内皮素-1和诱导型一氧化氮合酶在低氧应激性胃黏膜病变中的作用机制研究

人在应激状态下,会产生一种相应的反应,并在新的情况下逐渐地适应.如果机体不能适应这种刺激,就可能在生理上或心理上产生异常,甚至可能发生疾病.有研究证实,应激原对实验动物均可造成应激性胃黏膜溃疡[1].     

CYP2E1 DraⅠ基因遗传多态性与青海省胃癌人群易感性的相关性研究

背景与目的：胃癌是青海省最常见的恶性肿瘤和致死病因之一,生活环境中的前致癌物质需要经过体内代谢酶代谢并转化为致癌物质,CYP2E1是人体内重要的Ⅰ相代谢酶,已知CYP2E1在不同人种、不同地区存在基因多态性,本研究旨在探讨CYP2E1 DraⅠ基因遗传多态性与青海地区人群胃癌易感性的相关性。方法：采用病例对照分子流行病的研究方法,并用数字表法随机选取世居青海的胃癌患者120例(胃癌组)和与之匹配的同期世居青海的健康体检者120例(对照组),应用PCR-RFLP技术对两组人群CYP2E1 DraⅠ位点的不同基因型及等位基因进行检测,分析其在两组间的分布特征。结果：CYP2E1基因DraⅠ位点各不同基因型(包括C/C、C/D、D/D)在胃癌组和对照组中的分布频率分别为58.33%、35.00%、6.67%和58.33%、38.34%、3.33%,两组差异无统计学意义(P分别=1.00、0.59、0.24);CYP2E1基因DraⅠ位点的等位基因(C和D)在胃癌组和对照组中的分布频率为75.83%、24.17%和77.50%、22.50%,两组差异无统计学意义(χ2=0.19,P=0.67);CYP2E1基因DraⅠ多态性位点突变基因型(C/D、D/D)与高/高中分化胃腺癌的发生相关(χ2=4.49,P=0.03,OR=3.5,95%CI：1.04~11.80),是青海地区发生高/高中分化胃腺癌的危险因素;CYP2E1 DraⅠ野生纯合子(C/C)与低分化胃腺癌的发生相关(χ2=3.97,P=0.049,OR=0.54,95%CI：0.29~1.00),是发生低分化胃腺癌的危险因素。结论：CYP2E1 DraⅠ基因遗传多态性与青海地区人群不同分化程度胃腺癌易感性存在一定相关性,携带CYP2E1 DraⅠ野生型纯合子(C/C)者易发生低分化胃腺癌,携带突变纯合子(D/D)和突变杂合子(C/D)者易发生高分化及高中分化胃腺癌。     

siRNA反向转染人肺动脉平滑肌细胞的条件优化

目的 寻找小分子干扰RNA转染人肺动脉平滑肌细胞的的最佳条件,建立有效的转染体系.方法 采用化学合成的能够抑制管家基因表达的siRNA,以0,5,10,15,30nmol/L的siRNA浓度,应用脂质体Lipofacet-amine RNAi MAX转染人肺动脉平滑肌细胞,转染48小时后通过显微镜观察和CCK-8检测细胞的增殖情况,评估转染效率.结果 对照组细胞生长正常,在不同转染浓度下,细胞的生长情况受到不同程度的影响.试剂对照组与空白对照组（0nmol/L组）细胞增殖无差异（P＞0.05）,10nmol/L以上浓度组的转染效率显著高于5nmol/L组（P＜0.05）,10、15和30nmol/L组转染效率差异不显著（P＞0.05）.结论 化学合成的siRNA可以在10nmol/L的浓度即可获得理想的转染效果.     

藏羚羊大脑皮质cDNA文库的构建

目的:构建藏羚羊大脑皮质组织的cDNA文库并鉴定文库质量。方法:提取藏羚羊大脑皮质组织总RNA,经oli-gotex试剂盒纯化得到mRNA。利用SMART技术,使用含有SfiIB酶切位点的oligo(dT)引物和含有SfiIA酶切位点的SMARTIV寡核苷酸在PowerScript逆转录酶作用下运用mRNA5′末端的模板转换方法合成cDNA第1链。利用LDPCR扩增cDNA,经SfiI(ⅠA和ⅠB)酶切后,通过CHROMASPIN-400柱进行分级分离去除<500bp的片段,再同经SfiI酶切的λTripIEx2载体连接,体外包装后转染到大肠杆菌XL1-Blue宿主菌中,进行文库滴度和重组率的测定,然后扩增文库并随机挑取10个噬菌斑行PCR反应鉴定插入片段大小。结果:构建的cDNA文库滴度为1.8×109pfu/L,重组率>98%,文库扩增后滴度达8×1012pfu/L,插入片段长度在750～6000bp之间,平均长度为4250bp。结论:文库具有良好的质量,为进一步筛选、克隆藏羚羊大脑皮质组织特异表达基因奠定了基础。     

内皮素-1和诱导型一氧化氮合酶在低氧应激性胃黏膜病变中的作用机制研究

人在应激状态下,会产生一种相应的反应,并在新的情况下逐渐地适应.如果机体不能适应这种刺激,就可能在生理上或心理上产生异常,甚至可能发生疾病.有研究证实,应激原对实验动物均可造成应激性胃黏膜溃疡[1].     

多不饱和脂肪酸和小儿孤僻症研究进展

1小儿孤僻征侯群ASD 儿童孤独症是指一种神经性发育疾病，主要表现为患儿的精神活动与环境脱离，行为离奇、孤僻离群，沉缅于自己的病态体验中，别人无法了解其内心的喜怒哀乐。由1943年，美国医生、心理学家利奥&#183;凯纳（Leo．Kanncr）首先提出“婴幼儿孤独症”的概念，发病率根据国内外报导一般为万分之四至十五不等，男孩儿居多（我国无统计记录），若按国际比率推算大约60万。     

藏羚羊和藏系绵羊左心室收缩功能的比较研究

目的:探讨藏羚羊适应高原低氧环境的左心功能特点。方法:捕捉海拔4 300 m藏羚羊9只、藏系绵羊10只运至格尔木(海拔2 800 m)实验基地。测定二者的心脏/体重比(HW/BW)、右心室/(左心室+室间隔)重量比[RV/(LV+IVS)];应用心导管技术测定心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、左室等容收缩期心室内压力上升最大速率和左室等容舒张期心室内压力下降最大速率(±dp/dt)。以格尔木市的氧浓度(21.1%)为基线,分别给予更低浓度氧14.6%、12.5%(分别相当于海拔5 300 m、6 300 m)的低氧吸入15 min后重复测定以上指标。应用透射电镜观察心肌超微结构。结果:藏羚羊HW/BW显著高于藏系绵羊(P0.01),基础状态下藏羚羊SBP低于藏系绵羊(P0.05),+dp/dt与藏系绵羊比无显著差异,吸入14.6%和12.5%的低氧气体后藏羚羊+dp/dt分别升高至145.1%和148.1%,而藏系绵羊分别降低至68.4%和70.5%(P0.05);电镜下观察藏羚羊心肌超微结构与藏系绵羊比较,其心肌细胞线粒体较为丰富。结论:藏羚羊心脏对高海拔低氧环境的适应,是通过增加心脏器官的重量及心肌细胞线粒体的含量来实现,其心肌收缩功能的适应性特征为:在静息状态下以较低的左心室心肌收缩力来降低氧耗量以此适应高原低氧环境,而以海拔更高的较低氧浓度为应激条件下,左心室心肌收缩力明显升高。提示:藏羚羊作为高原适应性动物,经过漫长的自然选择其心脏对高原低氧环境的适应不同于藏系绵羊。     

藏羚羊脑组织胞红蛋白基因的表达

目的 检测藏羚羊不同脑区脑组织胞红蛋白(CGB)基因的表达状况.方法 选取藏羚羊海马、丘脑、小脑、额叶、顶叶、枕叶、颞叶、中脑组织,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测CGB基因的表达、实时定量PCR相对定量比较CT法(2-△△CT法)分析结果.结果 藏羚羊脑海马、丘脑、小脑、额叶、顶叶、枕叶、颞叶、中脑组织CGB基因的2-△△CT值分别为0.00、1.78、1.00、1.30、1.19、1.21、4.08、7.41.结论 藏羚羊不同脑区脑组织CGB基因均有表达.藏羚羊脑组织CGB基因相时表达量由高到低依次为中脑、颞叶、丘脑、额叶、枕叶、硕叶、小脑和海马.     

藏羚羊ET-1基因编码区的克隆与分析

目的克隆藏羚羊内皮素1(endothelin-1,ET-1)基因编码区,并行分析。方法从藏羚羊肺组织中提取总RNA,通过RT-PCR法获得藏羚羊ET-1cDNA,将其与pGEM-T Easy载体连接构建重组质粒,经转化JM109菌扩增培养后鉴定阳性质粒并测序。将测序结果与NCBI数据库进行同源性比较。结果获得藏羚羊ET-1基因编码区序列,长度为609bp,编码202个氨基酸,将此序列提交GenBank数据库并取得注册号(JQ031153)。其核苷酸序列与绵羊、牛、猪、大鼠以及斑马鱼的同源性分别是:98%、95%、86%、81%、48%。推测出的氨基酸序列与绵羊、牛、猪、大鼠以及斑马鱼的同源性分别是:97%、94%、79%、76%、34%。与绵羊ET-1氨基酸比对发现,30位和172位的苏氨酸变为丙氨酸、40位和163位的缬氨酸变为丙氨酸、141位天冬氨酸变为天冬酰胺、181位的苯丙氨酸变为缬氨酸。结论成功克隆了藏羚羊肺组织中ET-1基因的编码区,分析发现藏羚羊ET-1基因对应的氨基酸发生了突变,这些为进一步揭示藏羚羊低氧适应分子机制打下基础。