2006年杭州市4种慢性病发病情况分析

目的 了解杭州市慢性病发病现状,为4种慢性病(恶性肿瘤、腩卒中、糖尿病和冠心病)防治提供科学参考依据.方法 依据杭州市2006年慢性病年报统计资料,对慢性病发病数据进行汇总分析.结果 2006年杭州市4种慢性病发病率为528.76/10万,标化发病率为347.25/10万,男性4种慢性病的发病率为574.37/10万,标化率为365.23/10万,女性发病率为481.21/10万,标化率为325.38/10万,且男性发病率高于女性.随着年龄增加慢性病的发病率呈上升趋势.从地区分布来看,农村高于城市.结论 慢性病的发病率呈逐年上升趋势,以老年人发病最高,因此采取有效的防治措施,降低慢性病的发病,是当前疾病预防控制工作面临的重要公共卫生问题.     

实验动物疫病监测的最小抽样量研究

目的利用数学流行病学理论实现实验动物流行病学调查和监测中最小抽样规模。方法根据二项分布公式推导出最小样本抽样公式（n=log（a）／log（1-p）,a=0．05,p=检出率,n=样本规模）,用浙江省2007～2008年四个兔场四次调查的数据来验证该公式的可行性。结果利用该公式计算所得的最小抽样量,采用计算机模拟抽样的方法在四次调查的数据库中模拟抽样,得出的估计感染率与实际感染率基本相符。结论该公式可以用来指导抽样。     

长爪沙鼠发情周期规律与判定方法

目的 研究长爪沙鼠发情周期,揭示发情规律,优化判定方法。方法 连续18 d采集50只长爪沙鼠阴道上皮脱落细胞涂片,采用角化细胞计数法研究长爪沙鼠发情周期规律。比较瑞氏染色、HE染色和直接镜检判定发情周期4个时相的优缺点。结果 长爪沙鼠的发情周期有稳定型、不稳定型、假孕三种类型。其中稳定型占68.6%,发情周期为（106.3±35.0）h,可分为4个时相。4个时相角化细胞的比例分别为发情前期（13.5±7.8）%、发情期（86.7±9.9）%、发情后期（27.9±12.8）% 和发情间期（3.3±2.8）%。结论 角化细胞计数能准确地判定长爪沙鼠的发情周期及各个时相。直接镜检法能快速反映阴道脱落细胞的形态。     

长爪沙鼠高胆固醇血症模型的建立与辛伐他汀的作用

目的探索长爪沙鼠高胆固醇血症模型建立及辛伐他汀的影响。方法在饲喂长爪沙鼠高脂饲料的同时给予不同浓度辛伐他汀抑制胆固醇生物合成,通过观察肝脏颜色,测量体重、肝重、TC、LDL-C及HDL-C等血脂和肝功能指标判断高脂饲料和辛伐他汀对血脂和肝脏功能的影响。结果动物体重、肝重和肝脏指数没有显著变化。高脂饲料能够促进脂肪在肝脏的沉积,但是对AST和ALT等肝脏功能指标影响不显著;辛伐他汀能够有效抑制TC、LDL-C、HDL-C、TBA和GLU的升高,但对其他指标影响不明显。结论高脂饲料能够快速建立长爪沙鼠高胆固醇血症模型;辛伐他汀能够抑制内源性胆固醇的合成从而有效抑制血浆胆固醇（TC）、LDL-C和HDL-C的升高。结果表明,特殊的反馈调节机制导致长爪沙鼠无法在大量摄入胆固醇时终止内源性胆固醇的合成。长爪沙鼠特殊的反馈调节机制可能是易发高胆固醇血症的一个主要原因。     

长爪沙鼠ATPase8,ATPase6,COX3基因的克隆及序列分析

目的对长爪沙鼠线粒体ATPase8,ATPase6,COX3基因全序列进行测定,并对其进行鉴定及进化分析。方法根据长爪沙鼠已知基因序列设计引物,采用PCR产物测序法,对目的片段进行测序鉴定。结合已公布啮齿类动物ATPase8,ATPase6,COX3基因序列,分析其碱基组成、遗传距离、并基于最小进化法和UPGMA法构建系统进化树。结果获得长爪沙鼠线粒体ATPase8,ATPase6,COX3基因全序列,其与家鼠、小家鼠和仓鼠均具有较高的同源性(76～98%);进化分析结果显示,长爪沙鼠与家鼠、黑家鼠和仓鼠遗传距离较近;碱基G的含量分别为6.9%,10.7%,15.2%,符合mtDNA的特点;A+T含量分别为68.2%,64.1%,59.2%,明显低于G+C含量,符合哺乳动物的特点。结论本研究为首次获得长爪沙鼠ATPase8,ATPase6,COX3基因全序列,长爪沙鼠与家鼠、黑家鼠和仓鼠具有较近遗传距离,本研究为长爪沙鼠进化研究、线粒体的结构和功能研究奠定基础。     

兔出血症病毒遗传变异分析及RT-PCR检测方法的建立

目的获得兔出血症病毒（浙江分离株）近20年间遗传变异概况,建立兔出血症病毒的RT—PCR检测方法。方法对1989～2006年间的7株RHDV浙江分离株的衣壳蛋白基因（VP60）进行了克隆与测序,并与国内、外RHDV的基因组序列进行了遗传比对和分析;根据兔出血症病毒株的VP60设计引物,对20只人工感染兔的实质脏器、全血和350只实验兔全血样本进行了检测。结果7株RHDV的VP60基因均由1740个核苷酸组成,编码580个氨基酸。它们与参考序列之间的氨基酸同源性为94.0%～99.8%。系统发生树分析结果显示,RHDV可划分为2个大的基因群,浙江（中国）的RHDV分离株主要集中于C亚群。RT—PCR检测方法表明20只实验兔全部扩出预期条带,而350只实验兔全血检测中出现13只RHDV可疑样本。经血凝抑制试验检测,13例PCR阳性样品中有10个HAI阳性,3个阴性。检测敏感度达100%,特异性为99.12%,经统计检验,kappa=0.865,表明PCR检出RHDV的结果与HAI高度一致。结论RHDV基因群之间的遗传距离有逐渐加大的趋势。我们建立的RT—PCR法可用于RHDV浙江分离株的检测,用RT—PCR检测全血中RHDV方法的建立为活体检测RHDV打下了基础。     

雷公藤多甙对雄性小鼠生殖细胞毒性的研究

背景与目的:研究雷公藤多甙对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性作用,为临床将雷公多甙藤作为抗牛育剂和治疗药的安全使用提供理论基础和依据.材料与方法:昆明种雄性小鼠共3o只,随机分成阴性、阳性对照组,雷公藤多甙抗生育剂量组[10 mg (ks·d)]、中间剂量组[20 mg (kg·d)]和治疗剂量组[30 mg (ks·d)],共5组,每组6只.分别采用骨髓微核实验、精子畸形实验、染色体畸变实验和联会复合体技术,研究雷公藤多甙对雄性小鼠牛殖细胞的遗传毒性.结果:雷公藤多甙20和30 mg (kg·d)剂量组可产生体细胞遗传毒性,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05).雷公藤多甙3个剂量组均可致精子畸形并对初级精母细胞产生损伤,以及具有生殖细胞联会复合体损伤,与阴性对照组比较差异均具存统计学意义(P均<0.05).结论:雷公藤多甙具有遗传毒性和生殖细胞毒性,生殖细胞对雷公藤多甙的敏感性高于体细胞,作为治疗药物忌大剂量长时间使用.     

长爪沙鼠肝细胞体外分离培养体系的建立

目的：建立长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系。方法：以雄性长爪沙鼠肝细胞为供体,采用组织消化法和Seglen两步灌流法分离肝细胞,以台盼蓝染色检测细胞得率和活率,PAS法鉴定肝细胞,倒置显微镜观察肝细胞形态变化,并使用含有多种细胞因子的培养基维持培养。结果：组织消化法和Seglen两步灌流法平均每只长爪沙鼠肝脏分离获得肝细胞分别为(1.33?.34)?07个、(3.97?.15)?07个,细胞活率分别为(29.4?.05)%、(80.3?.56)%,这两种方法在细胞得率及活率方面存在显著差异。肝细胞内因有大量的糖原颗粒,经PAS法染色后被染成红色。结果表明肝细胞在贴壁后72h内,肝细胞形态发生显著变化。结论：采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种高效获得肝细胞的方法。各种细胞因子有利于维持肝细胞在体外的生长分化,长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系的建立将为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供技术支持。     

长爪沙鼠载脂蛋白E4外显子的克隆初报

目的 克隆并获得长爪沙鼠载脂蛋白ApoE基因E4外显子的序列.方法 根据Genbank中的相关序列,用自行设计的引物,通过常规的RT-PCR方法,从长爪沙鼠肝脏中克隆及测序得到所需要的基因序列.结果 长爪沙鼠载脂蛋白ApoE基因E4外显子长约987 bp,经比较发现最终测序的结果与大小鼠ApoE基因的同源性达到了73%～74%,与人ApoE基因的同源性达到了62%,与猪、牛ApoE基因的同源性达到了60%以上,与非人灵长类ApoE基因的同源性达到了57%,用DNAstar进行编码氨基酸预测,基因共编码263个氨基酸,已向genbank提交,登录号码EU780067.结论 利用基因进化的保守性通过PCR方法可以得到长爪沙鼠载脂蛋白E4基因的序列,本实验为筛选长爪沙鼠高脂血症模型的遗传多样性标记,为培育长爪沙鼠的血脂代谢新品系打下基础.     

彗星实验检测2种细胞DNA损伤方法

丙烯酰胺（acrylamide，AA）在工业上有广泛的用途，对AA的暴露研究结果均显示其有一定的神经系统毒性和致癌作用。自2002年瑞典国家食品管理局和斯德哥尔摩大学首次报道，在煎烤烹炸类食品中发现高含量AA后，其安全性引起了各国科学家的普遍关注。近年来动物实验研究表明，AA也具有一定遗传毒性和生殖毒性，为此本研究通过彗星实验检测其外周淋巴细胞和睾丸细胞的损伤，