改良法分离睾丸支持细胞体外诱导异种淋巴细胞凋亡

目的改进睾丸支持细胞（Sertoli细胞）的分离方法及培养条件,探讨Sertoli细胞体外诱导异种淋巴细胞凋亡的作用机制。方法取2～4周龄的SD大鼠睾丸,采用Ⅴ型胶原酶、胰蛋白酶及脱氧核糖核酸酶二步消化法制备Sertoli细胞。用免疫组织化学法（SABC法）检测Sertoli细胞中Fas配体（FasL）、转化生长因子p,（TGF-β1）、clusterin的表达;流式细胞仪检测Sertoli细胞诱导异种淋巴细胞凋亡情况。结果在分离培养纯化过程中,Sertoli细胞占培养细胞总数的90％以上,生长状况良好,能稳定表达FasL、TGF-β1和clusterin,并且能够诱导异种淋巴细胞发生凋亡。结论应用本实验方法能够稳定获得大量高纯度的Sertoli细胞,并且能够发挥其免疫豁免的功能,从而用于细胞联合移植。     

无能T淋巴细胞的建立及其免疫生物学特性的研究

目的探讨体外诱导T淋巴细胞无能的条件,并分析无能T淋巴细胞的免疫生物学特性。方法以Wistar大鼠的脾细胞为刺激细胞,SD大鼠的脾细胞为反应细胞,进行混合淋巴细胞反应(MLR),分别单独或联合加入剂量不等的抗B71单克隆抗体(抗B71单抗)、抗B72单克隆抗体(抗B72单抗),制备无能T淋巴细胞。将无能T淋巴细胞和刺激细胞混合,分别加入抗CD3单克隆抗体、刀豆蛋白(ConA)及白细胞介素2(IL2),分析各种情况下无能T淋巴细胞的增殖情况;将刺激细胞与同种异体SD大鼠脾细胞混合,分别加入不同数量的无能T淋巴细胞,分析SD大鼠淋巴细胞的增殖情况。结果单独应用抗B71单抗或抗B72单抗,对淋巴细胞增殖的抑制作用不明显,而将二者联用,能明显阻断T淋巴细胞增殖;ConA及IL2能使无能T淋巴细胞增殖,而抗CD3单克隆抗体不能使无能T淋巴细胞发生增殖;无能T淋巴细胞对同种异体T淋巴细胞的增殖也产生抑制作用,该效应具有抗原特异性。结论联合抗B71单抗和抗B72单抗可诱导T淋巴细胞无能;无能T淋巴细胞在体外呈免疫无反应性,并能抑制同种异体T淋巴细胞的增殖,该抑制作用具有抗原特异性。     

Fas配体表达诱导同种胰岛移植免疫豁免

目的　探究睾丸细胞FasL表达能否对同时移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用。方法　将不同数量的同种大鼠睾丸细胞与1500个胰岛同时移植于糖尿病受体,观察移植物功能、存活情况,以及移植物内淋巴细胞凋亡情况,并体外检测睾丸Sertoli细胞对活化淋巴细胞的抑制作用。结果　单纯移植胰岛组平均存活期为(5.0±0.5)d。睾丸细胞和胰岛细胞同时移植,当睾丸细胞数为5×106个,平均存活期为(10.0±0.6)d;增加移植睾丸细胞数至1×107个时,存活期大于50d（P＜0.05）。表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡,体外抑制淋巴细胞活性。结论　表达FasL的睾丸细胞可诱导浸润的活化淋巴细胞凋亡,使同时移植胰岛移植物获得局部免疫豁免、存活期延长。     

人脂肪组织与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较

目的 比较脂肪来源间充质干细胞(ADAS)和骨髓来源间充质干细胞(BMSC)的生物学特性.方法 分离ADAS和BMSC,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌的相关因子,分别检测它们对T淋巴细胞的活化、细胞周期、增殖及凋亡的作用.结果 BMSC和ADAS在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异;在增殖速率上,ADAS群体倍增时间为28 h,显著高于BMSC的39 h(P＜0.05);ADAS和BMSC同样具有抑制T淋巴细胞增殖的能力,在有丝分裂原刺激和混合淋巴细胞反应的T淋巴细胞增殖中,这种抑制作用都具有剂量依赖性,在1:2时抑制作用极强,但是在1:100时这种抑制作用基本消失;在共培养时,ADAS和BMSC都可以使绝大多数的T淋巴细胞被抑制在G0/G1期,同时也可以抑制T淋巴细胞的早期活化,但是ADAS的上述作用均比BMSC弱;ADAS并不具有抑制T淋巴细胞凋亡的作用,而在TH0细胞向TH 1细胞或TH2细胞分化中所起的作用基本相似,主要抑制TH0细胞向TH1细胞(表达IL-2和IFN-γ的T淋巴细胞)的分化,而对向TH2细胞(表达IL4和IL-10的T淋巴细胞)分化没有明显的影响.结论 ADAS与BMSC具有类似的免疫调节作用,在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓组织的10倍以上,因此ADAS较难以获得的BMSC更有广泛的应用前景.     

利用RNA干扰诱导产生的CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞的免疫学特性

目的 探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8+ CD28-抑制性T淋巴细胞(Ts细胞)的免疫学特性.方法 取SD大鼠骨髓,培养分离树突状细胞(DC),设计、合成主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类小片段干扰RNA(siRNA),以MHC Ⅰ siRNA转染DC.先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHCI siRNA的DC,然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8+T淋巴细胞共同培养,通过磁珠法分离出Ts细胞.分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞(反应细胞)和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞(刺激细胞)组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞,检测反应细胞增殖情况;分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白(OVA)刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞,然后再按不同比例加入Ts细胞,检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况;在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2(rrIL-2),观察IL-2对Ts细胞功能的影响;采用实时定量聚合酶链反应(PCR)测定Ts细胞中转化生长因子β(TGF-β和γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达,流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达.结果 Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之问的混合淋巴细胞反应(MLR)具有抑制作用,但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用.在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后,SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加(P＞0.05).与CD8+CD28+T淋巴细胞和CD8+ T淋巴细胞比较,Ts细胞的TGF-β和IFN-γ mRNA的表达量明显升高(P＜0.01,P＜0.05),而CD25的表达量明显降低(P＜0.05).结论 采用经MHC I siRNA干扰的DC能够诱导CD8+T淋巴细胞产生CD8+ CD28-Ts细胞;Ts细胞在体外具有免疫抑制特性,其免疫抑制作用不被外源性IL-2所逆转,且其免疫调节作用具有抗原特异性.     

骨髓间充质干细胞诱导同种异体B细胞向CD5~＋调节性B细胞转化体外实验

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）诱导高分泌IL-10的调节性B细胞（Breg）的产生及机制。方法采用成功分离的DA大鼠BMSC与Wistar大鼠B细胞共培养（BMSC＋B）96h后,ELISA检测BMSC＋B组细胞培养上清中IL-10的浓度和分泌细胞因子的变化,设单纯BMSC、单纯B细胞两组对照;流式细胞术分析B细胞表型的变化;通过加入中和抗体,观察细胞因子对BMSC诱导Breg细胞产生的影响。结果 BMSC＋B组成功诱导产生高分泌IL-10的Breg细胞（P=0.006）;Breg表型为CD19＋CD1d＋CD5＋;IFN-β促进BMSC诱导Breg的产生（P=0.034）。结论 BMSC能诱导高分泌IL-10的CD5＋Breg产生,该机制可能与BMSC自身分泌的IFN-β有关     

不同途径行Sertoli细胞-肝脏联合移植对肝移植术后急性排斥的影响

目的通过不同途径行Sertoli细胞-肝脏联合移植，探讨Sertoli细胞是否可为移植肝提供免疫保护。方法“2步法”分离培养Sertoli细胞，“二袖套管法”行大鼠原位肝移植并以Wistar→SD组合建立排斥反应模型。通过三种途径进行Sertoli细胞-肝脏联合移植。分别观察术后各组症状、体征、肝功能变化、移植肝病理特征等。采用免疫组化、凋亡等技术检测Sertoli细胞功能及作用，探讨其对肝移植急性排斥的影响。结果肝移植急排模型不干预组14只，1只存活超过14d。Sertoli细胞腹腔注射组、阴茎背静脉注射组和供体移植前门静脉注射组分别有5、8、7只存活超过14d。各干预组存活率与对照组比较：后两组差异有显著性（P〈0．05），腹腔注射组差异不显著（P〉0．05）；各干预组之间存活率差异无显著性（P〉0．05）。供肝病理检查显示各干预组排斥反应较对照组轻。免疫组化及凋亡检测发现：肝移植后14d，Sertoli细胞仍存活并表达FasL，Sertoli细胞周围有淋巴细胞集聚及凋亡的淋巴细胞。结论Sertoli细胞对肝移植急性排斥有抑制作用，对供肝有诱导免疫耐受作用，Sertoli细胞通过Fas／FasL途径诱导淋巴细胞凋亡。     

国产雷帕霉素对小鼠淋巴细胞增殖和DTH,GVHR的免疫抑制 …

目的 开发研制国产雷帕霉素（Ｒａｐａｍｙｃｉｎ,ＲＰＭ）,探讨其免疫抑制作用机理。方法 观察：⑴ＲＰＭ对刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）诱导的小鼠脾细胞（Ｔ淋巴细胞）增殖的抑制作用;⑵ＲＰＭ对脂多糖（Ｌｐｓ）诱导的小鼠脾细胞（Ｂ淋巴细胞）增殖的抑制作用;⑶ＲＰＭ对二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）诱导的小鼠迟发性过敏反应（ＤＴＨ）的抑制作用;⑷ＲＰＭ对大鼠宿主抗移植物反应（ＧＶＨＲ）的抑制作用。结果 ⑴ＲＰＭ对Ｔ淋巴细胞     

甲状旁腺细胞与睾丸Sertoli细胞共同移植产生免疫赦免的研究

目的　研究甲状旁腺细胞与睾丸细胞共同移植是否产生免疫赦免。方法　随机将SD大鼠分为以下四组 :1组为单纯甲状旁腺细胞移植组 ;2组为甲状旁腺细胞 1× 10 6个睾丸Sertoli细胞移植组 ;3组为甲状旁腺细胞 2× 10 6个睾丸Sertoli细胞移植组 ;4组为甲状旁腺细胞 4× 10 6个睾丸Sertoli细胞移植组。观察移植物的存活情况 ;体外检测移植物内细胞成分及淋巴细胞凋亡情况。结果　 1组平均存活期为 (17.2 2± 3.6 3)d ;2、3、4组存活时间延长 ,分别为 (19.4 4± 4 .6 4 )d、(32 .2 2± 6 .6 7)d和 (48.80± 3.33)d。 4组在 5 0d观察期内 ,多数鼠的血清钙及甲状旁腺激素 (PTH)值维持在正常范围内 (P <0 .0 1)。移植物内可见表达FasL的睾丸细胞、甲状旁腺细胞及凋亡的淋巴细胞。FasL的表达及凋亡指数随着移植的Sertoli细胞数增加而增加。结论　睾丸Sertoli细胞FasL的表达诱导了浸润的活化淋巴细胞凋亡 ,使共同移植的甲状旁腺细胞存活期延长。     

CD4+ CD25+ Tr细胞与大鼠肝移植自发免疫耐受关系的研究

目的研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞及其相关基因Foxp3与大鼠肝移植自发免疫耐受的关系。方法双袖套法建立大鼠原位肝移植模型;密度梯度离心法分离肝内淋巴细胞;免疫磁性分离法（MACS）分选CD4^＋CD25^＋Tr细胞,流式细胞术（FCM）检测所得细胞纯度。体外细胞增殖试验研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞的免疫抑制作用。Western蛋白印迹法检测CD4^＋CD25^＋Tr细胞Scurfin蛋白表达。结果自发耐受组大鼠移植肝内CD4^＋CD25^＋Tr细胞含量显著高于急性排斥组。混合淋巴细胞反应中,LEW大鼠的脾细胞比DA大鼠自身的脾细胞更能刺激CD4^＋CD25^＋T细胞的增殖。CD4^＋CD25^-T细胞能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖,当加入外源性IL-2（200U／ml）时,该抑制作用被逆转。结论转录因子Foxp3介导的CD4^＋CD25^＋Tr细胞的免疫抑制作用可能是诱导大鼠肝脏移植自发免疫耐受的机制之一。     

大鼠SERTOLI细胞对骨髓间充质干细胞体外诱导分化的影响

目的探索Sertoli细胞(SCs)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂、成骨和成神经诱导分化的影响。方法密度梯度离心法分离BMSCs,二步酶消化法分离SCs;对第3、4代BMSCs进行成脂、成骨及成神经诱导,并与SCs共培养,观察其形态学变化。结果油红O染色显示BMSCs成脂诱导后,胞浆出现折光性强的脂滴,加入SCs后,脂滴明显减少,染色不明显;茜素红S染色显示BMSCs成骨诱导后可显示钙结节,加入SCs后,钙结节更多,结节内红染更明显;成神经诱导在加入SCs前后没有明显差异。结论 SCs可促进BMSCs成骨分化,而抑制其成脂分化,对成神经分化则没有明显影响。     

同种异体骨髓基质细胞肌肉内成骨分化的实验研究

目的 观察并探讨同种异体兔骨髓基质细胞在未接受免疫抑制剂的正常兔肌肉内移植后的免疫原性、存活及成骨状况.方法 首先通过兔谱系差异选择供、受体,并采用淋巴细胞反应进一步证实免疫学错配,之后抽取兔骨髓、体外分离培养、获取骨髓基质细胞,体外加矿化条件培养液诱导成骨、并对成骨特性予以鉴定后,将异体骨髓基质细胞移植入受体兔肌肉内,从淋巴细胞转化率、淋巴细胞杀伤活性、组织学检查、种子细胞体内成活及成骨情况等方面检测. 结果 术后各检测时间,异体骨髓基质细胞移植未诱发淋巴细胞大量增殖反应(P>0.05),淋巴细胞杀伤活性与自体组差异无统计学意义(P>0.05),移植区未见到大量炎性细胞浸润,经组织学及免疫组化染色证实异体骨髓基质细胞在受体组织内存活,8周后于异体肌肉中形成骨组织. 结论 同种异体骨髓基质细胞移植,未诱发免疫排斥反应,在无免疫抑制剂应用的情况下,移植细胞在受体肌肉内存活、并形成骨性组织.     

人精浆对不同丝裂原诱导淋转反应的影响

本文通过人精浆对PHA、ConA和PWM三种丝裂原诱导淋巴细胞转化反应的影响,间接了解HSP对T辅助、T抑制和B淋巴细胞功能的影响,结果发现不同浓度的精浆对三种丝裂原诱导的淋转反应均有明显抑制作用(P<0.05),且三种浓度HSP的抑制作用在无显著性差异(P>0.05);中浓度的精浆对PHA、ConA和PWM诱导转反应的抑制率分别为69.7、51.7和48.3％,说明精浆对机体的T辅助、T抑制性和B淋巴细胞功能均有明显的抑制作用。此外,还对精浆的免疫抑制作用机理和意义进行了讨论。     

第三方骨髓间充质干细胞对同种异体皮肤移植的影响

目的 探讨第三方骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)对同种异体皮肤移植的影响.方法 40只雌性C57BL/6和50只雄性BALB/C小鼠分别作为皮肤移植的供体和受体.将50只BALB/C小鼠随机分为5组,每组10只:空白对照组,直接进行皮肤移植;给予受体环磷酰胺组(Cyelophosphamide,CP组);给予受体SD大鼠BMSCs移植组(SD-BMSCs组);给予受体CP+SD-BMSCs移植组(CP+SD-BMSCs组);CM-DiI荧光标记组.CP+SD-BMSCs组给予大剂量CP腹腔注射,200 mg/kg,2 d,移植当天自受体小鼠尾静脉注射1×10~6个SD-BMSCs.检测项目包括:观察皮片存活时间、单向混合淋巴反应、组织HE染色、组织荧光镜检,流式细胞仪检测受体外周血单核细胞中SD-BMSCs的含量等.结果 CP+SD-BMSCs组皮肤移植物存活时间(14.5±1.9)d,空白对照组为(8.O±0.8)d,CP组为(11.1±1.4)d,SD-BMSCs组为(10.9±1.4)d,CP+SD-BMSCs组皮肤移植物存活时间明显比后3组延长(P<0.05).混合淋巴反应结果显示,BMSCs对淋巴细胞的增殖抑制作用存在量效关系.HE染色发现CP+SD-BMSCs组不但有血管生成,淋巴细胞浸润也较少.CM-DiI标记的SD-BMSCs能够在BALB/c小鼠体内存活30 d以上,SD-BMSCs组与CP+SD-BMSCs组外周血流式细胞仪均检测到SD-BMSCs.结论 BMSCs能够在异种受体体内存活较长时间;第三方BMSCs能够延长同种异体移植物的存活时间;BMSCs能够抑制异种T淋巴细胞的活化增殖.     

骨髓源性多巴胺前体细胞移植治疗帕金森病模型鼠

目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导分化为多巴胺(DA)能前体细胞后移植治疗帕金森病(PD)模型鼠的疗效及作用机制.方法 将纯化的BMSCs诱导为DA前体细胞,免疫荧光染色和流式细胞仪检测TH阳性细胞的表达及百分比.将PD大鼠模型随机分为3组,分别注入诱导、未诱导的BMSCs和生理盐水于模型鼠右侧纹状体区.干预后观察行为学的变化,免疫荧光鉴定以及高效液相色谱检测腑内DA含量的变化.结果 诱导后可见TH阳性细胞,且比例可达10.3%.移植治疗6周后诱导组旋转次数变化多于未诱导组(P<0.05)和生理盐水组(P<0.01);诱导组可见BrdU/TH、BrdU/NSE双标阳性的细胞,未诱导组只见BrdU/GFAP双标细胞;BMSCs诱导组DA脑内含量明显高于未诱导组和生理盐水组(P<0.05),而后两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 BMSCs诱导为DA前体细胞移植治疗PD模型的疗效总体好于未诱导的BMSCs组和生理盐水组.     

不同培养基对骨髓间充质干细胞免疫学特性的影响

目的比较ScienCell(SCI)干细胞培养基和低糖(LG)完全培养基培养下骨髓间充质干细胞(BMSC)的免疫学特性。方法利用流式细胞分析BMSC表面标志物的表达;通过体外成骨和成脂诱导,鉴定BMSC的多向分化能力;应用混合淋巴细胞反应实验,比较SCI组和LG组BMSC的免疫原性及免疫调节功能;采用流式细胞仪分析IFN-γ刺激前后BMSC表面免疫分子的表达情况。结果混合淋巴细胞反应结果显示,两组培养基培养的BMSC均具有低免疫原性和免疫抑制功能,但SCI组单向混合淋巴细胞增殖率显著高于LG组,而两组双向混合淋巴细胞增殖率未见显著差异。流式细胞仪分析结果显示,SCI组BMSC中免疫共刺激因子CD40阳性的细胞比例显著高于LG组,而HLA-DR以及免疫共抑制因子B7-H1和B7-DC阳性细胞比例均显著低于LG组。IFN-γ刺激后可显著上调两组BMSC中HLADR的阳性细胞比例至90%以上。低浓度的IFN-γ(10 U/mL)仅轻微上调LG组BMSCs的CD40的表达水平;而高浓度IFN-γ(1 000 U/mL)可显著提高两组BMSC中CD40和B7-H1的阳性细胞比例,以及SCI组BMSC中B7-DC的阳性细胞比例。结论在体外,含有不同成分的干细胞培养基可改变BMSC免疫分子的表达水平;SCI组BMSC的免疫原性显著高于LG组,但免疫抑制功能两组无明显差异。     

生长分化因子5基因转染诱导骨髓基质干细胞分化的研究

目的 探讨人生长分化因子5(GDF5)基因转染对骨髓基质干细胞(BMSCs)生长及分化的影响.方法 采用脂质体介导法将GDF5基因导人人BMSCs,通过MTT法和流式细胞仪分别检测细胞增殖能力和细胞周期,在光镜和电镜水平观察细胞形态,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法榆测GDF5和Ⅱ型胶原mRNA和蛋白质的表达.柠檬酸铅法检测细胞碱性磷酸酶活性,RT-PCR法检测骨钙素mRNA表达.结果 GDF5在转染细胞内得到稳定表达,转染细胞的增殖能力和细胞周期与未转染细胞基本一致.光镜下转染细胞中多角形细胞相对增多,排列方式不规则.电镜下转染细胞核呈不规则形,细胞器丰富.转染细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达阳性,骨钙素mRNA表达阴性.结论 GDF5基因脂质体法转染BMSCs成功,转染细胞仍保持正常生长增殖特性.GDF5可诱导BMSCs向软骨表型分化,GDF5基因修饰的BMSCs可作为软骨组织上程的候选种子细胞.     

Sertoli cells induce xenolymphocyte apoptosis in vitro

BACKGROUND: Testicular Sertoli cells can protect pancreatic islet grafts from allo- and autoimmune destruction; however, the mechanisms underlying immune privilege of the testicle are not well understood, especially in xenotransplantation. The purpose of this study was to investigate whether rat Sertoli cells could induce mouse lymphocyte apoptosis in vitro. METHODS: Testis was isolated from 2- to 4-week-old Sprague Dawley (SD) rats. Sertoli cells were successfully prepared by digestion with collagenase type V, trypsin, and DNase I, and then identified by electron microscope. Viability and apoptosis of cultured cells were measured by flow cytometry. We examined the apoptosis rates of Balb/c mouse lymphocytes, which were cocultured with SD rat Sertoli cells by FACS. The expression of Fas ligand (Fasl), transforming growth factor (TGF)-beta1 and clusterin on Sertoli cells were detected by immunocytochemistry. RESULTS: In the cocultured system, Sertoli cells accounted for more than 93%. With our isolation method, the viability of Sertoli cells was more than 95% and the apoptosis rate was 10.87% +/- 3.87%. The lymphocyte apoptosis ratio was 15.52 +/- 0.17 (P < .01, compared with the control groups). SABC immunochemistry staining showed that the sertoli cells could express FasL, TGF-beta, and clusterin. CONCLUSIONS: In our coculture in vitro, rat Sertoli cells expressed FasL and TGF-beta1 as well as induced the apoptosis of mouse lymphocytes. These results indicated that the expression of FasL and TGF-beta1 on Sertoli cells might relate to immune privilege in xenotransplantation.     

改良法体外诱导骨髓基质干细胞分化为类许旺细胞

目的　探讨一种较为有效的诱导方法将骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为类许旺细胞。　方法　用Dezawa所述方法 (称为传统诱导法 )加以改良成将所有诱导剂一起联合半量间隔诱导两次的方法 (称为改良诱导法 ) ,诱导后的细胞从形态学、抗S 10 0和抗GFAP细胞免疫化学染色的阳性率、MTT细胞活性测定及流式细胞仪检测细胞DNA含量来比较此两种方法对细胞的综合作用。　结果　改良法诱导的细胞在形态上更具有许旺细胞的长梭形外观 ,抗S 10 0及抗 GFAP阳性率分别由5 8 1%和 60 3 %提高到 79 4%、81 2 % (P <0 0 5 ) ;MTT法细胞活性测定表明改良法对细胞活性影响小(P <0 0 1) ;流式细胞仪DNA含量测定显示S期DNA含量较高 (P <0 0 5 )。　结论　改良法体外诱导骨髓基质干细胞为类许旺细胞具有诱导效果更好 ,对细胞损害小的优越性。     

双向诱导的骨髓基质干细胞体外成骨与成血管的实验研究

目的 探讨双向诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)形成内皮细胞、成骨细胞与BMSCs共存体系的体外成骨与成血管的能力.方法 采用密度梯度离心法分离培养兔BMSCs.贴壁细胞分为四组:A组(单纯的BMSCs组)、B组(成骨诱导的BMSCs组)、C绀(内皮诱导的BMSCs组)和D组(双向诱导的BMSCs组).通过倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,并采用流式细胞仪检测诱导前后的细胞表面抗原,采用茜素红染色观察钙结节,基质胶成血管法观察四组细胞体外成血管的能力.结果 ①经流式细胞学检测,分离培养的BMSCs主要表达CD90、CD105和CD44;BMSCs向内皮细胞诱导1周后,细胞表面抗原CD34和CD133的表达升高,而CD90和CD105的表达减少,相比诱导前差异有统计学意义(P<0.05);BMSCs继续向成骨细胞诱导1周后,细胞表面抗原CD44和HLA-DR升高,相比诱导前差异有统计学意义(P<0.05).②茜素红染色结果显示D组的钙结节大于B组,而A组和C组未见钙结节形成.③体外血管新生试验中,C组的管道数目与面积大于D组,差异有统计学意义(P<0.05),而A组与B组未见管道形成.结论 BMSCs双向诱导形成内皮细胞、成骨细胞与BMSCs共存体系,在体外共培养过程中不仅可以形成钙结节,而且可以形成微血管,有利于骨组织和血管联合构建,是一种良好的构建组织工程骨的种子细胞.