Disabled-1在人乳腺癌细胞中的表达及其对细胞周期的影响

目的：探讨Disabled-1（Dab1）基因在乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达情况,并阐明Dab1对乳腺癌细胞周期的影响。方法：体外培养永生化的乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和MDA-MB-231,实时荧光定量（Real-time PCR）法检测MCF-10A、MCF-7、BT-549和MDA-MB-231细胞中Dab1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测Dab1蛋白的表达水平。取对数生长期的BT-549细胞,分为对照组、转染pKH3组和转染pKH3-Dab1组,采用流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。结果：Real-time PCR法检测,与MCF-10A细胞（0.998±0.020）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.504±0.037）、BT-549（0.302±0.027）和MDA-MB-231（0.330±0.031）中Dab1 mRNA相对表达水平明显下降（P<0.05）。Western blotting法检测,与MCF-10A细胞（0.227±0.021）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.134±0.014）、BT-549（0.076±0.01）和MDA-MB-231（0.074±0.005）中Dab1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。流式细胞术检测,与对照组和转染pKH3组比较,转染pHK3-Dab1组BT-549细胞出现细胞周期G₁期阻滞。结论：Dab1在体外培养乳腺癌细胞系中表达下调,Dab1过表达可阻滞乳腺癌细胞G₁细胞周期进展。     

外源性PTEN基因转染对炎性乳腺癌MDA-MB-468细胞株体外生物学行为的影响

目的 研究外源性PTEN（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10）基因表达对炎性乳腺癌MDA-MB-468细胞株体外生物学行为的影响。方法 应用基因重组技术构建并鉴定pcDNA3．1-PTEN真核表达质粒，重组质粒被BglⅡ酶切线性化后运用脂质体介导基因转染法，将外源性PTEN基因导人乳腺癌细胞系MDA-MB-468中，经G418筛选阳性克隆，空载体pcDNA3．1（-）转染人细胞作为对照，逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）、免疫印迹法（Western blot）分析目的基因及蛋白表达，膜联蛋白V-FITC（FITC-Annexin V）和碘化丙啶（PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 重组真核表达质粒pcDNA3．1-PTEN经限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ双酶切，电泳后显示约1．4kb的PTEN目的片段和5．4kb的pcDNA3．1（-）载体片段，证明重组质粒连接正确。RT-PCR、Western blot均显示pcDNA3．1-PTEN转染组有PTEN mRNA及其蛋白表达，流式细胞分析显示恢复PTEN蛋白表达后其凋亡率较其它两组细胞凋亡率增高（均P〈0．01）。结论 成功地构建了pcDNA3．1-PTEN真核表达质粒，外源性PTEN基因可通过诱导细胞凋亡而抑制乳腺癌细胞的增殖。     

野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系A549 VEGF表达和肿瘤生长的影响

目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法:将含有wtp53基因的pcDNA3.1-wtp53和空载体pcDNA3.1-neo质粒,通过阳离子脂质体转染A549细胞,应用半定量RT-PCR和ELISA技术检测其对VEGF表达情况的影响;将A549,A549/pcDNA3.1-neo和A549/ pcDNA3.1-wtp53细胞分别接种至裸鼠皮下,观察成瘤时间及瘤块大小;免疫组化法计数VEGF阳性细胞百分数并进行半定量分级. 结果:pcDNA3.1-wtp53转染组VEGF mRNA和蛋白表达均明显低于其他2组. pcDNA3.1-wtp53转染后裸鼠成瘤时间延长,瘤块生长缓慢. 结论:wtp53基因转染可抑制VEGF表达和肿瘤的生长.     

恢复野生型PTEN基因表达对炎性乳腺癌MDA-MB-468体外生物学行为的影响

目的研究野生型PTEN基因转染对人炎性乳腺癌MDA—MB-468细胞体外生物学行为的影响及机制。方法应用基因重组技术构建重组质粒pcDNA3．1-PTEN，用脂质体转染乳腺癌细胞株MDA—MB-468，用RT—PCR、免疫组化及免疫印迹方法分析目的基因及其蛋白表达，并用免疫印迹方法检测转染后，在表皮生长因子的诱导下，磷酸化蛋白激酶B（PKB／Akt）的表达，四甲基唑蓝（MTT）法分析细胞增殖。Annexin V—FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果RT—PCR、免疫组化及免疫印迹显示pcDNA3．1-PTEN转染组有PTEN mRNA及其蛋白表达，且显示转染组在表皮生长因子的诱导下，p-Akt蛋白表达下调。MTT检测表明pcDNA3．1-PTEN转染组活细胞数较其它各组均低（P〈0．01），流式细胞分析其凋亡率达21．68％。结论野生型PTEN基因依赖其磷酸酶活性可诱导乳腺癌MDA—MB-468细胞凋亡。     

3p21.3区域肺癌相关基因RASSF1A的抑癌功能研究

目的观察将野生型RASSF1A通过质粒载体pcDNA3.1导入不表达该基因的非小细胞肺癌(NSCL)细胞系A549后,肺癌细胞生物学特性的变化.方法通过脂质体Lipofectamine2000将质粒载体pcDNA3.1,pcDNA3.1-RASSF1A分别转染入A549细胞系中,通过流式细胞仪检测瞬时转染该基因对细胞周期的影响以及是否诱发凋亡;通过绘制细胞生长曲线,MTT检测,以及集落形成实验来分析稳定转染细胞的生物学特性;同时分析稳定转染RASSF1A对A549细胞裸鼠转移能力的影响.结果瞬时转染RASSF1A使细胞周期阻断在G1/S期(P<0.001);稳定转染该基因的细胞其增殖能力和集落形成能力均显着下降(P<0.01),同时裸鼠转移能力也明显被抑制(P<0.01).结论野生型RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制肿瘤细胞的生长和转移,提示该基因在肺癌的发生发展中发挥重要作用.     

抑癌基因ING2真核表达质粒的建立及其对肺癌细胞生长的影响

目的 构建抑癌基因生长抑制因子2(ING2)真核表达载体,研究p33ING2对人肺腺癌细胞A549及人小细胞肺癌细胞NCI-H446体外生长的影响.方法 构建ING2基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING2,采用脂质体法分别转染A549和NCI-H446细胞,以未转染组和转染pcDNA3.1(+)空质粒组作为对照,应用RT-PCR、细胞免疫组化和Western blot法分析目的基因及其蛋白表达,CCK8试剂盒分析其对细胞生长的影响,Annexin V-FITC和PI双染流式细胞术观察细胞凋亡的情况.结果 成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1(+)- ING2,转染后细胞株高水平表达ING2 mRNA及p33ING2蛋白.CCK8法检测结果显示:转染pcDNA3.1(+)-ING2的A549细胞和NCI-H446细胞增殖受到抑制,抑制率与pcDNA3.1(+)空质粒转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞术凋亡检测结果显示:转染pcDNA3.1(+)-ING2的A549细胞和NCI-H446细胞组凋亡率均高于未转染组和pcDNA3.1(+)空质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 ING2蛋白表达能抑制人肺腺癌细胞A549和人小细胞肺癌细胞NCI-H446增殖及增加细胞凋亡率.     

外源性PTEN基因诱导人乳腺癌MDA468细胞凋亡

目的 研究外源性PTEN基因依赖其磷酸酶活性诱导人乳腺癌MDA468细胞凋亡。方法 应用分子克隆技术构建重组质粒pcDNA3．1-PTEN,以脂质体转染法转染人乳腺癌细胞株MDA468,对照组为pcDNA3．1(-)空载体质粒转染组和未转染组。应用RT-PCR、Western印迹法分析目的基因的表达;在表皮生长因子(EGF)的诱导下,采用Western印迹方法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB／Akt)的表达及细胞在黏附和失黏附状态下的黏着斑激酶的表达;膜联蛋白V-FITC和P1双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 RT-PCR、Western印迹显示pcDNA3．1-PTEN转染组有PTEN mRNA及PTEN蛋白表达,且在EGF的诱导下,p-Akt及p-FAK蛋白表达下调。流式细胞术则显示其凋亡率达21．68％。结论 外源性PTEN基因依赖其磷酸酶活性可诱导人乳腺癌MDA468细胞凋亡。     

抑癌基因ING4转染对乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学行为的影响

目的 研究转染抑癌基因ING4对乳腺癌细胞系MDA-MB-435S生物学行为的影响.方法 携带ING4基因的真核表达质粒pcDNA3.0(+)-ING4利用脂质体瞬时转染乳腺癌MDA-MB-435S细胞,以转染pcDNA3.0(+)空载体和未转染的MDA-MB-435S作为阴性对照和空白对照.转染72 h后,RT-PCR检测转染前后ING4基因mRNA表达水平,MTT法检测转染各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞周期的变化,TUNEL实验检测各组细胞凋亡水平的变化.结果 转染ING4基因的MDA-MB-435S细胞ING4 mRNA表达水平明显上调;细胞增殖活力较空白组和阴性对照组下降(P＜0.05);细胞发生G2/M期阻滞(P＜0.05);细胞凋亡比例明显增加(P＜0.01).结论 ING4基因通过G2/M期阻滞和诱导细胞凋亡的方式抑制乳腺癌细胞生长.     

野生型INK4a基因转染对肺腺癌A549细胞放疗敏感性的调控

目的研究野生型INK4a基因转染对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的调控.方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a cDNA的真核表达重组质粒pcDNA3.1-p16导入该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞系中,确定其编码蛋白p16稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,检测分析放射线对A549细胞的克隆形成率和杀伤效率的影响.结果转染INK4a基因后的细胞与未转染及空质粒转染的细胞相比:肿瘤细胞S期和G2/M期的比例下降,G0/G1期的比例增加,生长减慢,凋亡指数增加,放射线处理后克隆形成率减少,50%抑制剂量(ID50)略有降低.结论 INK4a基因转染增强了肺腺癌A549细胞对放射线的敏感性,为将来肺癌患者基因治疗提供了一定的实验依据.     

反义人DNMT1基因对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖和细胞周期的影响

目的 构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响.方法 应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMTl反义RNA真核表达质粒,测序验证,将其转染人人乳腺癌细胞系中,利用荧光定量PCR法检测转染前后细胞DN-MT1基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测转染后DNMT1蛋白表达变化;应用MTT法检测细胞生长状况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期的变化.结果 成功构建出能够表达DNMT1反义RNA的真核表达质粒.转染该质粒后,与未转染组和转染正义质粒组相比,MDA-MB-435s细胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白表达量均显著下降;细胞生长变慢;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加.结论 反义DNMT1能够特异性下调该基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌基因治疗提供了新的靶标.     

RBM5 基因表达载体构建、稳定转染A549 细胞系的建立及功能的初步研究

目的：通过构建表达载体、建立稳定转染RNA结合基序5(RNA binding motif 5,RBM5)的A549细胞系, 初步研究RBM5基因过表达对A549 细胞增殖以及天冬-谷-丙-组氨酸盒多肽15[DEAH box polypeptide 15,DHX15]表 达的影响。方法：应用分段克隆法构建pcDNA3.1(+)/RBM5真核表达载体;将测序验证后的重组质粒pcDNA3.1(+)/ RBM5转染肺腺癌A549细胞并以G418进行筛选,采用Western印迹鉴定RBM5基因过表达阳性细胞,流式细胞仪分别 检测经pcDNA3.1(+)/RBM5稳定转染的A549细胞[pcDNA3.1(+)/RBM5-A549]及pcDNA3.1(+)空白质粒转染的A549细胞 [pcDNA3.1(+)-A549]的周期分布;运用RT-PCR技术分别检测pcDNA3.1(+)/RBM5-A549和pcDNA3.1(+)-A549细胞中剪 接相关因子DHX15的表达情况。结果：成功构建出pcDNA3.1(+)/RBM5真核表达载体,筛选出RBM5基因稳定转染过 表达阳性细胞株;pcDNA3.1(+)/RBM5-A549较pcDNA3.1(+)-A549细胞处于G1期细胞比例增大、S期细胞比例减小(均 P<0.01);cDNA3.1(+)/RBM5-A549较pcDNA3.1(+)-A549细胞的DHX15表达上调(P<0.01)。结论：成功构建重组质粒 pcDNA3.1(+)/RBM5,并建立了RBM5稳定转染的A549细胞系;初步证实RBM5基因过表达可抑制肺腺癌A549细胞的细 胞周期,并使DHX15表达上调。     

HSV-tk基因表达载体的构建及其对A549细胞的杀伤作用

目的构建自杀基因HSV-tk表达质粒,研究自杀基因疗法对人肺癌细胞的杀伤作用,探讨其治疗肺癌的可行性。方法PCR扩增tk基因带EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点,然后构成建到pcDNA3.0载体中成pcDNA3.0-tk;将pcDNA3.0-tk转染A549肺癌细胞,应用细胞生长曲线和MTT法测定前药GCV对A549细胞的杀伤作用。结果成功获得pcDNA3.0-tk克隆,RT-PCR、Western印迹法证明A549细胞转染pcDNA3.0-tk后可表达自杀基因,GCV能特异性地杀伤A549/tk细胞。结论HSV-tk基因表达质粒构建成功;HSV-tK/GCV系统对肺癌A549细胞有一定的杀伤作用。     

JAB1对缺氧环境肺癌A549细胞化疗敏感性调控的研究

目的观察导入pcDNA3.1-HRE-JAB1真核表达质粒的肺癌A549细胞,在低氧环境下对健择(Gemzar)的化疗敏感性,以期找到一种提高肺癌化疗敏感性的方法。方法首先构建缺氧反应元件启动的pcDNA3.1-HRE-JAB1真核表达质粒,鉴定后将该质粒导入肺癌A549细胞。在低氧环境培养过程中加入化疗药物Gemzar,观察空白组(A549)、空载体组(A549+pcD-NA3.1-HRE)和质粒组(A549+pcDNA3.1-HRE-JAB1)肺癌A549细胞对Gemzar的敏感性。采用Real-time PCR和Westernblot分别检测各组肺癌A549细胞中JAB1的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组肺癌A549细胞周期分布和凋亡情况。结果通过双酶切鉴定,确定构建获得了pcDNA3.1-HRE-JAB1质粒。在有化疗药物Gemzar的情况下,质粒组分别与空白组或空载体组比较,质粒组肺癌A549细胞中JAB1mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而细胞周期被明显阻滞于G1期(P<0.01)。结论 JAB1在低氧环境下高表达提高了药物Gemzar化疗的敏感性,这将可能成为一种理想的提高肺癌或其他实体恶性肿瘤化疗敏感性的手段。     

乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因载体的构建及表达

目的：构建乏氧（HRE）/辐射（Egr1）双敏感启动子介导的分泌型人TRAIL (shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察乏氧和辐射对其表达的影响。 方法：利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;pMD19T-Egr1经Sac Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切得到Egr1;pshuttle-shTRAIL 经Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切得到shTRAIL;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确。肺腺癌A549细胞分为正常组、乏氧组（1%）、照射组(6 Gy)和乏氧加照射组;表达载体转染肺腺癌A549细胞,RT-PCR及ELISA法检测shTRAIL的表达。结果：BamH Ⅰ和Sma Ⅰ酶切,所得片段大小分别为1 284和4 998　bp、2 292和3 990 bp;以Egr1和shTRAIL引物PCR扩增该载体,得到469和820 bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确。转染肺腺癌A549细胞后,乏氧组、辐射组及乏氧加照射组shTRAIL mRNA和蛋白表达增加,与对照组比较差异有显著性（P<0.05）,且乏氧加照射组表达更明显。结论：成功地构建了乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因表达的载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL;乏氧及照射能够诱导TRAIL表达增加,且二者具有协同作用。     

RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用

目的：观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF- κB亚单位P65表达的影响。方法：利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3.0-RASSF1A质粒和空载体pcDNA3.0质粒分别导入A549细胞，经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆，Western blotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。 RT-PCR和Western blotting检测基因转染对P65表达的影响。结果：经脂质体转染和筛选，建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较，转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢（P<0.05），细胞周期中G1/G0期比例明显增加（P<0.05），而S期比例减少；转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低（P<0.05），而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论：RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。     

人源化BPVL1-GFP融合基因的构建以及在哺乳动物细胞中的瞬时表达

目的：构建牛乳头瘤病毒晚期基因L1-GFP融合基因真核表达质粒，自细胞水平探讨优化密码对晚期基因L1蛋白瞬时表达的影响。方法：用PCR方法扩增获得优化密码人源化BPVL1(hL1)基因。TA克隆后，酶切释放hL1基因，定向插入质粒pET30a／NM-GFP的BamHⅠ、SacⅡ位点，获得正确框架的hL1-GFP融合基因。再用BamHⅠ、NotⅠ酶切释放hL1-GFP融合基因，与pcDNA3载体定向重组构建真核表达质粒pcDNA3／hL1-GFP。同法克隆获得含野生型BPVL1-GFP融合基因的表达质粒pcDNA3／wL1-GFP。用质粒DNA分别在体外转染哺乳动物细胞COS-1细胞和Wish细胞，荧光显微镜下观察L1-GFP融合蛋白的瞬时表达情况。结果：酶切鉴定表明成功构建了含wL1-GFP、hL1-GFP的真核表达栽体，与pcDNA3／wL1-GFP相比，pcDNA3／kL1-GFP在COS-1细胞、WISH细胞中获得有效表达。结论：优化密码能提高乳头瘤病毒L1基因在哺乳动物细胞内的蛋白表达。     

CAAP1对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响

  目的  探讨Caspase活性和凋亡抑制因子1（CAAP1）对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响。  方法  构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1（shR-CAAP1）,并进行鉴定。SMMC-7721分为4组:pcDNA3/CAAP1组、pcDNA3对照组、shR-CAAP1组和pSilencer对照组。SMMC-7721培养后,将CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1（pcDNA3/CAAP1组）和敲降载体shR-CAAP1（shR-CAAP1组）以及它们的对照（pcDNA3对照组、pSilencer对照组）分别转染到SMMC-7721中,48 h后进行后续实验。实时定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞中CAAP1 mRNA的表达水平,Western blot检测CAAP1、cleaved Caspase-3蛋白的表达水平;CCK-8实验检测各组细胞的增殖,细胞集落形成实验比较各组细胞集落形成能力;划痕实验比较各组细胞运动能力,Transwell小室检测各组细胞的迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡。纳入TCGA数据库CAAP1低表达的患者75例、CAAP1高表达的患者295例随访48个月的数据,Kaplan-Meier生存曲线比较不同CAAP1表达水平对肝癌患者总生存（OS）的影响。  结果  双酶切鉴定表明CAAP1过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体shR-CAAP1构建成功;qRT-PCR和Western blot结果提示pcDNA3/CAAP1能够使SMMC-7721细胞中CAAP1 mRNA和蛋白表达水平增加（与pcDNA3对照组相比,P<0.05）,而shR-CAAP1使CAAP1 mRNA和蛋白表达水平降低（与pSilencer对照组相比,P<0.05）。与pcDNA3对照组比较,pcDNA3/CAAP1组SMMC-7721细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力、迁移和侵袭能力增加,而细胞的凋亡受到抑制（均P<0.05）;与pSilencer对照组相比较,shR-CAAP1组SMMC-7721细胞的增殖能力、克隆形成能力、运动能力、迁移和侵袭能力降低,而细胞凋亡增加（P<0.05）。TCGA数据库分析表明CAAP1低表达时肝癌患者的OS优于CAAP1高表达者。  结论  CAAP1能够促进肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。     

Construction of Eukaryotic Expression Vector of Human CC10 Gene and Expression of CC10 Protein in Lung Adenocarcinoma A549 Cell Line

Summary： A mammalian expression plasmid pcDNA3. 1-hCC10 was constructed and identified, then CC10 protein expression in A549 lung cancer cell line was detected. A 273 bp cDNA fragment was amplified from the total RNA of normal lung tissue by using RT-PCR and cloned into expression plasmid cDNA3. 1, and the recombinant plasmid was identified by employing double digestion restriction enzymes HindⅢ and BanH 1 and the cDNA sequence was assayed by the Sanger dideoxymediated chain termination method. The segment was then transfected into the A549 lung cancer cell line. The protein expression of CC10 was detected by immunofluorescence and Western blot. Our results showed that the cDNA fragment included the entire coding region （273 bp）. The re combinant eukaryotic cell expression vector of pcDNA3. 1-hCC10 was successfully constructed, and the sequence of the insert was identical to the published sequence. A549 cells line transfected with the pcDNA3. 1-hCC10 expressed high level of CC10 protein. The recombinant plasmid cDNA3. 1- hCC10 may serve as an effecnve tool for the study of tumorogenesis and tumor treatment.     

miR-152通过靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系的增殖侵袭

目的:探讨miR-152通过靶向成纤维细胞生长因子2（FGF2）对肺癌A549细胞系的增殖和侵袭的作用机制。方法:通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549细胞中miR-152和FGF2的表达情况;采用转染技术,分别特异性表达肺癌A549细胞系中miR-152和FGF2基因的表达。将肺癌A549细胞系分为6组:miRNA 空转组（miR-NC组）、miR-152 过表达组（miR-152 mimics组）、miR-152 抑制组（miR-152 inhibitor组）、FGF2过表达空转组（pcDNA3.1-NC组）、FGF2过表达组（pcDNA3.1-FGF2组）和miR-152过表达+FGF2过表达组（miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组）。通过qPCR检测A549细胞系中miR-152和FGF2的表达水平;细胞克隆和Transwell小室实验分别检测A549细胞系的增殖和侵袭能力;采用双荧光报告基因法验证miR-152与FGF2结合情况;Western印迹法检测A549细胞系中FGF2、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）Ⅱ/Ⅰ、beclin1和p62的表达量。结果:qPCR结果显示,与正常上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌A549细胞中miR-152的表达量显著降低（P＜0.01）,而FGF2的表达量显著增加（P＜0.01）。TargetScan生物信息学软件预测显示miR-152与FGF2的3′UTR结合,双荧光报告基因检测结果显示,miR-152与FGF2直接结合。细胞克隆和Transwell小室实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimics组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著减低（P＜0.05）,miR-152 inhibitor组的增殖和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组中A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。Western印迹结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimic组FGF2和p62蛋白表达显著降低（P＜0.05）,但LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著增加（P＜0.05）,而miR-152 inhibitor组结果与之相反。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加（P＜0.05）,而LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著降低（P＜0.05）。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加（P＜0.05）,LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1蛋白表达量显著降低（P＜0.05）。结论:miR-152靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系自噬,从而降低增殖侵袭能力,可成为肺癌临床治疗的新靶点。