自发性糖尿病长爪沙鼠环氧化酶(COX)-2在三种组织中的表达

目的 研究环氧化酶(COX)-2基因在糖尿病长爪沙鼠3种组织中的表达水平,进一步探索其与长爪沙鼠糖尿病发生和发展的关系.方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏和肾脏组织,用实时PCR和Western blotting检测COX-2基因在各组织中mRNA和蛋白表达水平.结果 实时PCR的结果表明,COX-2基因的mRNA水平在糖尿病组动物的骨骼肌组织中表达与对照组无明显差异,而肝脏和肾脏组织中有表达升高趋势.Western blotting结果显示,糖尿病组COX-2的蛋白水平在肝脏和肾脏组织中存在表达升高趋势,且肾脏具有统计学意义.结论 COX-2在糖尿病长爪沙鼠肝脏和肾脏组织中表达升高,在肾脏组织尤其明显,说明COX-2对长爪沙鼠糖尿病的影响可能发生在肝脏和肾脏组织中.     

自发性糖尿病长爪沙鼠Rxra在6种组织中的表达水平分析

目的分析糖尿病长爪沙鼠Rxra基因在6种组织中的表达水平,以期探索长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制。方法选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织,用Real-time PCR和Western blotting检测Rxra基因在各组织中mRNA和蛋白表达水平。结果 Real-time PCR的结果表明,Rxra基因的mRNA水平在糖尿病组动物骨骼肌和脂肪中显著降低,在肝脏中无差异,而在肾脏、心脏和脑组织中则有高表达趋势。Western blotting结果显示,糖尿病组RXRA的蛋白水平在骨骼肌组织中显著降低,在脂肪组织几乎检测不到,在其他各组织表达情况有所不同,但没有统计学差异。结论 Rxra在糖尿病长爪沙鼠骨骼肌和脂肪组织中低表达,在其他4种组织中表达水平无差异,说明Rxra对长爪沙鼠糖尿病的影响主要发生在骨骼肌和脂肪组织中。     

链脲佐菌素诱导长爪沙鼠I型糖尿病模型的实验研究

目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导长爪沙鼠I型糖尿病模型的可能性,并观察模型动物早期肾脏损害情况.方法 雄性长爪沙鼠96只,随机分为正常对照组(NC组)、模型组1(DM1组)、模型组2(DM2组),DM1及DM2组沙鼠分别一次性腹腔注射100 mg/kg、200 mg/kg STZ,NC组注射等量柠檬酸盐缓冲溶液.注射STZ后1、2、4、6周末,分别监测沙鼠一般情况,血糖、胰岛素等血清学指标和尿液指标,并处死沙鼠进行胰腺和肾脏组织的病理学检查.结果 注射STZ 24 h后,DM2组及DM1组部分沙鼠逐渐出现典型的"三多一少"症状,随着病程的发展,DM2组沙鼠持续高血糖,DM1组沙鼠血糖值与NC组差异有显著性(P<0.05),但有下降趋势;DM2组沙鼠胰岛素显著性降低(P<0.05),其他血清学指标及尿液指标均显著性升高(P<0.05),DM1组沙鼠各指标差异无显著性.DM2组沙鼠及DM1组少数沙鼠胰腺组织中可见胰岛β细胞减少、空泡样变性等变化,DM2组沙鼠肾脏组织中出现肾小球基质增多,毛细血管襻扩张等病变,DM1组沙鼠肾脏组织未见明显变化.结论 STZ 200 mg/kg可成功诱导长爪沙鼠I型糖尿病模型,在病程早期沙鼠肾脏结构和功能已经发生改变.     

8型腺相关病毒介导短发夹状RNA在小鼠肝脏的表达及其功能

目的 以内源性基因超氧化物歧化酶1(SOD1)为靶基因,观察经单次尾静脉注射后8型腺相关病毒(AAV8)介导的短发夹状RNA(shRNA)在小鼠肝脏内的表达、对靶基因的沉默效应以及重组AAV8-SOD1 shRNA的副反应.方法 利用AAV8载体系统的双启动子构建能同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和SOD1 shRNA的重组AAV8-SOD1 shRNA.采用Northern blot和Western blot分别检测SOD1 shRNA在小鼠肝脏内表达水平、靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达变化、肝细胞微小RNA122(miRNA-122)表达水平;标准酶法测定小鼠肝功能;酶联免疫实验测定干扰素-α(IFN-α)水平;经HE染色对肝组织进行病理学观察.结果 经尾静脉注射重组AAV8-SOD1 shRNA后,小鼠肝组织中可检测到SOD1 shRNA和SOD小干扰RNA(SOD siRNA)反义链的表达;靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达均明显受抑;血清转氨酶轻度升高,但IFN-α水平无上调;肝组织无明显病理学改变;肝细胞miRNA-122水平无明显下降.结论 经尾静脉单次注射重组AAV8-SOD1 shRNA后,SOD1 shRNA后可在小鼠肝脏中高效表达并沉默靶基因表达.重组AAV8-SOD1 shRNA对小鼠机体无明显副反应.     

8型腺相关病毒介导短发夹状RNA在小鼠肝脏的表达及其功能

目的以内源性基因超氧化物歧化酶1(SOD1)为靶基因,观察经单次尾静脉注射后8型腺相关病毒(AAV8)介导的短发夹状RNA(shRNA)在小鼠肝脏内的表达、对靶基因的沉默效应以及重组AAV8-SOD1 shRNA的副反应。方法利用AAV8载体系统的双启动子构建能同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和SOD1 shRNA的重组AAV8-SOD1 shRNA。采用Northern blot和Western blot分别检测SOD1shRNA在小鼠肝脏内表达水平、靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达变化、肝细胞微小RNA122(miRNA-122)表达水平;标准酶法测定小鼠肝功能;酶联免疫实验测定干扰素-α(IFN-α)水平;经HE染色对肝组织进行病理学观察。结果经尾静脉注射重组AAV8-SOD1 shRNA后,小鼠肝组织中可检测到SOD1 shRNA和SOD小干扰RNA(SODsiRNA)反义链的表达;靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达均明显受抑;血清转氨酶轻度升高,但IFN-α水平无上调;肝组织无明显病理学改变;肝细胞miRNA-122水平无明显下降。结论经尾静脉单次注射重组AAV8-SOD1 shRNA后,SOD1 shRNA后可在小鼠肝脏中高效表达并沉默靶基因表达。重组AAV8-SOD1 shRNA对小鼠机体无明显副反应。     

短发夹状RNA靶向抑制HaCaT细胞Hax-1基因的表达研究

目的 观察短发夹状干扰RNA靶向抑制Hax-1基因诱导HaCaT细胞凋亡的作用.方法 构建特异性抑制Hax-1的shRNA表达载体并转染HaCaT细胞;分别采用半定量PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡.结果 Hax-1基因mRNA水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制,HaCaT细胞凋亡率明显升高.结论 靶向Hax-1的shRNA显著抑制了Hax-1基因在HaCaT细胞中的表达,并明显诱导HaCaT细胞凋亡.     

细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸在小鼠体内的分布及其作用

目的 探讨细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸(ICAM-1-ASO)静脉注射后在小鼠体内的分布及其对心脏组织ICAM-1表达的作用。方法 FITC荧光标记的ICAM-1-ASO(10mg／kg)经小鼠颈外静脉注射6h后，应用荧光显微镜观察其在小鼠体内的分布；取心脏组织进行免疫组织化学及半定量RT-PCR检测。观察心脏组织中ICAM-1的表达，研究ICAM-1-ASO对心脏组织ICAM-1表达的作用。结果 ICAM-1-ASO经静脉注射6h后，在。肾脏以及心脏组织中可见较多的颗粒状荧光分布，而在肝、肺、脾组织中仅见少量散在的荧光分布。RT-PCR检测表明ICAM-1-ASO(10mg／k)可降低心脏组织中ICAM-1 mRNA水平；但免疫组织化学检测各组间ICAM-1的蛋白水平未显示出显著性差异。结论 ICAM-1-ASO经静脉注射6h后可以明显抑制心脏组织ICAM-1 mRNA的表达，其作用的理想靶器官是心脏和。肾脏。     

辐射损伤对巨核细胞造血调控因子IL-6和TNF-α的影响

目的探讨辐射损伤对巨核细胞调控因子IL-6和TNF-α表达的影响.方法用RT-PCR和Western blot方法检测辐射后Dami细胞IL-6、TNF-α表达水平的变化.结果辐射损伤3、5、10Gy后,IL-6的mRNA水平和蛋白水平表达均显著低于对照组(P＜0.05),其变化趋势是随照射剂量增加而表达逐渐降低.TNF-α在mRNA水平变化无显著性差异,但在蛋白水平表达则显示,3个剂量组均显著高于对照组(P＜0.05),并随剂量增加表达逐渐升高.结论不同剂量放射损伤所致造血功能障碍与巨核细胞调控因子IL-6和TNF-α的异常表达有关.     

肝X受体的激活对小鼠糖尿病肝脏脂肪酸合成酶表达的调节

目的 探讨肝X受体(LXR)对糖尿病肝脏脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响及机制.方法 将16周龄、雄性、C57BL/6背景下瘦素受体基因缺陷的db/db小鼠和对照的db/m小鼠,分别予以LXR激动剂TO901317(TO)(3 mg·kg-1·d-1)或DMSO灌胃处理7 d;TO(10 μmol/L)刺激人肝癌细胞系HepG2细胞24 h.此外,HepG2细胞转染小鼠FAS启动子报告基因表达质粒,同时转染pcDNA3.1表达载体或LXR或活化型固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)表达质粒12 h;采用免疫组织化学方法检测FAS蛋白在肝脏上的表达,实时荧光定量PCR和蛋白印迹方法分别在mRNA和蛋白水平检测FAS和SREBP-1的表达及TO对其表达的影响,荧光素酶报告基因方法检测LXR激动剂和SREBP-1c对小鼠FAS启动子活性的影响.结果 免疫组化结果显示FAS蛋白在肝脏广泛表达,主要位于肝细胞胞质内.TO可显著降低db/db小鼠空腹血糖水平[由(12.00±1.06)mmol/L下降到(7.73±0.69)mmool/L,P＜0.01]和糖化血红蛋白水平(由5.67%±0.10%下降到4.87%±0.08%,P＜0.01).db/db小鼠肝脏FAS mRNA水平明显高于db/m小鼠,约为5.5倍(P＜0.01);在蛋白水平,db/db小鼠肝脏上的FAS也明显高于db/m小鼠.TO处理可使db/m小鼠肝脏FAS mRNA表达升高约3.5倍(P＜0.05),可使db/db小鼠肝脏FAS mRNA升高约1.7倍(P＜0.05);TO处理可使db/m小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.4倍(P＜0.05),使db/db小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.1倍(P＜0.01).TO能够上调HepG2细胞FAS的mRNA表达水平,升高约1.9倍(P＜0.05);LXR的激活还能显著增加HepG2细胞中FAS基因启动子活性,约为对照组的1.5倍;过表达LXR或SREBP-1c也能增加HepG2细胞FAS基因启动子活性,分别为对照组的1.9倍和1.6倍(均P＜0.01).结论 LXR可能通过其本身的直接作用和SREBP-1C的间接作用上调肝脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肝脏的脂质生成过程.     

霍奇金淋巴瘤细胞SHP1表达与CD99表达的关系

目的：探究霍奇金淋巴瘤（HL）细胞SH2结构域酪氨酸磷酸化酶（SHP1）表达与CD99表达的关系。方法荧光定量PCR（RT‐PCR）、Western blot检测 HL淋巴瘤细胞株L428细胞、B淋巴母细胞株IM9细胞、浆母细胞株KM3细胞及上调CD99的稳定细胞株L428‐CD99细胞中CD99和SHP1 mRNA、蛋白水平的表达；荧光共聚焦观测L428细胞中CD99与SHP1的表达及其共定位；IM9细胞瞬时干扰CD99在基因和蛋白水平检测SHP1的表达。结果 L428和KM3细胞CD99和SHP1 mR‐NA呈现低表达，L428‐CD99细胞SHP1基因和蛋白水平较L428细胞表达增高，其蛋白表达与基因转录水平表达趋势相一致；随着CD99的上调，SHP1基因和蛋白水平表达升高；CD99为细胞膜表达，SHP1为细胞质表达；瞬时干扰CD99后，SHP1在基因和蛋白水平表达均降低。结论 SHP1在 H L中低表达可能与其CD99缺失有关，其机制仍有待于研究。     

转录共激活子p300分布及其表达的组织差异性

目的阐明转录共激活因子(p300)在大鼠组织中的分布特点及其表达的组织差异,探讨p300在组织差异相关的基因表达调控中的作用.方法采用免疫组织化学技术检测p300在雄性大鼠大脑皮质、海马、小脑、心肌、肝脏、肺脏、肾脏、睾丸中的分布特点;运用免疫印迹技术,对不同组织中p300蛋白水平进行检测.结果① p300蛋白在心肌、肝脏、肺脏、肾脏、睾丸、小脑、海马、大脑皮质中均有分布.②在睾丸、海马和肾脏组织中,p300主要分布在精原细胞、锥形神经元细胞和远曲小管上皮细胞中;大脑皮质神经元均表达p300,在分子层中呈弱阳性;p300在小脑蒲肯野细胞和心脏组织的心肌细胞表达呈强阳性.p300在肝细胞中均匀分布,而肺脏组织中p300表达呈弱阳性.③ p300蛋白在骨骼肌中表达水平最高,其次是心肌、睾丸、肝脏和小脑,下丘脑中未检测到明显的阳性表达.结论 p300的表达和分布具有组织和细胞差异性,这种差异分布可能是机体不同组织、细胞中蛋白表达差异的重要机制.     

应用原位杂交技术分析ZNF216基因在成年小鼠各主要组织中的表达模式

目的：获得ZNF216基因的表达模式。方法：体外转录方法合成地高辛标记的CRNA探针,利用原位杂交技术检测ZNF216基因在成年小鼠各主要组织中的表达模式。结果：在小鼠脑、心脏、骨骼肌和睾丸细胞内可检测到很强的ZNF216的杂交信号,在肾脏细胞内也可检测到杂交信号,但在脾脏和肝脏细胞内仅检测到少许杂交信号和未能检测到杂交信号。结论：ZNF16基因表达于几种组织细胞内,具有一定的组织特异性。     

高脂饮食对大鼠肝脏和骨骼肌脂联素受体表达的影响

目的观察高脂饮食对大鼠肝脏和骨骼肌脂联素受体表达的影响。方法利用高脂饮食制造肥胖倾向(OP)和肥胖抵抗(OR)大鼠模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肝脏和骨骼肌组织脂联素受体(AdipoR1和AdipoR2)表达的水平差异。结果(1)喂食高脂饮食的OP和OR大鼠肝脏和骨骼肌组织的AdipoR1mRNA表达水平与对照组间差异均无统计学意义(P>0.05);(2)喂食高脂饮食的OP和OR大鼠骨骼肌组织的Adi-poR2mRNA表达水平与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);(3)OP大鼠肝脏的AdipoR2mRNA表达水平与OR大鼠和正常对照大鼠间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食能促进大鼠肝脏组织AdipoR2表达,提示AdipoR2很可能是调节肝组织脂联素敏感性的主要受体。     

藏羚羊脑红蛋白基因的组织表达谱分析

目的 探讨藏羚羊脑红蛋白( Neuroglobin,NGB)基因在组织中的表达谱及在不同脑区的表达情况.方法 运用RT-PCR和Real-time PCR技术对藏羚羊NGB基因的组织特异性表达进行检测、分析.结果 NGB基因在大脑皮层、海马、小脑、丘脑等不同脑区有表达,在心、肝、脾、肾和骨骼肌组织中有表达.其中以大脑皮层顶叶和海马表达量相对较高.结论 藏羚羊NGB基因在脑中广泛分布,且不同脑区NGB mRNA的表达不同.此外,NGB在藏羚羊不同组织中也有不同程度的表达,提示NGB基因并不是神经系统所特有的,它可能在机体较为广泛的区域中发挥着作用.     

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其应用

参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立一种灵敏、简捷、特异的半定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之，除内皮细胞以外平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，表示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。     

瞬时受体电位通道C与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠心脏和肾脏损害的关系

目的: 探究经典瞬时受体电位通道C（TRPC）相关蛋白在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）大鼠心脏和肾脏损害中的作用。方法: 18只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,每组9只。实验组大鼠在间歇性低氧舱中,每天暴露于间歇性低氧环境8 h（10:00—18:00）。此后通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测大鼠心脏和肾脏组织中TRPC mRNA和相关蛋白的表达。结果: 实验组心脏组织中TRPC3、TRPC4、TRPC5的mRNA表达较对照组升高（均P < 0.05）,而肾脏组织TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5、TRPC6、TRPC7的mRNA表达在两组之间差异无统计学意义（均P>0.05）;实验组肾脏组织中TRPC4、TRPC5、TRPC6的mRNA表达低于心脏组织（均P < 0.05）,对照组肾脏组织TRPC7的mRNA表达高于心脏组织（P < 0.05）。实验组心脏组织中的TRPC5蛋白表达较对照组升高（P < 0.05）,而肾脏组织TRPC5、TRPC6、TRPC7相关蛋白的表达在两组之间差异无统计学意义（均P>0.05）。结论: TRPC5可能参与OSAHS心脏损害的病理生理过程,有望成为治疗OSAHS所致心脏损害的药物新靶点。     

糖尿病大鼠SOD活性及蛋白表达水平抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心、肺、肝、肾组织中的组织差异性及抗氧化剂治疗对机体抗氧化状态SOD活性及蛋白表达的影响

摘 要 目的 探究糖尿病大鼠主要脏器SOD活性及蛋白表达水平的变化,并观察抗氧化剂N-乙酰半氨胺酸（N-acetylcysteine,NAC）短期治疗（4周）后对机体抗氧化状态的影响。方法 STZ诱导的糖尿病大鼠（D组,n＝8）每天给予NAC 1.5g/kg灌胃治疗（D T组,n＝8）,正常对照组（C组,n＝8）同时给予同体积生理盐水。4周后,获取心、肺、肝、肾组织,试剂盒检测血浆总SOD、总抗氧化物浓度、脂质过氧化特异性标志物15-F2t-isoprostane及各组织总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,Western blotting分析SOD亚型Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达水平。结果 与C组相比,D组大鼠血浆15-F2t-isoprostane与总抗氧化物浓度及心肌组织中总SOD活性显著升高,其它组织显著降低而血浆、肺、肝、肾组织总SOD活性显著降低;心、肺组织中Cu/Zn-SOD蛋白表达水平明显升高,而肝、肾组织中明显降低;肺、肾组织中Mn-SOD蛋白表达水平明显降低,而肝组织明显升高,但心肌组织变化不明显。NAC干预能不同程度逆转上述改变,但进一步降低肾组织Mn-SOD表达。结论 糖尿病大鼠各组织中抗氧化剂NAC对总SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达水平具有组织差异性,抗氧化剂NAC的影响程度与组织种类相关,能不同程度恢复糖尿病大鼠各组织总SOD活性抗氧化水平,从而起到阻止或延缓糖尿病相关的靶器官功能损害的作用。     

老年多器官功能障碍综合征肺组织IL-6的变化

目的探讨肺组织中IL-6含量及mRNA表达在老年大鼠多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunctionsyndrome,MODS)中的变化。方法80只SD大鼠分为老年组(20月龄)和青年组(3月龄)各40只,建立油酸/脂多糖(OA/LPS)二次致伤老年MODS和青年MODS模型。观察对照组及伤后2、6、24 h,重要器官(肺、心、肝、肾)病理及功能的变化,通过ELISA方法检测上述组织中IL-6含量,IL-6 mRNA表达用RT-PCR法检测。结果OA/LPS二次致伤MODS模型,肺脏是损害出现最早也是最重的器官,致伤后2 h青年组和老年组PaO2即下降至最低值,伤后6 h,心、肝、肾生化指标达峰值,在相同时相点老年鼠脏器损害重于青年鼠。致伤2h后肺、心、肝和肾组织中IL-6 mRNA表达及蛋白含量均升高,且持续高于正常对照组,以肺组织中升高幅度最大,老年组高于同时相点青年组。结论老年MODS过程中肺损伤出现最早且严重,其原因可能与OA/LPS致伤早期老年鼠肺组织中IL-6 mRNA表达及蛋白含量迅速升高有关。