达水平以及肾组织病理改变均明显降低,而CAT,GPX和SOD活性明显增高。结论 EGCG预处理可通过抑制炎症和氧化应激而减轻肾脏缺血再灌注损伤,其作用机制与抑制Wnt/β-catenin/p53信号通路激活相关。     

HIV感染患者外周血T淋巴细胞CD127表达的研究进展

白细胞介素7受体（IL-7R）是由α链及γ链构成的,γ链受体广泛表达于淋巴细胞,是IL-2、IL-4、IL-9、IL-15和IL-21的通用受体,可以与这些细胞因子结合并相互作用.CD127是IL-7Rα链,在T淋巴细胞发育过程中,胸腺细胞的分化依赖于IL-7的表达.IL-7可以通过CD127刺激外周非同种异基因反应性T淋巴细胞的增殖,并通过抗凋亡作用促进T淋巴细胞的存活与重构,维持T淋巴细胞内环境稳态[1].